将干净盖玻片放于培养皿，0.1% 多聚赖氨酸液浸泡24 h，PBS缓冲液浸泡2 s后取出放入6孔板，每孔一张玻片。向每瓶加0.25% 胰蛋白酶液使细胞脱壁，分别加入20% 消高组、消低组、对照组及空白组培养基，将细胞浓度调至2×106/L制成细胞悬液，每组加入一6孔板中，每孔加入1 ml细胞悬液，放37℃ CO2培养箱培养48 h。第3天观察细胞贴壁状态，取出盖玻片，经10%多聚甲醛固定20 min后免疫组化用。
2.3 免疫组化SP法参照试剂操作说明书:在盖玻片上滴加去离子水(H2O2)1滴，常温放置湿盒中30 min。PBS缓冲液浸泡3次，5 min/次。滴加山羊封闭血清1滴，常温放置湿盒中30 min。甩掉血清，滴加目的一抗1滴，放湿盒中置4℃冰箱过液。PBS缓冲液浸泡3次，5 min/次。滴加二抗工作液1滴，放湿盒中置37℃电热恒温培养箱孵育15 min。PBS缓冲液浸泡3次，5 min/次。滴加链霉卵白液1滴，放湿盒中置37℃电热恒温培养箱孵育15 min。PBS缓冲液浸泡3次，5 min/次。DAB显色剂加1～2滴染色30 s，观察染色情况。清水冲洗10 min。苏木素加1滴染色5 min，清水冲洗10 min。盐酸酒精分化2 s，显微镜下观察，苏木素染色不满意可复染。细胞按50% 乙醇，70% 乙醇，95% 乙醇，无水乙醇的顺序脱水，每个浓度中浸泡5 min(无水乙醇分别浸泡两次)。二甲苯浸泡2次，每次5 min。中性树胶封片于载玻片上。
2.4 判断方法 依据阳性细胞所占比例分为3个等级：①阴性(-)，细胞膜无棕色染色或细胞膜染色阳性细胞数<10%;②弱阳性(±)，细胞膜浅棕色，阳性细胞数10%～50%;③阳性(+)，细胞膜棕黄色或棕褐色，阳性细胞数>50%。随机取10个高倍镜下视野，判断每个视野下细胞表达情况并记录。见图1～3。
a?PG细胞消瘤保肺丸高剂量组 b?PG细胞消瘤保肺丸低剂量组
c?PG细胞清肺化痰丸组 d?PG细胞空白组
图1 E-cadherin在肺癌PG 细胞各组的免疫组化表达(SP,400×)
a?PG细胞消瘤保肺丸高剂量组 b?PG细胞消瘤保肺丸低剂量组
c?PG细胞清肺化痰丸组 d?PG细胞空白组
图2 α-catenin在肺癌PG细胞各组的免疫组化表达(SP,400×)
a?PG细胞消瘤保肺丸高剂量组 b?PG细胞消瘤保肺丸低剂量组
c?PG细胞清肺化痰丸组 d?PG细胞空白组
图3 β-catenin在肺癌PG 细胞各组的免疫组化表达(SP,400×)
2.5 统计学处理采用SPSS 13.0统计软件处理，等级资料，以阴性、弱阳性及阳性表达的视野个数分别表示。统计方法选用秩和检验。
3 结果
见表1表1 人肺癌PG中E-cadherin、α-catenin及β-catenin阳性表达的视野个数统计
4 讨论
消瘤保肺丸是从众多方药中筛选出的有效方剂，由浙贝母、蜂房、北沙参、南沙参、黄芪等药物组成，功能化痰止咳、益气养阴、抗癌解毒。其中浙贝母清热化痰止咳、散结消痈;半夏不仅除湿化痰、发表开郁、降逆止呕，且具有消淤止血、消肿散结之功[4]。两药合用可使痰化郁开而咳止，同时兼具止血之功，黄芪补气升阳、益卫固表，补肺气之不足;南沙参、北沙参养阴清肺，益胃生津，可使肺热得清，阴津滋生，与黄芪共达气阴双补之功;百合、麦冬滋阴益肺，滋而不腻，补而不燥;黄芩清肺止咳;仙鹤草不但可提高机体免疫机能，还可防治肺癌咳血[5]。前期实验证实消瘤保肺丸能提高免疫抑制小鼠腹腔巨噬细胞的功能，临床观察表明可以提高机体免疫功能， 配合化疗可提高临床疗效， 减轻化疗引起的骨髓抑制[6]。本实验表明，消瘤保肺丸含药血清对粘附分子在人肺癌PG细胞中的表达均有影响，且P<0.01。其中E-cadherin在正常肺癌细胞的阳性表达率较低，说明E-cadherin的表达与细胞的转移能力呈负相关;α-catenin,β-catenin则相反。消瘤保肺丸对粘附分子的阳性表达影响优于空白组，表明消瘤保肺丸对PG细胞的侵袭、转移有明显的抑制作用。消瘤保肺丸高剂量组与低剂量组大多差异显著，表明此中成药的药量增高对PG细胞的干预作用更有意义。综上所述，消瘤保肺丸有明显的抗肿瘤侵袭、转移作用。