成体干细胞：成体干细胞的来源很多，包括造血干细胞、神经干细胞、间充质干细胞及表皮干细胞。成体干细胞具有分化成其他细胞或组织的潜能，大部分可以分化为至少2或3种以上其他的组织细胞。成体干细胞含量极微，很难分离和纯化，且数量随年龄增长而降低。 4、略
5、ES/EG细胞系的特征有哪些？P324
ES/EG细胞具有在体外无限或长期增殖和多向分化的潜能，能实现体外外源基团的导入和细胞嵌合，成为组织工程的一种理想种子细胞。ES/EG细胞系的特征如下：
15. 无限增值性：在不分化的前提下，ES细胞体外培养增殖迅速，每18~24h增值一次，细胞随着增殖次数的增加而活力并不减弱。
（四）分化潜能性：ES细胞是一种具有高度分化潜能的细胞，可以分化形成包括三个胚层在内的各种类型细胞。
? 种系传递性：将ES细胞注入囊胚后发育可获得嵌合体，并参与生殖细胞的形成。在嵌合体中一部分组织和细胞来源于受体囊胚细胞，而另一部分来源于ES细胞。
6.鉴定ES/EG细胞系的方法有哪些？ 答：ES/EG细胞的鉴定方法有以下几种 1.形态学特征
2.特异性标志分子的表达1）Oct-4 2）碱性磷酸酶 3）阶段特异性胚胎细胞表面抗原 4）其他表面标志分子 3.分化潜能的检测 4.嵌合体的形成
7.试述ES/EG细胞体外诱导分化的原理和方法，需要注意哪些问题？ 答：基本原理
(一)自发分化 自发分化是指ES/EG细胞在体外呈单细胞悬浮培养时，会形成由多种类型细胞线合的类胚体，在加入生长因子干预后能够增加某一类型细胞的相对数量。
(二)诱导分化 诱导分化是将ES细胞与不同类的细胞共培养或添加相应的生长因子能够诱导干细胞发生向单一类型细胞的定向分化。
(三)基因调控分化 基因调控分化是利用ES细胞的体外遗传特性可操作性，通过强化或抑制有些基因的表达来形成单一谱系所特有的基因表达形式，结合培养条件和诱导因子作用定向诱导ES细胞的分化。
方法:主要有基因外诱导和基因修饰
基因外诱导:1.诱导剂法2.序贯诱导法3.直接分化法
8.叙述干细胞技术,转基因技术,基因工程技术和细胞核转植技术之间的相互促进作用及在现代生物工程和医学工程中的应用前景. 答:略 第十六章
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16章
1.生产转基因动物的常用方法有哪些？各有何优缺点？
答：六种方法：（1）原核期胚胎的显微注射技术，优点：有外源基因长度不受限制，可直接用不含原核载体DNA片段的外源基因进行转移；实验周期相对较短。缺点：大动物原核胚的胚胎胞质中含有大量的泡状颗粒，影响其透光性，且显微操作技术含量较高，需要特殊的仪器并可能在注射过程中对胚胎造成损伤等；外源基因能否整合到受体基因组中，要等到子一代出生后经过选择才能确定，这对生育周期长，产仔少的大动物来说，效率就很低，而且整合位点随机，易造成宿主基因组内生命活动所必需的基因失活和导致胚胎或动物死亡；整合一般是指多拷贝首尾串联相接，不利于研究基因结构、功能及表达调控。（2）反转录病毒技术，优点：感染率高，易转染，操作简单，而且多数为单拷贝，并可稳定的整合到可识别插入位点。缺点：反转录病毒作为载体，其插入的外源基因最大不能超过10KB，并且容易产生嵌合体。另外，插入的外干扰源基因容易丢失，反转录病毒本身的DNA序列也会干扰外源基因的表达。还有反转录病毒在安全方面仍存在问题。（3）慢病毒载体技术，优点：高效的转染率和转基因的高表达。缺点：插入外源基因需小于8.5kb和插入突变，经传代整合后所得原病毒DNA易发生甲基化，影响外源基因表达。（4）精子载体技术，优点：简单易行，直接可以用精子作为外源DNA载体进行基因转移。可以对大量的精子细胞进行处理，不损伤卵母细胞，在短时间内生产转基因胚胎，而且整合率高，成本低。缺点：结果不稳定，有的外源DNA并未整合到宿主的基因组中，而是以附加体的形式存在于染色体之外，由于存在于正常的细胞有丝分裂中，附加体丢失的概率很高。（5）体细胞核移植转基因技术，优点：动物转基因效率大幅提高，体细胞克隆技术可将基因整合和生产胚胎分开操作，有利于使用基因打靶技术。缺点：克隆技术的效率有待提高。（6）胚胎干细胞介导技术，优点：可以将外源基因整合到细胞的染色体组中，然后把这些干细胞经过筛选，找到理想的干细胞，大大减少了整合突变率，还可以消除随机整合产生的位置效应的影响。 2．显微注射法生产转基因小鼠有哪些步骤？需要注意哪些问题？
答：目的基因的准备，公母鼠的准备，受精卵的获取和培养，显微操作，卵的移植。卵母细胞受精后出现雌原核和雄原核，应挑选大而清晰的原核，这样可避免显微注射时对核仁的损伤，这对显微注射的成功与否非常重要。显微注射时应控制注射量，注射量不足影响整合率，但注射剂量过多时，容易引起卵膜破裂。 3.鉴定转基因动物的方法有哪些？ 答：
4.何为纯合子转基因小鼠？如何获得纯合子转基因小鼠？
经检测获得阳性Founder小鼠（首建鼠），然后将阳性Founder小鼠与同一品系的正常小鼠交配，检测F1代阳性率，当繁殖到阳性率为50%左右时基本上可以判断出外源目的基因为单一位点的整合。经过扩大繁殖，从中选择外源基因表达效果好，适应性好的转基因小鼠进行同胞兄妹交配，建立遗传基因小鼠近交系
5.基因打靶技术的应用范围有哪些？
（1）、研究基因功能;（2）、基因表达调控研究;（3）器官称植;（4）、人类疾病模型;（5）、
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基因药物开发;(6)动物品种改良。
6.基因打靶法联合体细胞核移植法生产转基因动物有何优越性？还有那些技术障碍？ 优越性：（1）、动物转基因效率大幅度提高;（2）、体细胞克隆技术可将基因整合和生产胚胎分开操作，有利于使用基因打靶技术;（3）、使用基因打靶技术，可以使消除基因位置效益，以达到高效表达的目的;两者相配合，将会大大促进这项技术的产业化，是未来生产动物乳腺反应器的希望和必然趋势。技术障碍：克隆技术的效率比较低，克隆胚胎移植后的流产率相当的高，有时高达80%。
7.何为乳腺生物反应器？应用范围有哪些？
所谓乳腺生物反应器是指目的基因在血液循系统或乳腺中表达的转基因动物。应用范围：生产高附加值蛋白质方面，如治疗性抗体、血清蛋白、营养蛋白和工业蛋白，抗出血性药物，抗凝血药物，血栓治疗药物，肺气肿治疗药物，免疫治疗药物，人源单克隆抗体的制备，乳汁成分的改造
第十七章
1 什么是染色体工程？动物染色体工程主要包括哪些方面的内容？
染色体工程是人们按照一定的设计,有计划地消减、添加或替换同种或异种染色体,从而达到定向改变遗传性和选育新品种的一种技术.
动物染色体工程主要包括单倍体育种、多倍体育种、染色体的显微操作技术及人工染色体技术等。
2 动物染色体加倍主要有哪些技术？ 比较它们各自的特点及其适用对象？
凡雌核发育的个体,都具有纯母系单倍体染色体组，因此，雌核发育的生命力,依赖于卵子染色体组的二倍体化.
3什么是雌核发育？什么是雄核发育？分析雌核发育于雄核发育在动物单倍体育种中的作用？
雌核发育 俗称假受精:指精子虽然正常地钻入和激活卵子,但精子的细胞核并末参与卵球的发育,精子在染色体中很快消失，胚胎的发育仅在母体遗传的控制下进行的一种发育方式。 雄核发育 是指因经过紫外线、X射线或γ射线处理后的卵子与正常的精子受精,再在适当时间施以冷、热、高压等物理处理,使进入卵子内的精子染色体加倍,而发育成完全为父本性的二倍体.
4 分析比较几种人工诱导雌核发育方法的原理及其特点？ 1、 精细胞的遗传物质失活
2、 阻止雌性个体染色体数目的减少 优点:廉价、易操作,也适合大规模生产使用. 关键技术:能否成功阻止第一次成熟分裂或第二极体的排出.
5如何鉴别雌核发育动物？
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(1)通常以颜色、形态和生化等方面的指标为根据. (2)通过细胞学的研究能精确地判别雌核发育的个体. (3)运用遗传标志的方法来鉴别、雌核发育的二倍体.
6简述多倍体动物的鉴别方法？
一、间接法包括1核体积测量(细胞核大小与染色体数目成比例)2蛋白质电泳3生化分析4形态学检查二、直接法包括染色体计数法和DNA含量测定（流式细胞仪）
7简述染色体转移的常用手段？ 一、微细胞介导的基因转移法 二、染色体介导转移法 三、细胞核融合转移法
8 何为人工染色体？它主要的构成元件是什么？ 人工染色体：是指人工组建的具有染色体功能DNA分子。
真核生物染色体的主要功能组成部分除基因外，还有3个关键序列： 1自主复制DNA序列(ARS):染色体复制所必须的。
2着丝粒DNA序列(CEN)：着丝粒是有丝分裂过程中纺锤丝连接的那 段DNA. 3端粒DNA序列（TEL):是保持细胞内线状染色体完整所必需。
9 酵母人工染色体如何构建？ 它在基因组研究中发挥了何种作用？
他们从酵母基因组中分离到了着丝粒、自主复制序列及一些标记基因，双从四膜虫的大核rDNA的末端分离到了端粒，然后将这三部分及标记基因连在一起就构成了YAC。
YAC是目前容量最大的载体。缺点：插入片段大，稳定性较差。
10讨论人工染色体的应用现状及其发展前景
应用（一）基因组物理图谱构建和图位克隆（二）基因表达调控及其功能的研究 （三）基因组分析（四）乳腺生物反应器研究（五）医学领域的基因治疗
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