6、谈谈超低温保存的生物学意义。 答：
第十一章 植物的遗传转化技术（思考题） 1、植物基因转化的受体系统包括哪些？
答：包括：原生质体受体系统、悬浮细胞受体系统、生殖细胞受体系统、愈伤组织受体系统、胚状体受体系统、叶盘受体系统、整株活体受体系统。 2试述农杆菌Ti质粒基因转化的原理。
答：首先在下链25bp重复序列的右边界起第3和第4碱基间剪切，从缺口的3’端开始合成新的DNA链，并一直延伸到左边界第22bp处。置换出原来的下链，形成ssDNA，即T链。T链必须横跨越细菌细胞膜、细菌细胞壁、植物细胞壁、植物细胞膜及核膜才能整合进植物基因组。
3植物基因转化的方法有哪些？各自的特点是什么？
答：1）农杆菌介导法：受体类型广泛，简单易行、周期短、转化频率高，转化体常出现“嵌合”现象，影响转化频率的因素相对较少等。2）病毒介导法：特点是 病毒增殖水平较高、增殖速度快，基因组较小，宿主范围广，易于纯化等。3）基因枪转化法：适用范围广、无宿主限制、靶受体类型广泛、可控度高、操作简便、快速等。
4）电激法5）PEG介导法：特点是成本低廉、效果稳定6）花粉管通道法： 特点是方便易行，不需专门仪器和昂贵药品，直接得到转化的种子，受季节限制。7）显微注射法：特点是转化效率高，转化细胞的培养过程无需特殊的选择系统。 4. 在哪些水平上可以对转基因植株进行检测？方法如何？
答：（一）标记基因的检测。1.选择标记基因；2.报告基因。（二）目的基因整合水平的鉴定；1.PCR检测；2.电化学发光PCR技术；3.HRCA技术；4.Southern杂交。（三）目的基因转录水平上的检测；1.Northern杂交；2.RT-PCR。（四）外源基因翻译水平上的检测。1.ELISA检测；Western杂交。
5.什么是转基因植物？如何对转基因植物进行安全性评价？
答：转基因植物是拥有来自其他物种基因的植物。目前对转基因植物的安全性评价主要集中在环境安全性和食品安全性两个方面。 6.试述转基因植物在农业生产上的应用。
在农业生产上的应用主要有：1.抗除草剂转基因植物；2.抗虫转基因植物；3.抗病转基因植物；4.抗逆转基因植物；5.改良作物营养质的转基因植物。
第十三章
1、什么是细胞融合？细胞融合的方法有哪些？
细胞融合是指两个或两个以上来源相同或不同的细胞合并成一个细胞的过程。 细胞融合的方法：病毒诱导融合、化学诱导融合和电融合 2 细胞融合的原理与技术要点是什么?
原理是两亲本细胞的质膜发生融合形成对同一的质膜
21
3 根据当前细胞融合分子机制的研究进展，你认为有无可能实现利用基因转染得方式完成特定细胞的靶和融合？谈谈你的看法
4 试述杂交瘤技术生产MCAb的原理？
B淋巴细胞在抗原的刺激下，能够分化、增殖形成具有针对这种抗原分泌特异性抗体的能力。B细胞的这种能力和量是有限的，不可能持续分化增殖下去，因此产生免疫球蛋白的能力也是极其微小的。将这种B细胞与非分泌型的骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞，再进一步克隆化，这种克隆化的杂交瘤细胞是既具有瘤的无限生长的能力，又具有产生特异性抗体的B淋巴细胞的能力，将这种克隆化的杂交瘤细胞进行培养或注入小鼠体内即可获得大量的高效价、单一的特异性抗体。这种技术即称为单克隆抗体技术。 5 试述杂交瘤技术生产MCAb的主要技术过程？
淋巴细胞杂交瘤技术的主要步骤包括：动物免疫、细胞融合、杂交瘤细胞的筛选与单抗检测、杂交瘤细胞的克隆化、冻存、单抗的鉴定等 第十四章 1名词解析：
胚胎移植：是指对优秀雌性动物进行超数排卵处理，在其发情配种后，从其生殖道中取出发育到一定阶段的胚胎（早期胚胎）移植到与供体同时发情排卵、但未经配种的母畜(称为受体)的生殖道相应部位的技术。
超数排卵：在动物发情周期，用促性腺激素进行处理，诱发其卵巢上大量卵泡同时发育并排卵的技术称为超数排卵，简称超排。
同期发情：同期发情又称同步发情，就是利用某些激素制剂人为地控制并调整一群母畜发情周期的进程，使之在预定时间内集中发情。
胚胎冷冻：将胚胎和冷冻液装入冷冻管中，经过慢速（第2-3天的胚胎）和快速（第5-6天的囊胚）两种降温方式使胚胎能静止下来并可在-196度的液氮中保存的一种方法。
体外受精：就是将哺乳动物精子和卵子在体外人工控制的环境中受精过程的技术。 显微受精：是指借助显微操作仪将精子注入卵母细胞来实现受精的过程。 克隆动物：动物克隆是一种通过核移植过程进行无性繁殖的技术。
性别控制：是通过对动物的正常生殖过程进行人为干预，使成年雌性动物产出人们期望性别后代的一门生物技术。
2、简述胚胎的质量鉴定及分级方法。 质量鉴定：1、形态学鉴定
评定的主要内容：①卵子是否受精；②透明带的规则性；③胚胎的色调和透明度；④卵裂球的致密程度；⑤卵周隙是否有游离细胞或细胞碎片；⑥胚胎体身的发育阶段与胚胎日龄是不一致。
22
2、染色检查 1）荧光染色检查：
二乙酸荧光素染色（FDA）：活力越强的细胞显示出淡绿色的荧光越强；死亡或活力降低的细胞不发荧光或仅有微弱荧光
2）台盼蓝染色检查：有活力的细胞不着色，死亡细胞充满着台盼蓝着色颗粒。 3、体外培养法 分为四个级别：
A级：形态正常，卵裂球致密、整齐、清晰，发育阶段与日龄一致，无游离的细胞和液泡或很少，变性细胞比例小于10%。可用于胚胎移植。
B级：卵裂球稍微不匀，比较致密、整齐，可见一些游离的细胞和液泡，变性细胞比例占10%~30%。可用于胚胎移植。
C级：卵裂球不匀，变形，发育较慢，游离的细胞和液泡较多，变性细胞达30%~50%。 D级：卵裂球多数变形、异常，发育缓慢，变性细胞占胚胎大部分，约75%。
3、常用的胚胎采集方法有哪些？ 答：手术法
4、简述胚胎移植的方法及操作步骤
答: 胚胎移植的方法有手术法和非手术法两种，可根据受体动物品种及移植目的不同选择使用。
（一）牛的胚胎移植 1、手术移植
先将受体母牛做好术前准备。在右腹部切口，找到有黄体侧子宫角，再把吸有胚胎的注射器或移卵管刺入子宫角前端，注入胚胎，然后将子宫复位，缝合切口 2、非手术移植
（1）、非手术移植一般在发情后第6~9天进行，过早移植会影响受胚率。 （2）、在非手术移植中采用胚胎移植枪和0.25mL细管移植的效果较好。
（3）、将装有胚胎的吸管装入移植枪内，通过子宫颈插入子宫角深部，注入胚胎。 （4）、非手术移植要严格遵守无菌操作规程，以防生产殖道感染 （二）羊的胚胎移植 1、常规手术法
? 对受体羊进行常规手术，在乳房前的腹中线部做一切口，然后引出输卵管或子宫角。 ? 通常将发育在3.5天内的胚胎移入输卵管，发育到3.5天以后的胚胎移入子宫角。 ? 胚胎一般应移入有黄体一侧的子宫角内 2、简易手术法
? 用手术刀在母羊后肢内侧的鼠蹊部做1.2~1.5cm的切口，插入食指，找到子宫角，
23
插入手术刀柄，用食指和手术刀柄夹出子宫角，然后用移植针进行移植。
3、非手术法
? 用阴道扩张器，将移植导管通过子宫插入到子宫角植入胚胎。此法尚不可靠，成功
率低。
4、腹腔镜法
? 先对羊进行全身麻醉，而后从腹部插入腹腔镜，用特制的镊子夹住子宫角，并将其
轻轻提起，然后将胚胎注入子宫角。
5、常用的胚胎冷冻方法有哪些？
答：冷冻方法：（1）常规(逐步降温)冷冻法（2）玻璃化冷冻法 （3）一步(快速)冷冻法
6冷冻胚胎的质量如何判定？
答：一、形态学鉴定 二、染色检查 三、培养鉴定 四、移植检验
7、 如何进行卵母细胞的体外培养?
答：卵母细胞的成熟培养系统可分为：开放培养系统、微滴培养系统和密闭培养系统。（未确定）
8、 简述精子体外获能的方法？
答：一、血清白蛋白法 二、高渗透法 三、卵泡液孵育法 四、Ca载体法 五、肝素法
9、试述胚胎的体外培养方法
10.试述动物克隆技术的原理？
答：只有具备细胞全能性和可逆性两个条件才能进行动物克隆。所谓细胞全能性是指细胞包含了个体的全套遗传信息；可逆性是指细胞具有回复到发育零点状态的潜能，在特定环境因素的调节下，可回复到受精卵状态，并可发育成一个完整的生物个体。
11、简述胚胎克隆的过程
12、如何看待克隆动物的伦理问题？P309
首先，违背了伦理学的自主原则，被克隆者作为人所享有的独特性被粗暴地剥夺了。 再次，克隆人违背了伦理学的平等原则。
最后，社会学上克隆人与供体者的关系，克隆人身份、地位、家庭观念、克隆人的权利、婚姻及克隆的不确定性等将是社会不稳定的潜在因素，还可能扰乱征程的进货规律，干扰性
2+
24
别比例等。
13、试述体细胞克隆动物的制作过程？
14、动物性别控制与鉴定的方法有哪些？
1、免疫学分离法:利用H-Y抗体检测精子质膜上是否存在H-Y抗原 2、离心分离法：X精子DNA含量略大于Y精子。 3、电泳分离法：Y精子带负电荷略小于X精子
4、流式细胞分离法:用流式细胞分离器分离X精子和Y精子(DNA含量差异) 5、化学药品处理法：X、Y精子嗜酸碱性不同
胚胎性别鉴定
1、细胞生物学方法:主要是通过核型分析对胚胎进行性别鉴定 2、生化分析法——胚胎H-Y抗原检测法
3、分子生物学方法:主要是通过PCR扩增Y染色体性别决定区的Y基因(SRY)来进行胚胎性别鉴定.
4、X染色体相关酶分析法
2. 十五章课后习题
1. 干细胞和干细胞技术的含义是什么？
答：干细胞是指具有无限或较长期的自我更新能力，并能长生至少一种高度分化子代细胞的细胞。 干细胞技术：
2. 按照细胞发育潜能可将干细胞分为几类？根据细胞来源可分为几类？ 答：发育潜能：全能干细胞，多能干细胞，专能干细胞
来源：成体干细胞：普遍认为成体干细胞是成体组织内具有自我更新及分化产生1种或1种以上子代组织细胞的末成熟细胞,如造血干细胞、神经干细胞、皮肤干细胞、生殖干细胞。
胚胎性干细胞：是一种全能干细胞，是从着床前胚胎内细胞团或原始生殖细胞经体外分化抑制培养分离的一种全能性细胞系，可以分化成任何一种组织类型的细胞。能在体外进行培养、传代，并在一定条件下保持末分化的二倍体状态及其全能性，具有形成嵌合体动物的能力。 3、试述ES细胞和成体干细胞的的特点？
ES细胞：ES细胞一般是从发育早期的胚胎内细胞团中分离培养出来的一种具有自我更新、无限增殖能力、能分化成代表3个胚层组织细胞能力的干细胞，细胞直径为12~15微米，细胞集落特征明显。
25