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剂对病毒灭活试验的一个重要因素[4]。牛血清主
要靠其中的α2珠蛋白和清蛋白促进细胞生长,靠α2球蛋白和β2脂蛋白G2促进细胞贴壁,并可解除脂肪酸胰酶及金属离子等的毒性作用[5]。牛血清对消毒效果有双重影响,一是保护微生物,使其免受理化因子的影响;二是起到消耗消毒剂的作用[6]。试验中,我们发现稀释液中较高浓度的牛血清可使消毒剂对细胞的毒性作用降低,使细胞的生存率直线增高。表3显示,当有效碘含量为2000mg/L时,随着有机物的增加,细胞的生存率由50%上升至100%;当有效碘含量为3000mg/L时,随着有机物的增加,细胞的生存率由0上升至100%。有机物的增加直接影响到对病毒的灭活效果,导致病毒的灭活对数值降低。如表4所示,有机物的浓度由10%上升至20%时,消毒剂作用15min,灭活对数值下降0.62,作用30min,灭活对数值下降0.63。因此,我们认为掌握稀释液中牛血清的适宜浓度非常重要。
经多次试验,强力碘、碘伏、碘酊、复方氯己定、
(上接第300页)
复方季铵盐类消毒剂对病毒的灭活对数值始终
<4.00,这有待进一步研究。
(在研究中,我们得到了军事医学科学院消毒检测中心、中国CDC环境所消毒检测中心的指导帮助,得到了黑龙江省CDC计划免疫所的协作、配合与支持,再次表示衷心感谢!)
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6把待检样品中所有的DNA(或RNA)扩增。因此,扩增,因此,与以,检测范围有了很大的扩增。
导致呼吸道急性感染的病原很多,包括流感病毒、鼻病毒、腺病毒、冠状病毒、合胞病毒等。现有的免疫学或分子生物学方法都很难直接确定病原体。有人用基因芯片技术做了初步的尝试,如针对流感病毒[5]、乙肝病毒[6]的检测,但都只是在已知病毒种类的前提下进行亚型的分析,尚未有人构建过直接检测多种呼吸道病原体的芯片。我们对待检样品先进行随机扩增,然后通过芯片杂交检测,获得了预期的结果。虽然未采用针对流感病毒的PCR扩增引物,而且甲型流感病毒1和乙型病毒在遗传背景上同源性比较高,但从我们的结果还是可以看出两者得到了正确的鉴定。表明此方法是有可能用于呼吸道感染相关病毒的检测。
我们所用的检测技术,由于引物是随机引物,就灵敏度而言,肯定不如传统的采用特异引物扩增的芯片技术灵敏度高,但是,基于传统PCR扩增技术的芯片检测,与一般的PCR技术一样,由于灵敏度过高和PCR产物污染等原因,存在假阳性问题。而
,扩增过程中是将样品中所有RNA平行扩增,并未将某一病毒片段过度富集,因此出现假阳性概率会比基于传统PCR技术的芯片检测方法低得多。但是,由于所用引物在扩增时没有特异性,也必然导致扩增效率低,因此检测灵敏度也相应会下降。
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