分析化学(FENXIHUAXUE) 研究报告第5期
2001年5月ChineseJournalofAnalyticalChemistry522～525第29卷
固相萃取高效液相色谱法测定水中痕量微囊藻毒素
张维昊 徐小清3
(中国科学院水生生物研究所,武汉430072)
摘 要 微囊藻毒素是有害的蓝藻水华释放的有毒代谢物,对人类及环境具有很大危害性。建立了固相萃取2高效液相色谱测定水中痕量藻毒素的方法。该法对两种常见微囊藻毒素MC2、MC2RR的检测限为0.02～0.05μg/L,线性定量范围为0.1～50μg/L。应用该法分析了天然水样,关键词 微囊藻毒素,固相萃取,高效液相色谱
1 引 言
(harmfulalgalbloom,HAB)的频繁
1。微囊藻毒素(microcystins,MC)即为有害的蓝藻水华释放的,已发现60多种异构体。蓝藻水华及其毒素已列为微生物和有机污染
2〕
物的检测项目〔。并已有国家推荐水中微囊藻毒素的安全浓度为1μg/L。我国自80年代就对微囊藻
3〕毒素的毒性做过研究〔,而对于水体中微囊藻毒素的检测,由于含量低、干扰大,目前还未有可靠的定性
3～9〕
和定量检测方法的报道。本文在综合国外文献〔的基础上,结合国情,建立了固相萃取(SPE)高效液
相色谱(HPLC)检测水环境中痕量藻毒素的分析方法,并用于实际样品分析,取得满意结果。
2 实验部分
2.1 仪器和试剂
LC2890A型高效液相色谱仪(北京星达技术公司),配有S23702型紫外2可见光检测器(日本相马公
司),LC2850型柱室恒温箱;色谱数据工作站,HypersilBDSC18分析色谱柱(4.6×250mm,5μm),C18保护预柱,C18固相萃取柱(100g/L)均为中国科学院大连化学物理研究所提供。
RE252A型旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂),250mL杯式滤器,0.45μm混合纤维素酯微孔滤膜
和0.45μm针头过滤器。
微囊藻毒素标样为MC2LR,MC2RR(Sigma公司),三氟乙酸(化学纯,上海化学试剂公司),甲醇(
色谱纯,上海化学试剂研究所),双蒸水。2.2 色谱分析条件
流动相为含0.1%三氟乙酸的水溶液∶甲醇=30∶70(V/V),流速1mL/min,进样量10μL,色谱柱恒温箱设为25℃,紫外检测波长为238nm,实验依据保留时间定性,外标法定量。2.3 储备液和标准液配制
分别将0.500mg微囊藻标准品溶于2.00mL甲醇中,作为储备液。用前再以甲醇稀释配制成标准系列。2.4 样品制备
取水样500mL,于杯式滤器中经0.45μm滤膜减压过滤。滤液中加10mL甲醇调节后过C18反相固相萃取柱。C18反相固相萃取柱用前以10mL甲醇活化并用20mL双蒸水调整。将水样以5～10mL/min的流速流过固相萃取柱进行富集浓缩。装样完毕后,用5%甲醇水溶液10mL淋洗以净化样品,待固相萃取柱吹干后,以4mL甲醇将微囊藻毒素洗脱并经针头过滤器过滤后收集于浓缩瓶内。洗脱液用旋转蒸发器蒸发至0.2～0.5mL,氮气吹干后于-20℃冷冻保存。分析前用甲醇溶解,定容为0.20
2000207203收稿;2001201215接受
本文系国家科技部与云南省政府资助课题(课题号:DCH201)