第5期张维昊等:固相萃取高效液相色谱法测定水中痕量微囊藻毒素5 23
mL。
3 结果与讨论
3.1 流动相的选择
国外文献中流动相通常用乙腈及磷酸盐缓冲液,并进行梯度洗脱,不仅毒性大、成本高,且容易堵塞色谱柱,对仪器要求高。本文以甲醇2水配制流动相,以三氟乙酸调节pH值并进行等度洗脱,降低了分
析成本,实验后色谱柱易清洗,并减少了对操作人员的危害。3.2 线性范围和检测限
将MC2LR和MC2RR标准品逐级稀释配制成0.25、0.50、1.25、2.50和0L系列质量浓度,在色谱分析条件下依次测定,以峰面积(Xμ,V ,g),回归方程、s)(Yμ线性范围及相关系数列于表1。在信噪比(S/N)为3,ng。
表1 校准曲线回归方程及其参数(n=5)Table1 Regressienequationsofthen=5)
毒素
Toxins
Macrocystins(MC)2LR
MC2CR
(g/mL)2.5×10-7～2.5×10-52.510
-7
回归方程
Regressionequation
Y=1.17X-0.03Y=0.88X-0.33
相关系数
Correlationcoefficient(r)
0.99870.9983
～2.5×10
-5
313 样品处理的优化
3.3.1 SPE柱的选择 对比了不同品牌C18反相固相萃取柱(德国ChromabondC18f,美国BoundElutJr.C18和大连化学物理研究所提供的ODSC18)对微囊藻毒素的提取率,发现它们之间的差异较小,平
均提取率均超过90%。最后选择了价格较低的ODSC18柱进行微囊藻毒素的固相萃取。
表2 不同固相萃取柱的提取率
Table2 Extractionsofdifferentsolidphaseextraction(SPE)cartridges
固相萃取柱
SPECartridgeChromabondC18fBoundElutJr.C18ODSC18
毒素
ToxinsMC2LRMC2RRMC2LRMC2RRMC2LRMC2RR
μAdded(g)
0.140 0.280 0.5600.520 0.840 1.6800.140 0.280 0.5600.520 0.840 1.6800.140 0.280 0.5600.520 0.840 1.680
加入量
μRecoveryamount(g)
0.132 0.269 0.5380.486 0.782 1.5620.136 0.258 0.5420.478 0.786 1.5640.135 0.262 0.5280.482 0.786 1.568
回收量回收率
Recovery(%)94.3 96.1 96.193.5 93.1 93.097.1 92.1 96.891.9 93.6 93.196.1 93.6 94.292.7 93.6 93.3
平均回收率
AverageRecovery(%)
95.593.295.392.994.693.2
淋洗对提取率的影响(n=3)3.3.2 淋洗液的选择 分别用10mL的5%、表3
10%、20%的甲醇水溶液梯度淋洗SPE固定相以去
Table3 Theeffectofelutiononextraction(n=3)
淋洗液
除杂质。
发现较高浓度的甲醇水溶液淋洗会造成
藻毒素的流失,且随甲醇浓度增加而增加见表3。所以选用5%甲醇10mL溶液淋洗以净化固定相。3.3.3 洗脱液的选择 洗脱液是为了将分析物尽
量从固定相中洗脱以进行分析。文献报道用90%
的甲醇洗脱。但实验发现,该洗脱液会将一些杂质同时洗脱,造成色谱峰干扰严重。因此,用100%甲醇洗脱,减少了杂质干扰。3.4 色谱分离由于流动相的极性,pH值可在一定范围内改变分析物的保留时间,为尽可能减少对分析物色谱峰的干扰,选定了上述分析色谱条件,图1为标样和实际样品的色谱图。
提取率Extraction(%)3
ElutionsolventMCLRMCRR5%MeOH96.2±1.494.3±1.710%MeOH90.6±1.287.8±1.320%MeOH86.4±0.882.6±1.0 3加入的MC2LR和MC2RR分别为0.56μg和1.68μg(MC2LRandMC2RRadded:0.56μg,1.68μgrespectively)。