《蔗糖酶的提取及分级沉淀提取综合实验》部分思考计算
先预习综合性实验的P25~30以及P49~57；
一、熟练酶液蔗糖酶活力测定方法及计算
还原糖是分子中含有游离醛基或酮基的单糖或双糖，蔗糖经蔗糖酶酶解作用后，酶
解产物的还原糖含量可用3,5二硝基水杨酸比色法测定，与葡萄糖标准工作曲线比较定量计算。经公式换算可求出酶液中蔗糖酶活力。糖液中还原糖含量越高，说明蔗糖酶活力越大，可通过蔗糖酶活力的大小，评价酶的提取方法、酶纯化的结果等指标。 蔗糖蔗糖酶
葡萄糖果糖
酶液中蔗糖酶活力单位计算：
利用葡萄糖标准曲线，根据蔗糖被蔗糖酶酶解3分钟后反应液中还原糖的生成量来
计算。
设：已知葡萄糖标准工作曲线回归方程为：
y =1.56A+0.0051 (y：单位为mg；A：520nm吸光值)
已知：吸取酶解反应液0.2mL，比色法测得520nm波长吸光值A=0.670。
答案：13.13（U/mL）
若酶解反应液酶活力高，需稀释后才能检测，换算时注意稀释倍数的换算。
（2）若所提取酶液总体积为20mL，酶液总酶活力等于多少？
二、酶的分级沉淀提取
经酵母破壁提取的酶液除含有蔗糖酶外，还含有其他的杂蛋白，实验中蔗糖酶的分级沉淀提取是一除杂纯化过程。分级沉淀试剂可用乙醇或硫酸铵，加入酶液的沉淀剂浓度不同，不同种类的蛋白质在不同浓度的脱水剂体系中稳定性的不同，可达到除杂的目的。
加入适量的沉淀剂后，酶液经离心后均有沉淀物产生，沉淀物用缓冲液溶解后，测定溶解液的酶活力大小以及蛋白质含量，可评价沉淀物是以为主还是杂蛋白。若测定结果蛋白质含量高，但酶活力相对较小，说明此试剂浓度可除去部分杂蛋白未能有效提取蔗糖酶；继续提高试剂浓度，则可能达到有效提取蔗糖酶的目的。
学 答案：262.57(单位) 术部1求 ：（1）酶液蔗糖酶活力（U/mL）；(按51页计算公式计算) 整理