放在距电炉较远处),待内容物全部炭化、泡沫停止产生后→加大火力(或将烧瓶放在电炉上),保持瓶内液体微沸→至液体变蓝绿色透明后→继续加热微沸30min→关闭电炉,取下烧瓶、冷却→转移至100ml容量瓶中,加水定容 2 简述凯氏定氮法的基本原理?
样品与浓硫酸和催化剂一同加热消化,使蛋白质分解,其中碳和氢被氧化为二氧化碳和水逸出,而样品中的有机氮转化为氨与硫酸结合成硫酸铵。然后取消化液的全部加碱蒸馏,使氨蒸出,用硼酸吸收后再以标准盐酸或硫酸溶液滴定。根据标准酸消耗量可计算出蛋白质的含量。
3 凯氏定氮法操作中应注意那些问题?
答:(1) 试剂溶液应用无氨蒸馏水配制
(2)消化时不要用强火,应保持缓和沸腾,消化中不时转动凯氏烧瓶,以便冷凝酸液洗下附在瓶壁上的固体残渣,促进其消化完全。
(3)为加速消化,常加入硫酸钾提高消化体系溶液温度,硫酸铜催化剂、消化终点指示剂、蒸馏时碱性反应指示剂
(4)样品中若含较多脂肪或糖,在开始消化时应用小火加热,并时时摇动;或者加入少量辛醇或液体石蜡或硅油消泡剂,并同时注意控制热源强度。
(5)当样品消化液不易澄清透明时,可将凯氏烧瓶冷却,加入30%过氧化氢2~3ml后再继续加热消化。
(6)若取样量较大,如干试样超过5g,可按每克试样5ml的比例增加硫酸用量。
(7)一般消化至呈透明后,继续消化30分钟即可,一般消化时间约4小时,时间延长可能引起氨的损失。有机物如分解完全,消化液呈蓝色或浅绿色,但含铁量多时,呈较深绿色。
(8)蒸馏装置不能漏气
(9)蒸馏前若加碱量不足,消化液呈蓝色不生成氢氧化铜沉淀,需再增加氢氧化钠用量
(10)硼酸吸收液的温度不应超过40℃,否则对氨的吸收作用减弱,置于冷水浴中使用。
(11)蒸馏完毕后,应先将冷凝管下端提离液面,清洗管口,再蒸1分钟后关掉热源,否则可能造成吸收液倒吸。
4 双缩脲法测定蛋白质的基本原理?
当脲被小心地加热到150~160°事,可由两个分子同脱去一个氨分子而生成的双缩脲。反应如下
双缩脲在碱性条件下,能与硫酸铜作用生成紫红色的物质,称为双缩脲反应。
由于蛋白质分子中含肽键,与双缩脲结构相似,所以也能呈现此反应而生成紫红色配合物,在一定条件下其颜色深浅与蛋白质含量成正比,据此可用吸光度法来测定蛋白质含量。该物质在540~560mm波长有最大吸收。
5 双指示剂甲醛滴定法测定氨基酸态氮的基本原理?
氨基酸具有酸性的---COOH基和碱性的—NH2基,他们相互作用而是氨基酸称为中性的内盐。当加入甲醛溶液时,—NH2与甲醛结合,从而使碱性消失,这样就可以用强碱标准溶液来滴定—COOH基,并用间接的方法测定氨基酸的总量。
第十章 维生素的测定
1 三氯化锑比色法测定维生素A的基本原理是神马?主要操作步骤包括哪些?
在氯仿溶液中,维生素A与三氯化锑可相互作用,生成蓝色可溶性配合物,其颜色深浅与容易也中所含维生素A的含量成正比。该物质在620nm波长处有最大吸收峰,其吸光度与维生素A的含量在一定范围内成正比测定。
主要步骤: