选修1 生物技术实践 专题
参考资料
（2014〃新课标Ⅱ-云南）39．【答案】
（1）检测培养基平板灭菌是否合格 3.8×10 （2）灼烧； 将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落 （3）B
（4）溶解氧 营养物质
【解析】（1）为了确定培养基的灭菌是否合格，微生物学实验一般会设置空白对照：随机取若干灭菌后的空平板培养一段时间，观察培养基上是否有菌落生成；利用平板菌落计数法的计算公式估算水样中的活菌
7数：
（2）接种时接种环需要灼烧灭菌；在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线，这样做的目的是：通过划线次数的增加，使每次划线时菌体的数目逐渐减少，以便得到菌落。 （3）由题图可知B图为平板划线法接种的结果（菌落相对均匀分布）。
（4）震荡培养可以增加液体培养基的氧气含量，促进好氧型微生物的生长；另外震荡培养还可以使菌体与培养液充分接触，提高营养物质的利用率。 （2014〃新课标Ⅰ）39．【答案】
（2014〃海南）30．[生物——选修1：生物技术实践]（15分）
（1）①不同浓度亚硝酸钠标准溶液； ②不同泡制天数的泡菜滤液； ③样品管； 相同（相近）； （2）亚硝酸盐； （3）乳酸菌；
（2014〃广东）【答案】A【解析】醋酸杆菌酿醋时需要持续通气，即利用醋酸杆菌的有氧呼吸，不是无氧呼吸，故A错。
（2014〃上海）【答案】B【解析】利福平抑制细菌RNA的合成，使DNA和蛋白的合成停止，只能作用于细菌。而古细菌是一类很特殊的细菌，核糖体对氯霉素不敏感、RNA聚合酶和真核细胞的相似，其复制、转录和翻译接近真核生物；利福平也对酵母菌等真核生物无效，所以加利福平前后，古细菌和酵母菌中的RNA变化不大。 （2014〃山东）【答案】(1)碳源；显微镜直接计数(2)压榨；萃取（注:两空可颠倒)(3)固定化酶(4)(Taq)DNA聚合酶；(低温)复性(或退火)；(中温)延伸【解析】本题考查了微生物培养技术中培养基的配方、微生物计数、植物成分的提取、固定化酶和PCR技术的条件等内容。难度系数较小。（1）培养酵母菌时，玉米秸秆中的纤维素的水解产物为酵母菌的生长提供碳源。检测酵母菌数量可采用显微镜直接计数法或稀释涂布平板法计数。（2）玉米胚芽油不易挥发，宜选用压榨法或萃取法从玉米胚芽中提取。（3）利用固定化酶技术可使葡萄糖异构酶重复利用，从而降低生产成本。（4）利用PCR技术扩增葡萄糖异构酶基因时，需用耐
21
选修1 生物技术实践 专题
高温的（Taq）DNA聚合酶催化。PCR一般要经历三十次以上的循环，每次循环包括变性、（低温）复性（或退火）；（中温）延伸三步。 （2014〃四川）【答案】（1）氮源和无机盐 只有能利用苯磺隆的微生物能正常生长和繁殖（2）细胞分裂素 母液（3）接种环 ①接种环灼烧后未冷却；②划线未从第一区域末端开始（4）目的菌株能分泌降解苯磺隆的蛋白质。 不合理，缺少空白对照【解析】（1）微生物生长所需要的主要营养物质包括：碳源、氮源、水和无机盐。使用选择培养基是因为他是允许特定的微生物生长，同时又能抑制或阻止其他微生物的生长的培养基。（2）植物组织培养常需要添加的植物激素有生长素和细胞分裂素。MS培养基的成份一般先分别配制成母液备用。（3）平板划线法接种时常使用接种环划线。第二区域只有第一条线无菌落，而其他的划线却有菌落，很可能是因为接环在灼烧后末冷却，第一次划线时将菌种烫死，而后接种环冷却，能正常划线，也可能是第一次划线时划线未从第一区域末端开始，使接种环上无菌种。（4）题中实验为取得菌种培养液过滤后离心上清液，加入蛋白酶处理后，测得其对苯磺隆的降解率。意为假设菌种能产生降解苯磺隆的蛋白质类酶，若用蛋白酶处理后，可使该酶分解，苯磺隆降解率下降，则假设成立。但由于缺乏空白对照，不能比较蛋白酶是处理是否降低苯磺隆降解率，该实验不能得出相应结论。 （2014〃四川）【答案】（8分）（1）干热灭菌和湿热灭菌（高压蒸汽灭菌） 用牛皮纸（报纸）包扎器皿（2）抑制细菌（放线菌）生长 （3）① （4）接种环温度过高，菌被杀死（5）有助于研磨充分 不需要 β-胡萝卜素较耐酸
【解析】本题考查的是微生物的培养与分离。（1）灭菌常用方法有高压蒸汽灭菌、干热灭菌、灼烧灭菌等，培养皿常用高压蒸汽灭菌、干热灭菌。将培养皿放入灭菌锅之前通常用牛皮纸或报纸包扎避免灭菌后的再次污染。（2）青霉素能破坏细菌的细胞壁并在细菌的繁殖期起杀菌作用，因此添加青霉素可抑制细菌的生长。（3）乙连接软管为排（放）气阀，甲为安全阀，丙是压力表。（4）三块平板有两块平板长有菌落，说明含有菌株并可在培养基上生长；而其中一块未见菌落，说明菌株死亡。因此，应在接种过程中接种环灼烧后未冷却或未足够冷却，使菌株因温度过高被杀死。（5）石英砂有助于研磨充分。CaCO3用于中和酸性物质，β-胡萝卜素较耐酸，因此不需添加。 （2014〃大纲）【答案】C
【解析】以葡萄糖为碳源的培养基，不补充培养基，不除去代谢产物，随着营养物质的消耗和次级代谢产物的积累，大肠杆菌的生长环境不断恶化，生存阻力增大，因此种群数量达到稳定期后会出现衰亡期，故甲图对应②，反之丙图则对应①；若培养基里加入葡萄糖和乳糖，大肠杆菌先利用葡萄糖，葡萄糖消耗完以后，大肠杆菌会经过短期的调整，诱导合成乳糖苷酶，接着继续分解利用乳糖，最后衰亡，因此乙图对应③，故选C答案。 （2014〃上海）（1）【答案】C【解析】分离筛选出能分泌脂肪酶的细菌，有要在培养基中加入该特定的碳氮源，而分泌脂肪酶的细菌能在乳糖、酵母膏生长。 （2）【答案】蔗糖【解析】据表可知，当碳源为蔗糖时，酶活性最高，产脂肪酶菌株生长的理想碳源为蔗糖。 （3）【答案】
酶活性 第1组 第2组 第3组 平均值 0.6% / / / / 0.8% / / / / 1.0% / / / / 1.2% / / / / 1.4% / / / / 【解析】题目给定浓度为0.1%，要求设浓度梯度的差值为0.2%，要根据这一点来设定。 （4）【答案】方案二【解析】题目的要求是确定碳氮源浓度的最佳组合，所以在有碳源，又要有氮源。a和b组合后，就是看出碳源在何种浓度、氮源在何种浓度下生长最合适。
（5）答案】C由于需要其活性在固定化处理时不受损失，且在多次重复使用后仍能维持稳定的酶活性，
22
选修1 生物技术实践 专题
图中只有C组。
（2013〃海南）解答：（15分）
（1）干燥（1分） 不适合（1分） 水蒸气蒸馏法适用于分离挥发性物 质，而胡萝卜素为非挥发性物质，不能随水蒸气蒸馏出（3分） 纸层析（2分） 标准的胡萝卜素（2分）
（2）碱性蛋白（或蛋白）（1分） 氨基酸（1分） 小分子肽（1分） 脂肪（1分）
水温过低时酶活性较低，水温过高会使酶变性失活（2分） （2013〃新课标Ⅰ）【答案】（1）消灭杂菌 增加乳酸菌含量 （2）无氧呼吸 细胞质 （3）温度、食盐用量、腌制时间 （4）乳酸菌数量增加，杂菌数量较少 乳酸菌比杂菌更为耐酸 【解析】（1）盐水中可能含有杂菌，制作泡菜时，所用盐水需要煮沸，以便杀死盐水中的杂菌。陈泡菜中含有现成的乳酸菌，加入后，可以缩短制作时间。 （2）乳酸发酵的过程即为乳酸菌进行无氧呼吸的过程。该过程发生在乳酸菌细胞的细胞质基质中。 （3）都泡菜的制作过程中，影响亚硝酸盐含量的因素有温度过高、食盐用量不足、腌制时间等。 （4）从开始制作到泡菜品质最佳这段时间内，泡菜液逐渐发酸，这段时间内泡菜坛中乳酸菌数量增加，其他杂菌较少；原因是酸性条件下，不利于杂菌生存，增加乳酸菌的数量。【试题点评】本题通过考查泡菜制作的相关基础知识，主要考查识记能力和对相关知识的判断能力。
（2013〃新课标Ⅱ-云南）【答案】：（1）划线 稀释涂布（或涂布） （2）涂布 （3）敏感 不敏感 该致病菌对C的敏感性比对A弱 耐药菌 （4）A 【解析】：本题考查微生物的培养和应用。（1）分离菌落常用稀释涂布平板法或划线涂布法。（2）取该单菌落适当稀释，用涂布法接种于固体培养基表面，适宜温度培养。（3）含抗生素的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对该抗生素有敏感性，周围没有透明圈的说明该抗生素不具有敏感性。透明圈越大的敏感性越强。（4）实验结果抗生素A对该致病菌的作用最好。 （2013〃江苏）【答案】A【解析】固定化技术包括包埋法、物理吸附法和化学结合法（交联法），由于细胞相对于酶来说更大，难以被吸附或结合，因此多采用包埋法， A正确；某些反应产物可能与酶结合，致使酶的结构产生变化，从而改变酶的催化活性，B错误；固定化酶实质上是将相应酶固定在不溶于水的载体上，实现酶的反复利用，并提高酶稳定性，酶的各项特性（如高效性、专一性和作用条件的温和性）依然保持，C错误；固定化细胞在多步酶促反应中发挥连续催化作用，但如果反应底物是大分子物质，则难以自由通过细胞膜，从而限制固定化细胞的催化反应，D错误。【试题评价】此题考查固定化酶和固定化细胞的相关知识，难度不大。 （2013〃江苏）【答案】B【解析】在配制培养基的过程中要先灭菌后倒平板，A错误；转换划线角度后要对接种环进行灼烧灭菌再进行划线，B正确；接种后放置在恒温培养箱中进行培养，C错误；培养过程中一般要隔天观察一次，D错误。
（2013〃江苏）【答案】D【解析】醋酸菌是嗜热菌，果醋发酵所需的最适温度较高，A错误；进行果酒、果醋发酵实验，要先进行隔绝空气果酒发酵，再供氧进行果醋发酵，B错误；人工接种菌种单一，自然发酵菌群丰富，风味及品质更好，C错误；适当加大接种量，让菌体快速形成优势菌群，可以抑制杂菌生长，提高发酵速率，D正确。【试题评价】此题考查果酒、果醋发酵实验，内容基础，难度不大。 （2013〃四川）【答案】10.（1）限制性内切酶和DNA连接酶 淀粉 筛选出真正高效利用淀粉的工程酵母菌菌种（2）稀释涂布法 涂布不均匀 （3）工程酵母 工程酵母菌利用淀粉的速度很快，发酵产生CO2的速度也很快（4）小【命题思路】本题借“筛选可高效利用淀粉的工程酵母菌菌种”创设情境，实际考查《生物技术实践》中的微生物的实验室培养和蛋白质的提取和分离两个实验的原理或方法，属于选修部分的基础立意题。【解题方法】本题三道题都源于教材的相关基础设问，熟记相关知识即可回答。相对灵活的是⑶题，关键是审出“先排气”的准确含义，是指“发酵过程中首先排气”的意思，以此可知是高速利用淀粉的工程酵母菌，该酵母菌发酵时产生CO2的速度也很快。 （2013〃上海）（10分）
23
选修1 生物技术实践 专题
41.划线法/涂布法 固体 42.D 43.A、B 44.D （1）A培养液缺少氮源，SM01不能很好生长（2）B培养液缺少氮源，SM01不能很好生长；且有阿拉伯胶酶，会影响对SM01自身产生的酶活力的测定结果（3）C培养液缺乏阿拉伯胶酶催化底物阿拉伯胶，会影响SM01的生长，也无法对阿拉伯胶酶活力进行测定 （2013〃上海）【答案】（1）稀释涂布平板法 灭菌（防止杂菌污染）（2）碳源 氮源 （3）时间 水浴 滤去不溶物（4）(实验)对照
【解析】{1}微生物接种常用稀释涂布平板法和平板划线法，为了防止其它杂菌的污染，接种过程要进行无菌操作，接种前对接种环灼烧是为了杀灭接种环上的微生物。（2）蔗糖主要提供碳源，也可作为能源物质，硝酸盐含氮元素，可提供氮源。（3）胡萝卜素不是很稳定，温度过高，干燥时间过长会导致其分解，由于萃取剂往往具有挥发性，且易燃烧，如果直接加热挥发出来的有机溶剂遇明火易燃烧爆炸，萃取后需将原料中的固体物滤去。（4）用标准样品可以对照检查提取出来的胡萝卜素的纯度。 （2012〃新课标-云南）
（2012〃全国卷）
（2012〃重庆）
（2012〃山东）
（2012〃江苏）
（2012〃北京）【答案】C
【解析】植物组织培养中的外植体必须在严格的无菌环境中进行培养，而且操作的各环
24
选修1 生物技术实践 专题
（2012〃广东）【答案】（1）木瓜蛋白酶 由图可以看出，木瓜蛋白酶的活性不随pH的变化而变化 单位时间内底物消耗（产物产生） （2）课题：探究酶保护剂的最适浓度和提取液的最适pH
（2012〃海南）回答下列关于腐乳制作的问题：
（2012〃江苏）
（2012〃江苏）下列关于“DNA 粗提取与鉴定实验”的叙述，正确的是
（2012〃上海）(10分)回答下列关于微生物和酶的问题。
25