有功能的人类乙型肝炎病毒聚合酶的提纯与表达(3)

2019-08-29 21:46

的生产有功能的并且完整的人类HBV-POL是成功的。这种纯净形式的重组蛋白的可利用性,便于HBV-POL的结晶化和结构机制的详细分析,大量的有功能的人类HBV-POL的可利用性有助于高产的筛查检测药物的发展,对于CHB的治疗。

注释

HBV-POL是一个多功能的蛋白质,有内在的RNA依赖的RT,DNA依赖的DNA聚合酶和RNA酶的活性。在不同的系统中,HBV-POL的表达和纯化被许多困难限制。所以在大肠杆菌中表达人类完整的HBV-POL是急需的,并且表达中不能有分子伴侣或者其他物质陪伴。纯化的HBV-POL显示了稳定的RT活性和DNA聚合酶活性。功能性的HBV-POL将有助于潜在的药物发展,去治疗CHB。

研究领域

HBV是一个小的DNA病毒对人类健康有大的威胁,它依据前基因组RNA反转录进行复制。大多数治疗CHB感染被检验过的药物是HBV-POL的核苷酸反转录酶的抑制剂。HBV-POL的分析由于在重组系统中不能表达有功能的酶而受到限制。基于这个原因,我们应用了多种策略在大肠杆菌中大规模的生产有功能的并且完整的HBV-POL。

新观念和新突破

在大肠杆菌中表达人类完整的HBV-POL是急需的,并且表达中不能有分子伴侣或者其他物质陪伴。为了获得高水平

的重组HBV-POL,N-末端标记的6个组氨酸和Xpress抗原决定簇在HBV-POL的N末端融合。第二,靶蛋白最大限度的表达需降低感应温度,一个高浓度的还原剂应用到纯化过程中,保持HBV-POL可溶的形式,这种纯净形式的重组蛋白的可利用性,便于HBV-POL的结晶化和结构机制的详细分析。

应用

大量的有功能的人类HBV-POL的可利用性有助于高产的筛查检测药物的发展,对于CHB的治疗。

仔细回顾

这是一个很好的文献和文件,在大肠杆菌中全长的HBV-POL的表达与纯化,有希望的结果成为进一步研究的基础,对于治疗CHB药物的研究。


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