佛山市华普生药业有限公司 R-TS-VP-4001-00 唑阴性样品溶液5ml，再加盐酸溶液（9→1000）约75ml，微温使甲硝唑溶解，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液5ml，置200ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，照分光光度法，在277nm的波长处测定吸收度，按C6H9N3O3的吸收系数为377计算甲硝唑加入量，计算加样回收率。
（3）甲硝唑工作对照品：采用依照中国药典2015年版“甲硝唑”项下进行全检合格，标定纯度的甲硝唑原料药。
7.6.2方法确认接受标准：
A×40
（1）计算公式：工作对照品回收率%=—————×100% 377×WR
式中：A为回收率测试溶液的吸收度；
WR为工作对照品加入量（g）
（2）工作对照品回收率限度为99.0%～101.0%，回收率的相对标准偏差（RSD）限度为2.0% 7.6.3方法确认记录与确认结果
（1）电子天平 型号 编号 ，紫外分光光度计型号 编号 （2）甲硝唑工作对照品（湖北省宏源药业科技股份有限公司，批号：01120151028，标定结果纯度为100.0%）。 （3）项目确认结果
甲硝唑含量测定方法-----准确度确认结果
试验编号 1 2 3 4 5 6 工作对照品测得吸收加入量（mg） 度A值 48.9 0.462 50.3 49.3 50.6 50.5 49.6 0.472 0.468 0.479 0.474 0.469 测得甲硝工作对照品回唑量（mg） 收率% 49.02 100.24 50.08 49.66 50.82 50.29 49.76 99.56 100.73 100.43 99.58 100.32 100.14 0.47% 平均回收率% 回收率的RSD 项目确认结果: □通过 □不通过 检查人/日期： 复核人/日期 7.7甲硝唑含量测定方法精密度确认
7.7.1甲硝唑含量测定方法的精密度确认方法：
参照人工牛黄甲硝唑胶囊质量标准WS-10001-(HD-0204)-2002【含量测定 甲硝唑】项下方法，进行方法精密度的确认：
（1）人工牛黄甲硝唑胶囊成品甲硝唑含量测定溶液：精密取本品20151201批成品的内容物约59mg（约相当于甲硝唑50mg），置100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）约80ml，微温使甲硝唑溶解，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液5ml，置200ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀, 照分光光度法，在277nm的波长处测定吸收度，按C6H9N3O3的吸收系数为377计算甲硝唑含量。
（2）仪器吸收度读数重复性：取同一份含量测定溶液,在紫外分光光度上连续测定吸收度。 （3）甲硝唑含量测定的重复性：取20151201批成品，由同一人分别称取6份样品，进行含量
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佛山市华普生药业有限公司 R-TS-VP-4001-00 测定。
（4）甲硝唑含量测定的中间精密度：取20151201批成品，由甲实验人员称取6份样品，进行测定（即上述甲硝唑含量测定的重复性）；再由乙实验人员在不同的日期称取6份样品，进行测定。 7.7.2方法确认接受标准：
A×40
（1）计算公式：甲硝唑的绝对百分含量%=—————×100% 377×W
式中：A为溶液的吸收度；
W为样品称样量（g）
（2）仪器吸收度读数重复性：读数的相对标准偏差（RSD）限度为0.3% （3）甲硝唑含量测定的重复性：结果的相对标准偏差（RSD）限度为1.5% （4）甲硝唑含量测定的中间精密度：结果的相对标准偏差（RSD）限度为2.0% 7.7.3方法确认记录与确认结果
（1）电子天平 型号 编号 ，紫外分光光度计型号 编号 （2）仪器吸收度读数重复性：同一份溶液读数6次，结果如下： 测定次数 吸收度A 1# 0.470 2# 0.472 3# 0.472 4# 0.472 5# 0.472 6# 0.471 RSD 0.2% 确认结果: □通过 □不通过 检查人/日期： 复核人/日期 （3）甲硝唑含量测定的重复性：成品批号20151201 测定次数 称样量W(g) 吸收度A 百分含量 1# 0.0595 0.471 83.99% 2# 0.0592 0.465 83.34% 3# 0.0589 0.468 84.30% 4# 0.0596 0.478 85.09% 5# 0.0593 0.476 85.17% 6# 0.0592 0.481 86.21% 84.68% 1.2% 含量均值 含量测定的RSD 确认结果: □通过 □不通过 检查人/日期： 复核人/日期：
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佛山市华普生药业有限公司 R-TS-VP-4001-00 （4）甲硝唑含量测定的中间精密度 成品批号20151201
试验次数 称样量W(g) 吸收度A 百分含量 甲1 甲2 甲3 甲4 甲5 甲6 乙1 乙2 乙3 乙4 乙5 乙6 平均值 —— —— 含量测定的RSD —— —— 0.96% 0.0595 0.0592 0.0589 0.0596 0.0593 0.0592 0.0617 0.0613 0.0616 0.0574 0.0570 0.0581 0.471 0.465 0.468 0.478 0.476 0.481 0.491 0.493 0.490 0.456 0.456 0.457 83.99% 83.34% 84.30% 85.09% 85.17% 86.21% 84.43% 85.33% 84.40% 84.29% 84.88 83.46% 84.57% 确认结果: □通过 □不通过 检查人/日期： 复核人/日期：
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7.8甲硝唑含量测定方法耐用性确认
将7.2项下成品溶液、对照品溶液放置于室温，每隔一段时间测定吸收度，吸收度至少应在8小时内稳定。
甲硝唑含量测定---方法耐用性确认
溶液 吸收度A 时间 0hr 24hr 48hr 96hr 0.470 0.472 0.469 0.464 0.391 0.391 0.390 0.385 成品溶液 对照品溶液 确认结果: □通过 □不通过 检查人/日期： 复核人/日期： 7.9胆红素含量测定方法系统适用性确认 7.9.1胆红素含量测定方法系统适用性确认方法
参照人工牛黄甲硝唑胶囊质量标准WS-10001-(HD-0204)-2002【含量测定 胆红素】项下方法，进行高效液相色谱系统适用性确认：
（1）人工牛黄甲硝唑胶囊成品胆红素含量测定溶液：精密称取批号20151201的人工牛黄甲硝唑胶囊内容物约1.7g（约相当于胆红素0.2mg），置50ml棕色量瓶中，加氯仿-甲醇-水-盐酸（90：10:0.3:0.03）混合液约40ml，超声提取15分钟，取出，迅速冷却至室温，加上述溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。
（2）色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，流动相为甲醇-氯仿-1%磷酸溶液（81:13:6），检测波长449nm。
（3）取上述同一份含量测定溶液,连续6次进样测定，每次进样量均为20μl，记录色谱图。 7.9.2胆红素含量测定方法系统适用性确认接受标准
（1）主峰（胆红素峰）保留时间的相对标准偏差（RSD）限度为1.0% （3）主峰（胆红素峰）面积的相对标准偏差（RSD）限度为2.0% （4）主峰（胆红素峰）的理论板数应大于1500 （5）主峰（胆红素峰）的分离度应大于1.5
（6）主峰（胆红素峰）的拖尾因子应在0.9～1.1之间 7.9.3方法确认记录与确认结果
（1）电子天平 型号 编号 ，高效液相色谱仪型号 编号 （2）系统适用性确认结果如下：
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试验次数 保留时间 峰面积 理论板数 胆红素峰分离度 胆红素峰拖尾因子 1# 7.170 532540 2050 单峰（溶剂峰除外） 2# 7.165 531838 2035 单峰（溶剂峰除外） 3# 7.165 527900 2043 单峰（溶剂峰除外） 4# 7.159 529822 2037 单峰（溶剂峰除外） 5# 7.150 527145 2041 单峰（溶剂峰除外） 6# 7.169 526771 2042 RSD 0.1% 0.46% —— 单峰（溶剂峰除外） —— —— 1.08 1.08 1.08 1.08 1.08 1.08 确认结果: □通过 □不通过 检查人/日期： 复核人/日期 7.10胆红素含量测定方法专属性确认
7.10.1胆红素含量测定方法的专属性确认方法：
参照人工牛黄甲硝唑胶囊质量标准WS-10001-(HD-0204)-2002【含量测定 胆红素】项下规定，分别制备以下溶液，进行含量测定方法专属性的确认：
（1）胆红素对照品溶液：取胆红素对照品约10.0mg，精密称定，置100ml量瓶中，加氯仿溶解，定容至刻度，摇匀，精密量取1.0ml置25ml棕色量瓶中, 加氯仿-甲醇-水-盐酸(90：10：0.3：0.03)混合液稀释至刻度，制成每1ml中含胆红素约4μg的溶液，即得。
（2）样品提取溶剂：氯仿-甲醇-水-盐酸（90：10:0.3:0.03）的混合液
（3）人工牛黄甲硝唑胶囊成品溶液：取20151201批本品的内容物约1.7g（约相当于胆红素0.2mg），精密称定，置50ml棕色量瓶中，加氯仿-甲醇-水-盐酸（90：10:0.3:0.03）混合液约40ml，超声提取15分钟，取出，迅速冷却至室温，加上述溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。。
（4）人工牛黄阴性样品溶液：按照人工牛黄甲硝唑胶囊工艺处方的比例，除人工牛黄不称取外，称取甲硝唑1.45g，淀粉0.145g，二氧化硅0.072g共置50ml棕色量瓶中，加氯仿-甲醇-10%盐酸（50：50:0.3）混合液约40ml，超声提取15分钟，取出，冷却至室温，加上述溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。
试验方法：
精密吸取上述溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。
7.10.2方法确认接受标准：（1）人工牛黄甲硝唑胶囊成品溶液主峰保留时间与胆红素对照品溶液主峰保留时间一致（相对偏差不超过0.5%）；
（2）人工牛黄阴性样品溶液、样品提取溶剂在胆红素峰保留时间处均应为平直基线，无吸收峰。 7.10.3方法确认记录与确认结果
（1）电子天平 型号 编号 ，高效液相色谱仪型号 编号 （2）胆红素对照品称样量：9.90mg （3）人工牛黄甲硝唑胶囊内容物称样量： 批号 20151201 ，称样量 （4）项目确认结果
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