情时分泌增强。
(2)阴唇、阴蒂:阴唇分左右两片而构成阴门,两片阴唇的上端及下端联合起来形成阴门上角和下角。马的阴门上角较尖,阴门下角较圆;牛、羊及猪的阴门相反,下角较尖,呈锐角,且垂至坐骨弓的下面。在阴门下角内包含有球形凸起物即阴蒂,由勃起组织(海绵体)构成,有丰富的感觉神经分布。阴蒂与雄性龟头同源。
6.子宫动脉(子宫中动脉) 牛的子宫动脉位于岬部之前、最后腰椎处,与脐动脉共同起源于髂内动脉,沿子宫阔韧带走向子宫角小弯进入子宫。马的子宫动脉起于髂内动脉之前的髂外动脉,或者与髂外动脉共同起于腹主动脉,它沿子宫阔韧带的中部行走,到达子宫角小弯而进入子宫。子宫动脉向前与卵巢动脉子宫支,向后与尿生殖动脉子宫支吻合。 四、实验报告
通过观察和比较说明牛羊猪公、母生殖器官的形态、大小、相互关系和大体构造以及在活体上的位置有何特点。
实验二 公畜睾丸、母畜卵巢组织学及精子发生、卵泡发育过程的观察
一、目的要求
通过观察家畜睾丸和卵巢组织切片,了解家畜睾丸、卵巢的组织结构及其形态。掌握精子的发生和卵子的发生、卵泡的发育过程及其形态,为学习家畜繁殖学及更好地掌握和应用繁殖技术奠定组织学基础。 二、材料和方法
(一)材料 公畜睾丸,母畜卵巢组织切片及挂图 (二)器械 显微镜 三、内容和步骤
(一)公畜睾丸的组织学观察
教师先结合挂图进行讲解,使学生对公畜睾丸、母畜卵巢组织学结构及精子发生、卵泡发育过程有了初步的了解。然后再用显微镜观察睾丸、卵巢组织切片。
1.低倍镜观察
(1)被膜 由浆膜和白膜构成。外层浆膜为一较薄的固有鞘膜,其下为致密弹性结缔组
织构成的白膜,其中富有血管。白膜下为实质部分,即睾丸的功能层。内层白膜
(2)睾丸纵隔和中隔 睾丸纵隔是白膜由睾丸的一端伸向睾丸实质的结缔组织索。睾丸中隔是纵隔向四周发出许多放射状的结缔组织小梁伸向白膜构成。
(3)睾丸小叶 睾丸中隔将睾丸实质分成许多小叶,小叶的尖端朝向中央,小叶的基部朝向睾丸的表面。每个小叶由2~3条盘曲的曲精细管及血管和间质细胞组成。曲精细管在各小叶的尖端先各自汇合成直精细管,穿入睾丸纵隔结缔组织内,形成弯曲的导管网,称为睾丸网(马无此结构),为精细管的收集管道。睾丸网又分出12~15条睾丸输出管,汇入附睾头形成附睾管。
2.高倍镜观察
睾丸小叶的结构由曲精细管及其间质细胞构成。此外,还有血管、淋巴管等。 (1)间质细胞 体积较大,分布于曲精细管之间,近似卵圆形或多角形,核大而圆。具有分泌雄激素的功能。
(2)曲精细管的结构 曲精细管的管壁自外向内由同心圆状排列的结缔组织、基膜和复层生殖上皮构成。生殖上皮细胞主要由足细胞和生精细胞两种细胞构成。
(3)足细胞 又称Sertoli细胞、支持细胞、营养细胞。体积较大而细长,数量较少,属体细胞。呈辐射状排列在曲精细管中,分散在各期生殖细胞之间,其底部附着在曲精细管的基膜上,游离端朝向管腔,常有许多精子镶嵌在上面。该细胞高低不等,界限不清,细胞核较大,位于细胞的基部,着色较浅,具有明显的核仁,但不显示分裂现象。由于它的顶端有数个精子伸入胞浆内,故一般认为此种细胞是对生精细胞起着支持、营养、保护等作用。足细胞失去功能,精子便不能成熟。
(4)生精细胞 数量比较多,成群的分布在足细胞之间,大致排列成3~7层。根据不同发育阶段的形态特点又可分为:精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精细胞和精子。
①精原细胞 位于最基层,紧贴基膜。细胞体积较小,呈圆形,常有分裂现象,是精子生成的干细胞。细胞质比较清亮,细胞核大而圆,富含染色质,因而着色较深。
②初级精母细胞 位于精原细胞上面,排成几层,常显示有分裂现象。细胞体积较大,呈圆形,细胞核呈球形,富有染色质,故着色较深。分裂时,因染色体所处不同的活动时期而呈线状、棒状或粒状。在最初阶段与精原细胞不易区别。随着细胞离开基膜向管腔移动,同时胞浆不断增多,胞体不断变大,具有明显的胞核。
③次级精母细胞 位于初级精母细胞的内侧,体积较小,细胞呈圆形。细胞核为球形,
染色质细粒状。由于该细胞很快分裂为两个精子细胞,因而在切片上很难找到它。
④精子细胞 位于次级精母细胞内侧,靠近曲精细管的管腔,常排列成数层。并且多密集在足细胞游离端的周围,细胞体积更小,胞浆少,核呈球形,着色深。
⑤精子 位于或靠近曲精细管的管腔内。有明显的头和尾,呈蝌蚪状。头部含有核物质,染色很深,常深入足细胞的顶部胞浆中。尾部朝向管腔。精子发育成熟后脱离曲精细管的管壁,游离在管腔中,随后进入附睾。精子是一种独特的细胞,不含细胞质。成熟后还有前进运动的能力。
3.精子发生过程 精子发生过程可分为明显的两个时期。第一时期,精原细胞经一系列分裂形成精子细胞。第二时期,精子细胞变形成为精子。精子发生整个过程的完成需要近两个月的时间。
(二)母畜卵巢的组织学观察 1.低倍镜观察
在低倍镜下找出卵巢表面上皮和白膜,区分卵巢的皮质部和髓质部。
(1)表面上皮 位于卵巢皮质的最外层,在幼年家畜为单层柱状或立方上皮细胞所组成,随着年龄增大,这些细胞变成扁平细胞。马卵巢表面上皮仅分布于排卵窝。其余部分被浆膜覆盖。
(2)白膜 位于表面上皮之下的一薄层致密结缔组织。
(3)皮质部 位于白膜下面、卵巢的外周部分(马的则位于卵巢中央靠近排卵窝处)。由许多大小不等的发育卵泡和闭锁卵泡、少量黄体以及较致密的结缔组织所构成。占卵巢的大部分,与髓质无明显界限。由于皮质部含有卵泡和产生卵巢激素的细胞,故也称“功能层”。
(4)髓质部 位于卵巢中央(马则在卵巢周围)。内含有许多细小的血管、神经和富有弹性纤维的疏松结缔组织。
2.高倍镜观察 (1)卵泡发育的观察
每个卵泡都由位于中央的卵母细胞和围绕在卵母细胞周围的卵泡细胞所组成。有的卵泡在发育过程中可能退化而形成闭锁卵泡。卵泡可根据发育程度不同而分成下列五期。
①原始卵泡 卵原细胞有丝分裂增殖停止,形成初级卵母细胞。初级卵母细胞进入第一次减数分裂不久休止在前期的双线期。初级卵母细胞位于中央,周围包有一层扁平的卵泡(颗粒)细胞。卵母细胞的体积比较大,中央有一圆形的泡状核,核内染色质稀少,着色较浅,
核仁明显。卵泡细胞体积小,核扁圆形,着色深。所有的原始卵泡在出生前就形成了。它处于贮备状态未进入生长。常常在皮质外层外周成群的出现。据估计,一头出生牛犊卵巢中央有大约75 000个原始卵泡。
②初级卵泡 初级卵母细胞迅速生长,外有一层立方形的颗粒细胞包围。此时,卵母细胞已有透明带形成,并由卵泡颗粒细胞长出绒毛渗透到透明带内,为卵母细胞提供营养。
③次级卵泡 初级卵泡经过发育和生长,即成为次级卵泡。卵母细胞体积基本不变,但外围的卵泡颗粒细胞生长。卵母细胞由多层颗细胞所包围。其外有卵泡膜形成。
④三级卵泡 卵泡体积增大。颗粒细胞之间有液体形成并将它们分开形成卵泡腔。小卵泡腔合并成为大卵泡腔。初级卵母细胞逐渐发育增大,胞浆中卵黄颗粒增多。透明带为较均一的厚层蛋白质膜,卵泡细胞层增厚。
⑤成熟卵泡 也叫Graafian卵泡。三级卵泡进一步成熟,形成充满卵泡液的水泡,卵泡突出于卵巢表面。卵泡体积很大,卵泡腔扩大。此时初级卵母细胞长大成熟,核呈空泡状,染色质很少,核仁明显。胞浆内富有卵黄颗粒。排卵前即恢复并完成第一次减数分裂,结果形成大小不等的两个细胞,大的细胞为次级卵母细胞,小的叫第一极体。透明带变厚。极体呈卵圆形,位于透明带与次级卵母细胞之间的卵黄周隙,只有核质构成,以后逐渐退化。Graafian卵泡的卵泡壁由几个功能细胞层构成。最外层为有较多纤维细胞层的外膜,向内为内膜层。这两种细胞层由毛细血管网提供血液。外膜与内膜层分界明显,常合称为卵泡膜。内膜增厚,内膜细胞肥大,呈圆形或多角形,类脂质颗粒增多,细胞核为椭圆形。在内膜层下面有一层基膜,将内膜与最内层细胞即颗粒细胞层分开。基膜阻止血管系统进入颗粒细胞层。随着卵泡腔扩大,颗粒细胞层变薄,包围卵泡腔。颗粒细胞排列整齐。有时可见到细胞分裂。
此外,卵丘位于卵泡腔的一侧,卵丘和其它颗粒细胞包裹卵母细胞。与卵母细胞直接接触的颗粒细胞呈辐射状排列,称作放射冠。排卵开始时,放射冠细胞与周围的卵泡壁颗粒细胞之间开始出现裂隙,彼此的联系疏松。
牛、羊、猪的卵泡在排卵前(马排卵后)完成第一次减数分裂,形成次级卵母细胞。随即开始第二次减数分裂,然后休止在中期(M)。受精过程才使第二次减数分裂恢复并完成,结果产生合子(受精卵)及第二极体。因此,牛、羊、猪、马等家畜没有真正的卵子存在。
闭锁卵泡:初级卵泡退化后,一般不留痕迹。但生长卵泡退化时,卵母细胞萎缩,透明带皱缩塌陷,卵泡液被吸收,卵泡壁凹陷,以后结缔组织侵入泡内。
(2)黄体形成过程
排卵后的卵泡转变成富有血管的内分泌器官。牛、羊、猪的黄体位于卵巢皮质浅层突出于表面。马的黄体则完全埋藏在卵巢深部。根据黄体发育阶段而分成下列几期:
①血体期 卵泡破裂后,血液流入卵泡腔内,形成血凝块,也叫红体期。
②增生期 当破裂卵泡伤口愈合,黄体细胞增生,外观呈黄色。黄体细胞一部分来源于卵泡颗粒细胞,多分布于黄体中心,着色浅,呈多角形,体积较大,胞质出现类脂质颗粒,球形细胞核明显。另一部分来源于内膜细胞,多分布在黄体边缘或颗粒黄体细胞之间,体积小,核及胞质着色较深。
③血管盛开期 血管与结缔组织伸入黄体中心,形成花彩状,黄体细胞清晰可见。 ④成熟期 黄体增大到最高峰,黄体内各种结构明显。 ⑤白体期 黄体退化、萎缩,变成白色的痕迹。 四、实验报告
1.绘出并注明睾丸曲精细管及其所含细胞的构造图。 2.绘出并注明卵巢组织结构及卵泡发育各阶段示意图。
实验三 人工授精器械的认识与假阴道的安装
一、目的和要求
1.熟悉人工授精所用的采精和输精器械,了解其用途及使用方法。 2.练习安装假阴道。 二、材料和仪器设备
(一)采精器材 牛羊猪马的采精用假阴道,牛羊电刺激采精棒,猪手握法采精用的橡胶手套
(二)输精器材 牛羊猪马输精器,阴道开张器,额灯和手电筒
(三)辅助器材 高压灭菌器,酒精灯,长柄钳,镊子,玻璃棒,棒状温度计 (四)药 品 灭菌凡士林,75%和95%酒精棉球,滑石粉,来苏儿,洗衣粉 三、方法和步骤
先由老师讲解人工授精器材的构造、各部分名称和用途,并作假阴道安装的示范。然后