【重点难点】
(1)果蝇的雌雄鉴别。 (2)果蝇麻醉时间。
实验四 果蝇杂交
一. 实验目的: 1. 学习果蝇杂交技术;
2. 通过果蝇杂交,验证孟德尔的分离规律、自由组合规律和摩尔根的伴性遗传规律;
3. 了解伴性遗传和非伴性遗传的区别,以及伴性基因在正反交中的差异。 二. 实验原理: (略) 三. 实验材料:
野生型果蝇(长翅)、残翅果蝇、檀黑身残翅果蝇、白眼果蝇。 四. 实验步骤: 1. 选处女蝇:
选出瓶壁上有大量蛹的果蝇培养瓶,放空所有成虫果蝇;将放空后12h之内羽化出来的果蝇全部转移出来,并辨别雌雄果蝇,分别放到雌蝇瓶与雄蝇瓶中培养。
2. 杂交:
当用于杂交的不同类型的雌雄果蝇达到5对以上时,将其混在一起培养,让其自由交配。贴上标签,将培养瓶置于培养箱中培养。作正反交。
3. 放掉亲本果蝇:
待杂交并产卵后,将亲本成虫果蝇放掉。 4. F1近交:
待F1杂交瓶中的成虫果蝇出现后,观察果蝇的表型性状。当其达到一定数量(20只以上)时,将F1成虫果蝇转移到一个新的培养瓶中(F2培养瓶),让其充分交配,继续培养。
5. 放空F1成虫果蝇:
待F1近交产卵后,放掉F1成虫果蝇。继续培养。 6. 观察与统计:
当F2成虫果蝇羽化出来后,马上将其全部转移到一个新的空瓶中观察统计。重复这一操作,一直待统计观察的果蝇数目在200左右时,可停止观察。
7. 处理数据及卡方检验:
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用卡方检验方法来检验果蝇不同性状的分离比例是否符合遗传规律。
【作业】
1.怎样选取处女蝇?
2.实验结果与理论是否相符?若有差异,试分析其原因。
实验五 果蝇唾腺染色体制备与观察
一. 实验目的:
1. 练习分离果蝇幼虫唾腺的技术,学习果蝇唾腺染色体制片方法; 2. 了解与观察果蝇唾腺染色体的结构特征; 3. 了解果蝇唾腺染色体在遗传学研究中的意义。 二. 实验原理:
果蝇唾腺染色体属于巨大染色体,多线染色体。具有如下特征:
1. 果蝇唾腺染色体是由上千条染色质线汇聚而成的,因此很大,比正常染色体长100-200倍,粗1000-2000倍。
2. 总是处于前期,永久性配对状态,细胞不断长大而不分离,染色体复制而不分离,是数千条线复制结合在一起。
3. 会出现明显的深浅不同的横纹,横纹位置是不变的,是固定的。 4. 在遗传学研究中的重要意义。 三. 实验材料: 果蝇的三龄幼虫 四. 实验步骤: 1. 果蝇唾腺的剖取:
载玻片上加一滴生理盐水——挑一个肥大的三龄幼虫放入其中——分清头尾——用一根解剖针扎住口器稍后处,另一根扎住三分之一处,慢慢拉——从中找出唾腺。
唾腺的特征:透明,对称,边上有淡黄色脂肪体。 图:
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显微镜下观察:
解剖镜下观察:
果蝇唾腺的剖取是本实验的难点与成功的关键。认识唾腺又是这步的关键。
2. 染色:
除去唾腺之外的其它组织,剥去脂肪体——用滤纸吸去生理盐水——加一滴染液,染色10-20分钟
注意:(1)要除去其它组织与脂肪体,以免影响后面的观察效果
(2)实际上我们在这里省去了解离,不解离也可以,但解离了效果会更好。可以先解离再染色。
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解离+染色的步骤应该为:除去唾腺之外的其它组织,剥去脂肪体——用滤纸吸去生理盐水——在载玻片上加1-2滴1MHCL解离2分钟——用滤纸吸去HCL——加1-2地清水清洗——用吸水纸吸取水分——加一滴染液,染色10-20分钟
(3)在去除其他组织时,一定要在解剖镜下进行,轻轻地慢慢地除去,小心将唾腺弄丢了。
3. 压片:
盖片——烤片——敲片——压片
注意:如果在盖片时,染液已干,也可加一滴45%醋酸。
5. 镜检:在显微镜(40倍)下观察唾腺染色体,并绘出其染色体图。 注意:(1)唾腺染色体虽然很大,但也需要在40倍的显微镜下观察才能看到。(2)以往许多同学在显微镜下已经看到唾腺染色体了,但却不认识。
【重点难点】
唾腺剖取是本实验的关键,认识唾腺又是关键中的关键。
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实验六 染色体组型分析
一. 实验目的:
1. 学习并掌握植染色体组型分析的方法;
2. 了解染色体组型分析的意义,为进行细胞遗传学和遗传育种学的研究奠定基础。
二. 实验原理:
各种生物染色体的形态、结构和数目都是恒定的。 染色体组:一个二倍体生物中配子所含有的全套染色体, 染色体组型:染色体组的形态特征
染色体组型分析:又称核型分析。按照染色体的数目、大小和着丝粒位置、臂比、次缢痕、随体等形态特征,对生物核内的染色体进行配对、分组、归类、编号、进行分析的过程称为染色体组型分析或核型分析
三. 实验材料: 某生物 四. 实验步骤:
1. 制作染色体玻片标本:
利用有丝分裂中的染色体进行组型分析,通常是采用根尖细胞有丝分裂中期的染色体。因为这一时期的染色体具有明显的形态特征,便于进行分析。获得有丝分裂中期染色体玻片标本的方法,可参照实验一进行。
2. 选材与显微摄影:
当染色体玻片标本制好后,于显微镜下选出10个中期分裂相中染色体数目完整、分散良好、无重叠、各条染色体处于同一平面,并且着色鲜明、形态清晰、着丝粒明显、(如果染色体带有随体)随体能明显可见的细胞,进行显微照相,并将清楚的染色体图片放大后打印出来待用。
3. 测量:
测量每条染色体的总长度及长臂长度和短臂长度。
测量时,先在每条染色体旁边用笔作临时标记,随测量随记录,包括每条染色体的绝对长度、长臂长度、短臂长度、随体有无等;对于有随体的染色体,随体的长度可以记入也可不记入染色体长度之内,但应注明。
对于每条染色体的着丝粒应平分为二,记入两臂长度之内。如果染色体弯曲不能用直尺测量时,可以先用细线量取与染色体等长的长度,再用尺子量出线的相应长度。在照片上测量以mm为单位。
4. 计算:
根据测量结果,计算出每条染色体的相对长度、臂比和着丝粒指数。
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