遗传学实验 - 图文(3)

2019-08-31 10:47

相对长度?某染色体的长度?100染色体组内全部染色体总长度

长臂长度?q??100短臂长度?p?

臂比?着丝粒指数?

短臂长度?100该染色体的长度

注意:在计算相对长度时,染色体组内全部染色体总长度 = 细胞内所有染色体总长度/2

5. 配对:

根据测量数据,比较染色体的形状、大小、相对长度、臂比、着丝粒指数、副缢痕的有无及位置、随体的有无等特征,对照片上的染色体进行粗剪(即将各个染色体分别剪下)和同源染色体的配对。

6. 排列:

将配对的染色体按由大到小的顺序进行排列并编号。对于等长的染色体,以短臂长的在前;有特殊标记(如随体)的染色体及性染色体排在最后。排列时,把各对染色体的着丝粒排在一条直线上,短臂在上,长臂在下。

7. 分类:

根据臂比值确定各染色体着丝粒位置,进而依照着丝粒的位置将染色体分为如下四类:

表:根据臂比对染色体的分类

臂比 1.0~1.7 1.7~3.0 3.0~7.0 7.0以上 染色体类型 中部着丝粒染色体 近中着丝粒染色体 近端着丝粒染色体 端部着丝粒染色体 代表符号

M SM ST T

8. 剪贴:

将已经粗剪过的每条染色体进行细剪,使染色体周围所留相纸相等,若染色体图象清晰可以不留余边,然后,按照排列顺序整齐地贴在硬纸板上。一般是硬纸板的上方贴一张未剪的完整照片,中间贴上已经剪出、且按顺序配对排列的染色体,下方列表,最后写出实验材料及核型公式。

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核型公式是以公式的形式将核型分析的结果和核型的主要特征予以表示。它简明扼要,便于记忆和进行比较。其书写格式如下例:

芍药:K=2n=2x=10=6m+2sm+2stsat

编号 绝对长度 相对长度 短臂 1 2 3 ┇ n

长臂

臂比

着丝粒指

随体

类型

9. 翻拍及绘图:将剪贴排列好的染色体组型图进行翻拍或描图成为染色体组型图。

实验七 粗糙链孢霉的杂交

一. 实验目的:

1. 学习粗糙链孢霉杂交技术; 2. 了解顺序四分子的遗传学分析方法; 3. 观察由于基因转换引起的异常分离现象; 4. 进一步验证分离和交换规律;

5. 学习并掌握重组值的计算方法及着丝粒作图的方法。 二. 实验原理: (略,参见课本)

三. 实验材料及用品: 1. 材料:

两种粗糙链孢霉:(1)野生型(lys+);(2)赖氨酸缺陷型(lys-) 2. 培养基:

(1)野生型用培养基——土豆培养基;

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(2)赖氨酸缺陷型用培养基——补充培养基; (3)杂交用培养基——玉米培养基。 四. 实验步骤: 1. 菌种活化:

从冰箱中取出菌种(lys+与lys-),分别接种到土豆培养基和补充培养基上,放入28℃培养箱中,进行活化培养和扩大繁殖3-5天。

2. 接种杂交:

在无菌条件下或酒精灯火焰上,分别用接种环取野生型和赖氨酸营养缺陷型菌株的少许菌丝或分生孢子,接种到同一试管的玉米培养基上,贴好标签,于25℃条件下培养。

5-7天后可见棕色原子囊果出现,以后原子囊果成为子囊果,2周左右即可观察。

注意:(1)所有操作一定在火焰上方进行;(2)接种环在伸入试管中取菌前,要在火焰上烧烤杀菌,然后伸入试管口,待其温度接近室温时再取菌,以免将菌烫死;(3)要将lys+与lys-都接种到玉米培养基斜面上的相同位置,不要离的太远,否则二者不能杂交;(4)要一定使菌丝与培养基的表面接触,但也不要将菌丝压入培养基中。

3. 压片:

待杂交培养2周左右时,可以进行压片观察。

取一载玻片——加1-2滴6%次氯酸钠——用接种针跳出子囊果放在载玻片上——盖片——用拇指适当压片——将子囊果压破。

4. 显微观察及统计:

在低倍显微镜下观察,找到子囊果破裂且大量子囊分散的视野,观察子囊孢子的颜色表型和子囊中的排列顺序。统计结果填在下表中:

子囊类型 + + + + - - - - - - - -+ + + + + + - - + + - - - - + + - - + + - - + + + + - - + + - - - - + +

观察数

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5. 计算lys基因与着丝粒距离:

着丝粒与Lys基因间的重组值?第二次分裂分离子囊数1??100%观察到的子囊数总数2

Lys基因的着丝粒距离?第二次分裂分离子囊数1??100观察到的子囊数总数2

【作业】

在计算lys基因与着丝粒交换值与距离时,为什么要除以2?

实验八 植物多倍体的诱发及鉴定

一. 实验目的:

1. 学习人工诱变多倍体的原理与方法; 2. 鉴别诱导后染色体数目的变化; 3. 了解多倍体诱发在植物育种上的意义。 二. 实验原理:

秋水仙素是一种生物碱,具有麻醉作用,对植物种子,幼芽、花蕾、花粉和嫩枝等可产生诱变作用。是常用的多倍体诱变剂。它的主要作用是抑制细胞分裂时纺缍体的形成,使染色体不走向两极而被阻止在分裂中期,这样细胞不能继续分裂,从而产生染色体数目加倍的核。若染色体加倍的细胞继续分裂,就形成多倍性的组织。由多倍性组织分化产生的性细胞,所产生的配子是多倍性的,因而也可通过有性繁殖方法把多倍体繁殖下去。

经过染色体制片,可以观察染色体数目的变化情况,进而鉴定细胞是否加倍。

三. 实验材料:

洋葱2n=16, 大蒜2n=16 四. 实验步骤: 1. 多倍体诱导:

洋葱刮去老根,放在小烧杯上,加水至刚与根部接触为止,室内培养至新根长出0.5-1.0cm左右,将烧杯中的水换成含0.1%秋水仙素的水溶液,置阴暗处培养2天,至根尖膨大为止。

2. 固定:

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用蒸馏水洗根2次——切取根尖0.5cm——投入卡诺固定液固定3-24小时——95%乙醇0.5小时——70%乙醇保存

3. 解离:

60℃下,用1M HCL处理根尖6-8分钟,解离完后要用清水漂洗3遍。 4. 染色:

将根尖最前端的分生区剪下,约2mm左右,放到干净的载玻片上,滴1-2滴改良苯酚染液,染色8-10分钟。

5. 压片:盖片——烤片——敲片——压片

6. 镜检:在显微镜下观察,找出处于分裂中期的细胞,根据染色体数目,判断其是否加倍。并绘出加倍前后的细胞染色体图。

说明:

本实验除多倍体诱变这一步外,其余步骤实际上与有丝分裂实验完全一样。不过,本实验最后关心的是染色体数目,是否加倍。

染色体是否加倍很明显就能看出来,而且经诱变后,可能有的细胞变成了四倍体,有的成了八倍体,而有的可能仍然为二倍体,并未加倍。

实验九 植物基因组DNA的提取 ——CTAB法

一. 实验目的:

1. 通过本实验学习从植物组织中提取DNA的方法——CTAB法。 2. 学习本实验相关所用仪器设备的正确的操作方法。 二. 实验原理:

利用液氮对植物组织进行研磨,从而破碎细胞。细胞提取液中含有的CTAB溶解膜蛋白而破坏细胞膜,并使蛋白质变性而沉淀下来。其中细胞提取液中的EDTA抑制DNA酶的活性,以保护DNA不被降解。再用酚、氯仿抽提的方法去除蛋白,得到的DNA溶液经异丙醇沉淀。

三. 实验材料:

某种植物的组织,如新鲜叶片等。 四. 实验仪器和药品:

低温离心机、恒温水浴锅、台式离心机、制冰机、加样移液器、陶瓷研钵、5ml离心管、1.5ml离心管、吸头。三羟基甲基氨基甲烷(Tris)、十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、乙二胺四乙酸(EDTA)、β-巯基乙醇、氯化钠、氯化甲、氯

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