仿、异戊醇、乙丙醇、乙醇。
五. 实验步骤：
1、取0.4g新鲜叶片，在液氮中研磨成粉末状；
2、转移到5ml离心管中，加入1.6ml细胞提取液，充分混匀。65℃水浴保温20min；
3、加入5ml 5MKCl溶液，混匀，冰浴20min； 4、8000r/min离心20min；
5、将上清液转移到另一5ml离心管中；
6、加等体积的酚/氯仿，混匀，12000r/min，离心5min，取上清； 7、加0.6-1倍体积的异丙醇，混匀，冰上放置20min； 8、离心获得沉淀，用70%乙醇漂洗DNA沉淀3次； 9、风干沉淀，加入50μL TE缓冲液，溶解DNA沉淀。 【作业与思考】
1. 在提取植物基因组DNA的操作过程中应该注意哪些问题？ 2. 实验中所用的每种药品或试剂所起的作用是什么？ 3. 要熟练掌握本实验所涉及到的仪器设备的正确操作方法。
实验十 孚尔根染色反应（有些班级开）
一. 实验目的：
1. 学习掌握细胞核内DNA的定量鉴定方法──孚尔根染色法； 2. 了解孚尔根染色反应的原理。 二. 实验原理：
孚尔根染色法是鉴别细胞中DNA反应的组织化学方法。
细胞内的DNA(通常位于核及染色体上)经HCl水解后，DNA分子中的嘌呤碱基被解离，从而在核糖的一端出现了醛基。Schiff试剂中的无色品红可与醛基反应，形成含有醌基的化合物分子, 因醌基为发色团，故可呈现出紫红色。也就是说, DNA经稀酸水解后产生的醛基，具有还原作用，可与无色品红结合形成紫红色化合物，从而显示出DNA的分布。
三. 实验材料及仪器、用品： 实验材料：洋葱根尖(2n＝16）
实验仪器：显微镜、水浴锅、玻璃缸、剪刀、镊子、刀片、载玻片、盖玻片、培养皿、吸水纸、酒精灯。
16
实验药品：卡诺氏固定液、漂洗液（SO2溶液）、Schiff’s试剂（席夫试剂）、1N HCI、无水乙醇、45％醋酸。
四. 实验步骤：
1. 取经预处理并固定好的洋葱根尖，用水洗2-3分钟，放入室温条件下的1N HCl处理根尖材料2-3分钟；
2. 将根尖换入60℃预热的HCl，置于恒温水浴中，在60±0.5℃的条件下水解8-10分钟；
3. 吸出热HCL，换入室温1N HCl再处理1-2分钟，然后蒸馏水漂洗2-3次； 4. 吸净水分，加入Schiff试剂，在黑暗条件下（可用黑塑料袋包住，放到抽屉或别的黑暗处），染色30分钟以上，也可过夜；
5. 用漂洗液（SO2溶液）漂洗3次，每次2-5分钟；
5. 用蒸馏水漂洗3次，去掉细胞中残存的一些有色的品红分子； 6. 取根尖置载玻片上，加一滴45?%醋酸，然后盖上盖片。压片、观察。
【说明】
（1）漂洗液配制：
量取200ml蒸馏水于试剂瓶中，加入100ml 1MHCl和1g偏重亚硫酸钠（钾）。此液应临时配用，溶液失去SO2味即不能使用。
（2）Schiff试剂：
Schiff试剂是孚尔根反应的染色剂。配制染液时溶解0.5g碱性品红于100ml煮沸的双蒸水中，待滤液冷至26℃再加入10ml 1mol/L盐酸和0.5g偏亚硫酸氢钾（钠），震摇使之溶解，密封瓶口，置于黑暗和低温处，12～24小时后检查，如果染色液透明、无色或呈淡茶色者即可应用。如果仍有不同程度的红色未褪 尽，则可加入0.5g优质活性炭不断振摇，在低温下（4℃）静置 过夜，过滤后使用。
【作业】
1. 比较孚尔根染色法和改良品红染法有什么不同。 2. 叙述孚尔根染色法的原理。
《遗传学实验》抽查内容
【说明】这是2007年11月12日抽查时，所有抽查内容，每个同学们都必须全部掌握这些操作技能与知识点。
17
一. 实验操作：
1. 制片，在显微镜下找到有丝分裂的前期、中期、后期、末期，并分别将其置
于视野中央。
2. 制片，找到减数分裂下列时期中的三个时期（粗线期、双线期、终变期、中
期Ⅰ、后期Ⅰ、末期Ⅰ、中期Ⅱ、后期Ⅱ、末期Ⅱ），并将图像分别调到视野中央。
3. 找出粗线期、终变期、中期Ⅰ、后期Ⅰ、中期Ⅱ、后期Ⅱ中的任一时期，并
绘出其在显微镜下的图像。
4. 制片，在显微镜下找到染色体分散良好的多倍体，并将其置于视野中央。 5. 制片，在显微镜下找到染色体各臂分散良好的果蝇唾腺染色体，并将其置于
视野中央。
6. 麻醉10只果蝇，能使其在大约5分钟时醒过来；并用肉眼快速区别雌雄果
蝇成蝇。
7. 在解剖镜下解剖果蝇的三龄幼虫，将唾腺放在显微镜视野中央。 8. 将lys+与lys-接种到杂交培养基上。 二. 口答：
1. 植物有丝分裂的原理是什么？
2. 观察植物细胞的有丝分裂时，为什么要选择生长旺盛的植物组织？ 3. 在植物细胞有丝分裂的制片时，固定、解离、烤片的作用分别是什么？ 4. 判断一张植物细胞有丝分裂的制片是否优秀，标准是什么？减数分裂实验原
理是什么？
5. 在减数分裂实验中，取大葱花上的花蕾时要注意什么？ 6. 显微镜下，如何区分花粉母细胞和药隔细胞，说明其特点。
7. 在减数分裂实验中，如何区分细胞是处于第一次分裂还是处于第二次分裂？ 8. 减数分裂实验中，如果发现细胞基本处于分裂间期，没有分裂相时，应该如
何调整实验？如果发现细胞分裂均已结束，都已形成成熟的花粉粒了，应该如何调整实验？
9. 判断一张植物减数分裂的制片是否优秀，标准是什么？
10. 果蝇杂交实验的原理是什么？在分类学上，果蝇属于什么纲？什么目？什么
科？什么属？
11. 果蝇通常以什么为食？在什么季节常见？果蝇用作遗传实验材料有哪些优
点？
12. 果蝇有几种虫态？简述果蝇的生活史及各发育时期的特征。
13. 如何区分果蝇成蝇的雌、雄个体？说明用肉眼快速区别雌、雄果蝇成蝇的技
18
术要点。
14. 说明麻醉果蝇的技术要点、制作麻醉瓶的技术要点。
15. 在做果蝇杂交实验时，如何用χ2测验验证实验结果是否与合孟德尔定律相符. 16. 说明果蝇杂交实验的步骤及杂交技术要点。
17. 果蝇唾腺染色体的制备与观察实验的原理是什么？果蝇唾腺染色体有何遗
传学研究意义？
18. 判断一张果蝇唾腺染色体的制片是否优秀，标准是什么？如何制作果蝇唾腺
染色体的永久装片？
19. 为了得到发育良好且体型较大的三龄幼虫，应该如何培养？
20. 如何向一位没有见过果蝇唾腺的人描述果蝇唾腺的形态及其识别要点？ 21. 染色体组型分析实验的原理是什么？染色体组型分析有什么意义？ 22. 在进行染色体组型分析时，为什么要用相对长度来表示染色体长度？着丝粒
长度、随体长度是否应该计入染色体长度？
23. 粗糙链孢霉杂交实验的原理是什么？粗糙链孢霉用作遗传实验材料有哪些
优点？
24. 说明粗糙链孢霉的分离现象与高等动植物的基因分离有什么不同？ 25. 简要解释计算粗糙链孢霉的重组值时，为什么要除以2？
26. 粗糙链孢霉杂交时，将lys+与lys-接种到杂交培养基上应该注意哪些事项？ 27. 粗糙链孢霉杂交实验中，所用的三种培养基有何异同？ 28. 植物多倍体的诱发及鉴定实验的原理是什么？ 29. 洋葱根尖多倍体诱导的具体步骤是什么？
30. 如何配制卡诺固定液、1NHCl、70%酒精、45%冰乙酸、改良苯酚品红染液？ 31. 在《遗传学实验》中，植物细胞的有丝分裂、植物多倍体的诱发及鉴定、果
蝇唾腺染色体的制备与观察、减数分裂、粗糙链孢霉的杂交、DNA的孚尔根反应等实验都需制片，请比较它们之间的异同。
19