qianyimei：星期一复苏了一支细胞株，养到星期三还好好的。心太急。老希望它能长的快些，所以，将一瓶配成三瓶用，结果倒好，今天早上一来，就发现里面长了很多成团的碎片状的东西，众师兄都说是霉菌，叫我倒掉，好可惜，好郁闷！早知道就不换液了，这一换，全军覆没。那位能有更好的办法吗。
zhaoqingshan：用含双抗的PBS洗几遍，换上好的培养液（比如用点好的胎牛血清）；每天洗1-2次，只要细胞状态还好，洗几天，就能把霉菌去除。然后，检查霉菌污染的原因，清除污染源。zjuaxiu：根据经验霉菌污染了用双抗的pbs冲洗基本是没什么作用，只能是浪费双抗pbs时间
zhaoqingshan：那只是说明你的经验，不巧的很，我的细胞(细胞很娇贵，培养液价值约10元/ml)去年七月霉菌污染了一次，全部抢救过来。不可否认很多时候是抢救不回来，前提条件是早发现污染，霉菌对细胞还没有构成太大伤害时候，是可能抢救回来的。当然，最重要的是不要有污染了，预防最重要，即无菌观念要强。 flyingpumc：用3微克每毫升的两性霉素杀杀试试!!!
eweiren：如果不是唯一的一管细胞，我觉得没有必要费这么大力气去挽救，因为有了霉菌，基本上是无法去除的，通过换液只能达到抑制真菌的生长，在镜下看不到不代表不存在，只是由于少或者芽孢看不到，一段时间后它可能还会出来，耽误试验啊！ zhaoqingshan Re:碧海娃娃
双抗PBS是指含有双抗(青链霉素)PBS（磷酸盐缓冲液，也不能杀死霉菌，杀霉菌应该用两性霉素或制霉菌素），使用双抗PBS冲洗仅仅是预防其它细菌的污染而已。Re:eweiren ，你说的是很对的，真正严格的实验是不应该有污染的。
细胞株拿来后，传代几次，细胞多了，就应该冻存一些，一方面以免细胞传代次数多了变成非二倍体或者其它变异，另外就是以防污染。如果自己培养的原代细胞，可以挽救一下试试，大部分情况是难以回天的，看运气了。
不过，我那次污染正是霉季，一般实验室在这个时候，可能就不养细胞了，我们实验室是我们院里无菌观念最严格的一个实验室，在这以前，细胞从来没有污染过。那时候可能是因为空调很久没有擦洗消毒了，而我又太大意，因此感染霉菌了。不过，那次我还真的就救回来了，因为我的培养液中，营养条件特别好，而且我每天洗几次，换液，细胞没有任何的受影响的表现，我做的是原代细胞传代到第三代，刚好该做实验，因此就全部用来做了同一批的实验。 避免真菌污染的几个措施： 1、严格的无菌操作;
2、无菌间定期打扫、消毒，保持干燥； 3、各种培养液、培养器皿的严格消毒；
4、温箱中消毒水中放置过饱和的消毒的磷酸氢二钠或者硫酸铜。
eyeball：霉菌污染了用双抗的pbs冲洗基本是没什么作用，只能是浪费。关键是液体一定要保持无菌。培养液过滤后要取一点先放培养箱预培养三天，无菌生长后再用。
dongshiwu：我曾经就回来过遭霉菌污染了的细胞。如果细胞好养或有存货的话，干脆从头作起，要是舍不得可以用PBS液洗3遍，在新的培基中加两性霉素。
XTYang：最好弃掉，要不在以后的培养基中加Invitrogen公司的Fungizone，多换几次后也可。 wangfx_vet：我最近养的细胞总是出现空泡并且不断死光。改变血清浓度也没有用，不知道怎样解决
俺来了：是不是排出污染，比如霉菌包子感染可能这样，因为我的前面一批细胞就这样，培养基不混，细胞内有很多空泡，且可见一些比细胞大得多无明显细胞结构的“圆形细胞”里面有很多小的空泡，如果是这样的话，那就是霉菌污染，但愿你的不是，否则，什么都得重来！
wangfx_vet：对对！就是楼上老师说得那样！那末说我的细胞是污染霉菌了！！！？？？那我就惨了，这是引进的细胞哎，没了就永远没了！没有拯救的办法吗？
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hkai97：霉菌污染是很烦的问题,试试杀霉菌的药物.这只能是死马当活马医了.重要的是预防.常做清洁和消毒,保持实验室的洁净度.否则还会出现细胞污染.
doctormeng：谁知道细胞培养血清中出现黑焦虫，该怎么办？ 有没有专门对付他的东东，比如抗生素之类？我养的细胞中出现了：中间一个黑黑的东西，其四周包围有象棉花样的的东西，不知是不是黑浆虫。其周围的东东，有点类似于菌落。
huiql：我以前也遇到过这种情况，估计可能是真菌污染，慢慢地培养液就变混了，有人说用制霉菌素在刚出现时可以制服，但我没有试过，听说南方的真菌污染和北方的不一样，这种可能属于南方的。
义超：先需确定到底是何种微生物，可以去微生物科做细菌培养来确定。如果是真菌，细胞又实在很难得，可在细胞培养液中加入二性霉素D来挽救，也许有用。
hantian：黑胶虫好象不是诸位描述的样子。我碰到的黑胶虫有点类似与杆状细菌，但长度比细菌长，而且会左右摆动，甚至游动。这是血清中带来的，不属于细菌，普通的抑菌方法是没用的，而且他长势很快，所以遇到这种情况只能倒掉。也有人说，进口血清中的黑胶虫要甚与国产血清。
ph123：同意楼上的意见。我亦在细胞培养中遇到同样的问题,胶虫成熟后呈线状,可以快速移动,一般由血清中带来,如果发作的话只有把细胞弃掉,而且要赶快换血清。但你描述的情况还不能肯定是胶虫,可以通过培养,在油镜下观察一下,看是否是污染. 另外如果你观察到的情况没有发展,细胞不受影响的话,亦可能是血清中的纤维蛋白沉淀.
icesugar75：As far as I know, the black cluster is mostly 霉菌, since I encountered it before. But you could know it quickly if it is 霉菌, becaue 霉菌 is growing very fast, finally showing up in unclear appereance csdoctor：听协和基础所的陈实平老师说，她并不认为真有什么黑焦虫。
icesugar75：一般霉菌很难控制，一天或是两天就长起来了。如果刚刚怀疑有霉菌，加双抗可能会好使，但说实话，刚刚开始要想判断是不是霉菌真是太难了，当时的霉菌类似死细胞，两三个小团在一起，暗的，如果不是特别有经验，很难说是不是。所以如果发现有小黑点，取出一点放入37度培养箱中一天就知了，而把余下的血清冻好。如果运气好，双抗会管用，不好就扔了吧。 lim99011：双抗好像对霉菌没有用吧?我好像记得霉菌用的是两性霉素,双抗没有作用的.
zzy8896：一点经验之谈！我在养pc12细胞时出现过这种情况，我的细胞也是莫名奇妙的出现，而且过几天后，细胞活力状态明显下降，最后死亡，但不同于一般的细菌和霉菌。我请教了许多人，没有结果。我试用g418加在培养基中，养了一阵子，后来就消失了，但你要摸一下浓度。到现在我还是没有搞清楚什么原因，可以试一下。我倾向于它是一种特殊的细菌 ronic：我也觉得双抗对霉菌没有用，加抗真菌的药试试看了，不过好像很贵，而且细胞对它的耐受性比较差。 Yong：建议慎用G418，除非你的细胞有抗性
happywind：养原代，不幸4天后发现多瓶惨遭霉菌毒手，有一瓶细胞贴壁挺好，且菌丝没有沾在瓶底上，因此我想试着救救这瓶细胞，换液，反复冲洗，最后再放进孵箱，结果过了两天，培养瓶里的细胞竟然长的挺好，没有丝毫霉菌污染的迹象。难道这样也可以！
kaize：不知污染的细胞的一些基本特性会不会改变 chelonian：但是这样的细胞，做实验结果可信吗
Skyhawk：这是我们实验室细胞培养出现的不像霉菌，不像死细胞的东西，培养越久越多，看看大家是不是也遇见过，是什么呢？什么原因引起的？
（图：http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=66&id=1650849&tpg=1&ppg=1&sty=1&age=0#1650849） 以上图片取自转染有目的基因的cos7细胞，是在用G418筛选时出现的东西，不同细胞都有（vero细胞也是），我的师兄和师姐都出现有类似的情况，但我的细胞没问题（和师姐的实验目的一样，只是我是自己另外准备培养基的），目前他们都挺困惑的，希望得到dxyer的帮助！？
taolt：我感到是真菌污染，肯定不是培养液解冻后出现的东西。我们这里配好的培养液都先冻到－20度，等用的时候再拿出来用，已经有4－5年了，从来没有见过这样的东西。我有一次也是感染了真菌，与你的照片很相似，而且在早期并不影响细胞的生长，
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甚至细胞长得速度更快了。这可能是因为有的真菌会分泌一些能促进细胞生长的因子有关。加些抗真菌药物，要是不重要的细胞就扔掉吧。再看看细胞孵箱里有没有真菌斑！
Skyhawk：我们一般都是把培养液配成1X，过滤后放4度保存使用。所以，应该可以排除是培养液冻溶的问题。培养久了，细胞生长状态不好了，但培养液没有变浑，不像是细菌污染。真菌污染倒很有可能。谁有类似情况的照片放上来看看？
曾经用不含抗生素的培养基出现过细菌污染，反复用双倍抗生素的PBS洗后，用含抗生素的生长液培养，不再出现污染。看来这个方法可以用于一般的细菌污染的解救。
如果是真菌污染，我想可以用类似的方法，但抗生素要用相应的抗真菌的。勤换液。但这个方法适合在污染不是很严重的时候用。 helenm：培养的细胞有轻度的霉菌污染，有办法补救么？ 这可是我辛苦养了两个月的细胞。 iris_cql：以我以前养各类细胞的经验，出现霉菌的最好补救方法： 1、重新配置所用的全部培养液、PBS、消化液等，确保无菌！
2、用双蒸水洗细胞1－2次，然后在用PBS洗细胞1－2次。记住动作一定要轻柔！后换上新配的培养液！ 3、彻底打扫细胞室，培养箱等。
little_G：偶的经验是，如果发生霉菌污染，最好是马上检测，一般轻微霉菌污染对检测结果的影响不大。至于想解救，你想想用什么抗菌素能行呢，除非你用复康唑，那也难说好用。最好彻底重来，只要不影响别人的和自己的其他细胞就算万幸了。 小样－菜鸟跑路：霉菌污染是不是培养基一定变混浊？霉菌能进入细胞吗？在我印象中是培养基变得很混，能见到白色的菌丝之类的，细胞状态不是很好。可是有人说霉菌污染能进入细胞，是真的吗？
loyal1006：霉菌污染后培养基不一定会变混，是否变混要看霉菌的生长速度。霉菌污染肯定会影响细胞生长，最终结果是导致细胞脱落、死亡。霉菌较大，污染后很容易在显微镜下看到大量的典型的霉菌丝。 angel2004：我的细胞被真菌污染了，有什么补救措施
sonina你用两性霉素处理，最好作抑菌试验，确定使用浓度。之后，用两性霉素的培养液培养一代，如果霉菌消失，换用正常的培养液（即没有两性霉素的培养液）培养一代，如此反复3次，确定没有霉菌后，以致可用正常培养液培养。这样太浪费时间，最好还是弃掉污染的细胞，重新复苏新细胞。
zhanghong38：我是一个试验新手，现培养血管内皮细胞，反复遇到霉菌污染问题，已试过用酒精和新洁尔灭试擦孵箱，但均不奏效，恳请各位师兄师姐不吝赐教，感谢。
topgun：关于污染的问题，这涉及几个方面的因素：操作，超净台、孵箱。
（1）操作：做实验时应养成无菌观念（操作前用70%酒精檫手，实验时如吸管等物品接触到台面应立即更换，并隔3-5分钟用酒精灯烧灼吸管）。
（2）超净台：如果超净台使用时间过长（3-5年以上），应及时更换滤板。消毒的紫外灯管也按时更换。在操作前用酒精或新洁尔灭檫拭台面。
（3）孵箱：怀疑孵箱污染时，将孵箱关掉，然后用上述消毒剂消毒，之后用移动紫外消毒车将紫外灯插入孵箱照射30分钟以上。 zrzhong6519：还有注意孵箱内的水盆， 经常检查， 如发现有絮状物，立即更换灭菌水， 之前用75%乙醇擦拭， 第二天要及时察看是否彻底，不彻底在按上述方法再来。
lwangfang：我建议你们把所有的与培养相关的物品进行一次彻底的消毒，然后启动孵箱的自动消毒功能让其消毒过夜，再注意一下操作。我觉得物品污染的可能性比较大。
yoyo781206：反复遇到霉菌污染问题，最可能的还是在操作中不太注意无菌观念所致。应当要常用75%酒精消毒手，靠近火焰旁操作，注意吸管口，瓶口等不要接触到桌面或手等地方，如果碰到，尽可能弃用吸管，或者在火焰上烤一下。超净台也是关键的，每天使用前消毒30分钟，用完也应当消毒30分钟。孵箱，已试过用酒精和新洁尔灭试擦，应该可以视做是安全的。个人观点
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ahui：主要考虑手的污染。
狮心：霉菌反复出现，还有一个问题要注意：环境湿度，必须注意除湿，长期不用的东西，使用前必须从新消毒，把冲洗消毒和培养分开
liuxiaohua889：以前是否养细菌?可以全面消毒再作,有条件换培养箱,无水的较好
miffyqx：感觉有细胞污染了，于是很不放心，请问染菌的培养瓶再污染别的瓶里细胞，直至污染整个培养箱里东西的几率有多大？以前听说过会这样的
香山雪林：你的培养箱采用什么样的抑菌方法？我现在采用的是：水盘中装饱和的硫酸铜溶液（无菌水配），有资料说可以增大保险系数。
miffyqx：我们的做法和你们差不多：饱和硫酸铜溶液配制后，高压蒸气灭菌，放在水盘里。这样很有用是吗？特别防箱内染菌？？ shyaroom：霉菌污染会染坏一箱子细胞，因为霉菌会飘，但细菌不会的。 yuefeiyf：硫酸铜只是保证水不长菌，对其他地方无效。
路遥只要抢救措施及时应该不会有大问题，我的细胞出现过霉菌污染，但及时用苯酚消了孵箱，用甲醛重熏了培养间，没出什么大问题．
pipi： CO2孵箱被霉菌污染后，可把所有细胞暂时转移，采用过氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。并把过氧乙酸放置在孵箱内一个小时，使其蒸汽弥漫。待过氧乙酸的气味消散后，再移入细胞。孵箱应定期清洁（2月左右），尤其在多雨的季节。 gongqiang：孵箱霉菌污染，经新洁尔灭及酒精彻底擦洗数次并紫外照射灭菌处理，仍有霉菌滋生，恳求高手出招解救！ 203040：天气炎热，霉菌也开始肆无忌惮的繁殖。想想去年这个时候，也被霉菌折腾得郁闷无比。还好后来控制住了。经验如下： 1、细胞培养室大扫除，水池、吸引器中的引流瓶等无一不是霉菌孳生的地方。然后室内进行紫外灯照射杀菌。 2、培养箱消毒时是否注意了里面的几层钢板。紫外线照射时得拿出来。我当时干脆就放到180度烤箱里考过夜。
3、处理培养箱时还有个要考虑的地方，培养箱内的细胞培养瓶。重新放回去的时候得用酒精将瓶周搽洗数次，能换掉更好。 4、培养箱搽洗时重点在箱底的四个角落。
碰到顽固的霉菌孳生时的确很伤脑筋，最夸张的时候消毒第二天箱底就看到白色的点装物。总的原则就是彻底的杀、杀、杀！当时我就是这么处理的，后来情况大为改观。你可以再试试。
gongqiang：谢谢！我已经和霉菌奋战近一个月，我总是失败者！上述方法：如将培养箱能拆下的都经高温高压消毒，各个角落每天新洁尔灭、酒精擦洗，都不行，辛苦不敢说，努力总没结果！
amwwxf757：你应分析一下每次成功和失败的原因，用本子记下来。操作要细心。请一位有外科经验的人给你看一下是不是有漏的地方没有消毒好。全面包括各种试验品和培养器。
flyingpumc：因为霉菌有孢子的存在，所以酒精，新洁而灭，紫外线等等根本不可能去除霉菌！我们原来用过国外带回来的一种试剂稀释后可以用来抑制霉菌，但是我们没有发生过霉菌污染，所以不知道效果到底怎么样？而且这种试剂可以稀释后直接放在孵箱内，此试剂对细胞没有毒性！具体是什么我也忘了！！你自己好好查查吧！应该会有这种试剂卖！ zjuaxiu：有带消毒程序的培养箱，很方便。
jzyxynwm：整个培养间用福尔马林和高锰酸钾熏蒸,孵箱内部包括托盘等全部用苯酚搽洗,封闭2天,基本就没问题!!但培养良好的无菌观念是前提！真菌多数是空气中悬浮污染，所以除紫外线照射外，每次进出培养间要用来苏或者新洁尔灭搽地，减少空气悬浮颗粒及细菌！！
开心的水：一周清洗一次，75％酒精擦洗，再将温度打到94度持续3到4分钟。
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wangyibo：孵箱内托盘的水中加一些硫酸铜可抑制霉菌。
无影剑客：做原代培养，20多天后已经传代或要传代时几瓶细胞均出现局部黏附在在瓶底的葡萄状漂浮物,摇晃后会有部分脱落。有两瓶突然出现浑浊，镜下找不到细菌。换液后漂浮物较前增多。疑为霉菌污染。原代培养做的好辛苦，突然发现大面积污染，最近一两个月的工作就要化为乌有。请教已经出现的污染有没有办法弥补。两性霉素B如何配制、贮存及污染后的最大应用剂量。 youngtiger：做原代培养出现污染原则上应遗弃细胞，但鉴于你的个人原因及我以往排除污染的经验，现给出以下建议：两性霉素，浓度范围1-50ug/ml，常用浓度3ug/ml；制霉菌素，浓度范围1-500U/ml，常用浓度50U/ml。两者任选其一。 Pathway：建议楼主楼主试一试用96孔(或48孔)细胞培养板来培养;这样局部的、偶然的污染不会使实验全军覆没。因为我也经常要做原代培养，一般会同时接种细胞培养皿和96孔板。因而有时会出现这样的情况：5块96孔板总共只有4、5个孔污染了，但所有的细胞培养皿都污染了。从来没有发现细胞培养皿没有污染，但96孔培养板却污染了（至少目前是这样）。对有污染的培养孔，我一般用8M的NaOH处理（加热至70－80度，污染也从来就没有扩大过）。总之，原代培养出现的污染多是机会性、偶然的，使用96孔或48孔细胞培养板是一种很好的控制污染的手段。（说到底是一种机械的、行之有效的隔离措施） loyal1006：已出现污染一般是无法挽救的，两性霉素、制霉菌素也只能是预防污染，或许在污染的早期还有一点作用。目前关键是要找到污染源，以防下次再污染。
qingshi：这段时间大量养细胞，呵呵，880多个，那个多呀，可是竟然出现霉菌和酵母污染，于是，消毒处理，可是，污染照旧，于是大胆决定，撤掉水盘，呵呵，果然效果良好，已经20多天了，一切正常，顺便说一下，我同时养的悬浮、贴壁。加入10ml培养液，3天换液，没问题。
Pathway：楼主不是同时养880种细胞吧？而是用了96孔培养板养了多种细胞吧？我觉得国内还没有那个单位和公司能同时养880种不同的细胞。另外，不要水盘的话，楼主怎么保证培养箱内的相对湿度呢？（培养箱内的高湿度和温暖的环境确实是最适合霉菌生长的），我的培养箱内也可见长有很多的霉菌，但会引起细胞培养瓶内的细胞污染的可能性却很小（即使使用细胞培养皿和细菌培养皿也是如此）；不过，由于我的培养箱可自动消毒，我一般每个季度都会消毒一次。
qingshi：no。贴壁细胞无法用96孔板，当然不会一次性培养880种，而是持续培养，一般维持在80多个，使用50ml的培养瓶。我也担心湿度问题，但是没什么大问题。
小毒物：我正在养细胞,一开始有10瓶,不断的养,不断的有真菌污染,现在剩下4瓶了.因为也并不是所有细胞都出现污染,大家帮忙分析一下应该注意哪些问题?
juju：真菌污染是细胞培养过程中常见的问题。首先，环境需要清洁，超做台每天用新洁尔灭清洗是必要的。然后在培养基中适量添加制霉菌素，和两性霉素可以抑制真菌及其他霉菌的生长。再者，超做时加以注意。应该对你有帮助的。细胞培养过程中常见的问题建议你可以看看“细胞培养实验指南”一书。里面有更详细的讲解。
mlfyandw2002：最好的方法就是丢掉它,然后用甲醛熏蒸,再就是集体放假一个星期.再回来重新做过.
小毒物：谢谢两位,我已经将孵箱用甲醛熏过一次了,每次照台子之前用酒精擦台子,紫外线照30分钟,操作也很注意,但还是不能幸免遇难,看来要加制霉菌素等试试看了
fairyland：最近培养筛选细胞频频污染，以前操作还没有现在认真，细胞一样长势旺盛，一点问题也没有。现在越是小心谨慎，却总是污染，即使第一二天没有污染，时间稍长就出现了。其它同学有时有，但我出现的次数最多。一种是一小团一小团褐色成致密网状，一种是如同芽孢状，一串一串的。细胞筛不出来后面的试验根本就无法进行，真是心急如焚，大家帮帮忙吧！ gsy1234：严格保证泡酸，消毒过程！，换血清和重新配培养基！我有过类似经历！这样处理后就没出过问题！舍不得孩子套不住狼！麻烦一点，总比浪费时间和金钱重要！
weric：你的问题很严重, 且强烈怀疑有fungi 污染(是如同芽孢状，一串一串的), 所以根本解决之道, 先把 CO2 incubater 以酒精和抗 fungi 药物擦拭, 铁盘拿去灭菌. 然后所有 mdium PBS 重新配制, 最后重新解冻新细胞来培养
zhizuchangle：最好来一次彻底清洗，包括培养箱水盘和无菌室，所养的细胞全部高压后弃去，水盘别忘了加点硫酸酮，可以防霉菌。若是怀疑培养液污染，可以在每次配液时先装一小瓶观察，直到确定无污染再使用！
ssmu_fruit：不必太紧张,这种经历养细胞者一般都会有。瓶口不要太松(防止孢子飘入),放入培箱前瓶口烧一烧,瓶身用酒精棉擦拭一下。培基等过滤过的液体不必扔掉(0.22um),没有问题。培箱开启前大家都用酒精消毒手,避免不必要的污染。要保证冻存的细胞未经污染.
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