6. 验证出3-5个与GSK-3β相互作用的蛋白。
7. 完成基因芯片筛选分析，鉴定出若干由PTEN调节的靶基因。
8. 验证第二年通过分离纯化鉴定的若干PTEN相关蛋白与PTEN的相互作用是否为直接的。
9. 完成PTEN磷酸化与p53活性的相关性分析以及AKT与p53相互作用的分析，确定PTEN是否间接调节p53通路。
10. 初步探究S100A7、S100A11和PHP14对肺癌发生和/或发展的分子机理。 11. 获得细胞核蛋白质动态修饰、修饰类型、修饰位点信息，为进一步功能分析打下基础。
12. 阐明Mig-2调控细胞周期和基因组不稳定性的新分子机制。
13. 得到3-5候选调控蛋白转基因与敲基因果蝇动物模型，根据表型初步判断其生理功能；确定候选蛋白与Hippo通路蛋白的相互作用。 14. 确定Hpo磷酸化Sav的关键位点与磷酸化的生物学意义。 15. 确定Hippo通路蛋白特别是Hpo与线粒体功能的相互关系。
16. 培养研究生12名，培养博士后4名。发表IF>10的论文4篇，IF>5的论文16篇。申请专利4-8项。
第四年：
研究内容
1. 开始研究Sap1相互作用蛋白在DNA复制起始中的机理研究。 研究人细胞Sap1在DNA复制起始中的作用。
2. 开始新确定的DNA复制蛋白在DNA复制起始及延长阶段的作用机理研究。 3. 开展研究Cds1及Dna2相互作用蛋白在维持基因组稳定性中的作用。 4. 进一步研究受GSK-3β调控的基因对细胞周期调控、DNA损伤监测点调控，或对肿瘤的发生、发展中的作用、意义及其机理。
5. 鉴定各个蛋白与GSK-3β相互作用的肽段或GSK-3β对各个蛋白磷酸化的位点。
6. 研究各个与GSK-3β相互作用蛋白对细胞对周期调控、DNA损伤监测点调控，或对肿瘤的发生、发展中的作用，以及与GSK-3β对该蛋白功能的影响。 7. 采用染色质免疫共沉淀法（ChIP）检测PTEN与染色质物理上的关联，随后以荧光素酶分析法检测PTEN对靶基因启动子的转录调控。进行Dnase I指纹图谱分析，通过核心指纹图谱系统精确限定PTEN与靶基因启动子的结合区域。基于指纹图谱分析数据，在启动子区域进行一系列的缺失来缩小PTEN结合的最小的必需序列。
8. 利用课题组三的蛋白质分析平台鉴定PTEN与有丝分裂相关蛋白质群的物理
性相互作用的结构域及蛋白质修饰位点。进一步通过RNAi等分析已验证蛋白的功能特性。
9. 建立条件性PTEN knock-in小鼠模型。
10. 在不同PTEN和p53状态的乳腺癌细胞株中，通过Western 分析检测p53、 Apaf-1、PUMA和PAC1的基本表达水平。在PTEN siRNA以及PTEN189突变的细胞株中再次检测p53、Apaf-1、PUMA和PAC1的表达水平。 11. 采用基因表达芯片和/或双向电泳等技术筛选S100A7、S100A11和PHP14基因沉默后，对其所调控的基因或蛋白群表达的影响。
12. 分析关键蛋白质表达和修饰变化，激起涉及关键生物学机制和信号传导途径，对关键蛋白质通过基因表达干预、利用RNAi和小分子化合物进行抑制和/或活化进行功能研究。
13. 研究Mig-2调控的多重细胞信号通路及其协同整合调控肿瘤侵袭性生长的分子机制，特别要关注Mig-2信号通路与Wn、Hedgehog及生长因子信号通路中的交互作用。
14. 利用构建的转基因以及敲基因果蝇模型，通过上位分析（epistatsis）探讨候选调控蛋白与已知Hippo通路蛋白的遗传学关系，并结合前述所得体外相互作用分析通路激活机制。
15. 探讨Hippo通路蛋白直接影响基因组稳定性的机理，分析通路蛋白如Wts、Mats等与PTEN和P53等蛋白之间的关系。
16. 结合果蝇研究，选择1-2种候选调控蛋白构建诱导型转基因小鼠模型，探讨候选基因在哺乳动物中的功能保守性。 17. 整理分析数据，撰写论文。
预期目标
1. 确证Sap1相互作用蛋白在DNA复制起始中的作用。 确证人细胞Sap1在DNA复制起始中的作用。
2. 初步确定新的DNA复制蛋白在DNA复制中的作用机理。
3. 初步确定Cds1及Dna2相互作用蛋白在维持复制叉的稳定性、DNA修复、及基因组稳定性的作用机理。
4. 深入阐明3-5个受GSK-3β调控的基因对细胞周期调控、DNA损伤监测点调控的作用，或对肿瘤的发生、发展中的作用。
5. 鉴定3-5个与GSK-3β相互作用蛋白的具体作用肽段或位点。
6. 初步阐明3-5个与GSK-3β相互作用蛋白对细胞对周期调控、DNA损伤监测点调控，或对肿瘤的发生、发展中的作用，以及与GSK-3β相互作用后对该蛋白功能的影响。
7. 对之前通过基因芯片鉴定的PTEN靶基因，确定PTEN调控这些靶基因表达的机理。
8. 完成PTEN及其相关蛋白质群的功能分析，评价与PTEN相互作用的蛋白质群在控制有丝分裂中的重要性。 9. 获得条件性PTEN knock-in小鼠。
10. 完成在PTEN缺失或突变的状态下p53通路蛋白表达水平的测定分析，证实PTEN功能障碍能引发p53通路活化。
11. 揭示S100A7、S100A11和PHP14抑制肺癌细胞生长和/或转移的信号通路。 12. 获得和蛋白质动态变化所涉及的关键生物学机制，分析相互作用蛋白质。 13. 揭示Mig-2信号通路与Wnt、Hedgehog及生长因子信号通路的蛋白质群之间在调控肿瘤侵袭性生长中协同整合作用。
14. 阐明候选蛋白在Hippo通路中的位臵与激活通路的分子机制。 15. 确定Hippo通路与基因组稳定性之间的直接关系。 16. 得到1-2种候选蛋白的转基因小鼠模型。
17. 培养研究生12名，培养博士后4名。发表IF>10的论文4篇，IF>5的论文16篇。申请专利4-8项。
第五年：
研究内容
1. 多方面深入研究Sap1相互作用蛋白在DNA复制起始中的作用机理。探讨人细胞Sap1在DNA复制起始中的作用。
2. 深入研究新的DNA复制蛋白在DNA复制起始及在复制叉生化反应中的机理。
3. 探讨Cds1及Dna2相互作用蛋白在维持基因组稳定性中的作用。
4. 进一步研究各个与GSK-3β相互作用蛋白对细胞周期调控、DNA损伤监测点调控，或对肿瘤的发生、发展中的作用，意义及其机理，以及与GSK-3β相互作用后对该蛋白功能的影响、意义及其机理。
5. 在从PTEN189小鼠和其同窝对照小鼠的脾脏和胸腺的骨髓和淋巴中的造血细胞中进行免疫荧光染色以及活细胞成像分析并且检测有丝分裂检验点应答诺考达唑（nocodazole）的活性。
6. 切除小鼠器官（特别是被处死小鼠的乳房、前列腺、肺和淋巴结）用于解剖和显微镜分析，对肿瘤组织进行免疫组化分析。 7. 在不同组中处理小鼠组织，检测PTEN 189的表达。
8. 单独使用或者联合使用依托泊苷（Etoposide）和N-(4-羟苯基)维胺酯（4-HPR），检查不同癌细胞中以及之前建立的PTEN siRNA以及PTEN189突变细胞对化
疗药物的敏感性。
9. 在前几年工作的基础上，采用信号通路的特异性抑制剂研究S100A7、S100A11和PHP14等差异蛋白促进肺癌细胞生长和/或转移的分子机制或可能的信号通路。
10. 探讨在细胞衰老过程中相关蛋白质群的动态表达和修饰变化规律,从体外到体内深入研究候选蛋白质群对细胞增殖、细胞周期调控的影响。
11. 探讨在所发现的Mig-2新相互作用蛋白质中，参与调控肿瘤侵袭性生长的新蛋白质分子，研究其功能和分子机制，特别要关注这些新蛋白质分子对调控肿瘤生长和侵袭的转录因子的影响。
12. 构建哺乳动物与果蝇调控蛋白对应基因的表达载体，在细胞水平上探讨其在Hippo通路调控机制的保守性；利用构建的转基因小鼠模型，分析调控蛋白的功能。
13. 检测肿瘤组织中新调控蛋白与靶蛋白表达水平的变化。 14. 数据整理、分析，论文撰写与发表。
预期目标
1. 阐明Sap1相互作用蛋白在DNA复制起始中的作用机理。阐明人细胞Sap1在DNA复制起始中的作用。
2. 阐明新发现的DNA复制蛋白在DNA复制起始及在复制叉生化反应中的作用机理。
3. 阐明Cds1-Dna2的通路。 阐明Cds1及Dna2相互作用蛋白在维持复制叉及基因组稳定性中的作用。
4. 深入阐明3-5个与GSK-3β相互作用蛋白对细胞对周期调控、DNA损伤监测点调控，或对肿瘤的发生、发展中的作用，以及与GSK-3β该蛋白功能的影响及意义；发现1-2个药物作用的靶点。
5. 完成对小鼠细胞的免疫荧光染色以及活细胞成像分析，评价动粒断裂、过早染色体分离和非整倍性的发生频率。
6. 对结果进行汇总分析，获得PTEN189 knock-in小鼠中肿瘤发生的频率。 7. 完成不同细胞对化疗药物的敏感性分析，评价PTEN与p53的功能性交叉效应如何影响癌细胞对化疗的应答。
8. 初步阐明S100A7、S100A11和PHP14对肺癌发生和/或发展的分子机理。 9. 利用稳定同位素标记结合高灵敏度的生物质谱鉴定技术，系统研究细胞核蛋白质的动态表达、修饰类型、修饰位点，阐明其信号转导机制及其在衰老过程中的功能。
10. 揭示Mig-2新相互作用蛋白质在调控肿瘤侵袭性生长中对肿瘤侵袭性生长相
关转录因子调控的分子机制；建立针对这一机制的靶向阻止肿瘤侵袭性生长的实验动物模型。有关模型和所针对的靶分子将申请专利。 11. 揭示Hippo通路在结构和功能上的保守性。 12. 得到重要候选蛋白与肿瘤发生的关系。
13. 培养研究生12名，培养博士后8名。发表IF>10的论文4篇，IF>5的论文16篇。申请专利4-8项。