板法 征 干燥效果不好，容易蔓延 和兼性厌氧菌 4.两种菌种保存方法的比较 项目 适用对象 培养基类型 温度 临时保藏法 频繁使用的菌种 固体斜面培养基 4 ℃ 菌落长成后于冰箱中保存，每3～6方法 个月将菌种从旧的培养基转移到新鲜培养基上 缺点 菌种易被污染或产生变异 甘油管藏法 长期保存的菌种 液体培养基 －20 ℃ 将培养的菌液与等体积灭菌后的甘油混合均匀后于冷冻箱内保存
培养基的成分 [例1] 下列描述正确的是( ) A．同一种物质不可能既作碳源又作氮源 B．除水以外的无机物仅提供无机盐 C．凡是碳源都能提供能量 D．有些无机氮源也能提供能量
[解析] 对异养型微生物来说，含C、H、O、N的化合物既是碳源，又是氮源。如蛋白胨既是碳源又是氮源和能源，葡萄糖是碳源同时又是能源。除水以外的无机物种类繁多，如CO2和N2是无机物，但也是某些微生物的碳源和氮源。CO2是光能自养细菌的碳源，但不能提供能量。NaHCO3可作为自养型微生物的碳源和无机盐。硝化细菌所利用的氮源是无机氮源氨，同时氨也为硝化细菌提供用于化能合成作用的能源。
[答案] D
归纳拓展 几种微生物的营养能量来源 微生物类型 化能异养型 化能自养型 光能自养型 共生固氮微生物 自生固氮微生物 碳源 糖类、蛋白 质等有机物 CO2 CO2 糖类等有 机物 CO2 N2 N2 ＋氮源 蛋白质等 NH3 NH4、NO3等 －能源 有机物 NH3 光能 有机物 光能 举例 大肠杆菌 硝化细菌 蓝藻 根瘤菌 固氮蓝藻
纯化大肠杆菌的方法 [例2] 下列有关平板划线的操作，正确的是( ) A．使用已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌
B．打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后需马上塞上棉塞 C．将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划3～5条平行线即可 D．最后将平板倒置，放入培养箱中培养
[解析] 在培养基上接种时，一定要做到无菌操作，以防止杂菌污染影响实验或研究的结果。微生物无处不在，包括空气中也充满了各种微生物，所以无菌操作显得很困难，但在酒精灯火焰附近约10 cm的四周为无菌区，因而菌种试管和待接种试管管口不能离开火焰附近，接种环、棉塞也不能离开火焰附近。接种完毕之后为了防止菌体污染，要在火焰上灼烧管口和接种环。为防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染，应将平板倒置。
[答案] D
易错提醒 要建立有菌观念，接种用具、器皿、空气中都充满了微生物，都有被污染的可能，必须严格地消毒灭菌。同时，在实验室中，不可吃东西、喝水，离开时一定要洗手，以防被微生物感染。使用过的培养基要经过高压蒸汽灭菌后才能丢弃，以免污染环境。
[随堂基础巩固]
1．下列叙述正确的是( )
A．培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质 B．培养基只有两类：液体培养基和固体培养基 C．固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基
D．微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的单个细菌
解析：选A 培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的营养基质。培养基的种类根据划分依据的不同而不同，如根据化学成分可分为天然培养基和合成培养基。固体培养基是液体培养基添加凝固剂形成的，其他成分均相同。单个的微生物形体微小，肉眼无法看到，必须借助仪器才能看到，在固体培养基上用肉眼观察到的是一个菌落。
2．下列操作错误的是( ) A．用酒精擦拭双手 B．用氯气消毒水源
C．实验室用紫外线进行消毒
D．玻璃器皿(吸管、培养皿)用酒精直接擦拭即可达到彻底灭菌的目的
解析：选D 玻璃器皿、金属用具等耐高温、需要保持干燥的物品，应采用干热灭菌法
进行灭菌，而用酒精直接擦拭达不到彻底灭菌的目的。
3．下列关于牛肉膏蛋白胨固体培养基的制备，叙述错误的是( ) A．操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌 B．将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯 C．待培养基冷却至50 ℃左右时进行倒平板
D．等平板冷却凝固约5～10 min后将平板倒过来放置
解析：选A 制备牛肉膏蛋白胨固体培养基时，其操作顺序为计算―→称量―→溶化―→灭菌―→倒平板；由于牛肉膏比较黏稠，称量时可连同称量纸一同放入烧杯；待培养基冷却至50 ℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板；平板冷凝后，应将平板倒过来放置，以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
4．某研究小组从有机废水中分离微生物用于废水处理。下列叙述正确的是( ) A．培养基分装到培养皿后进行灭菌 B．转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线 C．接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养 D．培养过程中每隔一周观察一次
解析：选B 培养微生物过程中应先灭菌再倒平板；每一次划线前都要进行接种环的灼烧灭菌；接种后的培养皿应在恒温培养箱中进行培养，光照会影响温度等条件；培养过程中观察间隔的时间一般不超过24 h。
[课时跟踪检测] (满分50分 时间25分钟)
一、选择题(每小题3分，共24分)
1．下列关于平菇培养的操作程序，正确的是( ) A．配制牛肉膏蛋白胨培养基，接种，高压蒸汽灭菌，培养 B．配制牛肉膏蛋白胨培养基，高压蒸汽灭菌，接种，培养 C．配制棉子壳培养基，接种，高压蒸汽灭菌，培养 D．配制棉子壳培养基，高压蒸汽灭菌，接种，培养
解析：选D 培养平菇常用的培养基有棉子壳、花生饼、玉米芯等，具体的操作程序是：配制培养基，高压蒸汽灭菌，接种，培养。
2．下列有关一种以CO2为唯一碳源的自养微生物营养的描述错误的是( ) A．氮源物质为该微生物提供必要的氮素 B．碳源物质也是该微生物的能源物质 C．无机盐是该微生物不可缺少的营养物质 D．水是该微生物的营养要素之一
解析：选B 该碳源是CO2，属于无机物，不能作为微生物的能源物质。
3．无菌技术包括以下几个方面的叙述，其中错误的是( ) A．对培养操作的空间、操作者的衣着和手进行灭菌 B．对培养器皿、接种用具和培养基等进行灭菌
C．为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行 D．实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品相接触
解析：选A 灭菌是采用强烈的理化因素对用于微生物培养的培养皿、接种用具和培养基进行处理，使物体内外一切微生物，包括芽孢和孢子都要被杀死；实验操作者的衣着和手以及操作空间只能进行消毒。
4．关于实验室培养和纯化大肠杆菌过程中的部分操作，下列说法正确的是( ) A．配制培养基、倒平板、接种需要在酒精灯火焰旁进行 B．倒平板时，倒入的培养基冷却后盖上培养皿的皿盖 C．划线接种时，灼烧接种环后立即进行再次划线 D．划线接种结束后，需将平板倒置后放入培养箱中培养
解析：选D 倒平板、接种需要在酒精灯火焰旁进行，配制培养基不需要在酒精灯火焰旁进行，A错误；倒入培养基后应立即盖上培养皿的皿盖，冷却后将平板倒过来放置，B错误；划线接种时，灼烧接种环后要待其冷却后才能进行再次划线，C错误；划线接种结束后，需将平板倒置后放入培养箱中培养，D正确。
5．将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37 ℃恒温箱的目的是( ) A．对比观察培养基有没有被微生物利用 B．对比分析培养基是否被杂菌污染 C．没必要放入未接种的培养基 D．为了下次接种时再使用
解析：选B 放入未接种的培养基，起到对照作用，可确定培养基是否被杂菌污染。 6．为了保存菌种的纯净需要进行菌种的保藏，下列有关叙述错误的是( ) A．对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法 B．临时保藏的菌种一般是接种到试管的斜面培养基上 C．临时保藏菌种容易被污染或发生变异
D．对于需要长期保存的菌种，可以采用低温－4 ℃保藏的方法
解析：选D 对于需要长期保存的菌种，可采用甘油管藏法，即在3 mL甘油瓶中加入1 mL的甘油后灭菌，将1 mL的菌液转移到甘油瓶中，放在－20 ℃的冷冻箱中保存。
7．平板划线法和稀释涂布平板法是接种微生物的两种常用方法，下列描述正确的是( ) A．都要将菌液进行一系列的梯度稀释
B．平板划线法是将不同稀释度的菌液通过接种环连续划在固体培养基表面 C．稀释涂布平板法是将不同稀释度的菌液倒入液体培养基上进行培养
D．都会在培养基表面形成单个的菌落
解析：选D 平板划线法不需要进行梯度稀释，稀释涂布平板法需要将不同稀释度的菌液涂布到固体培养基的表面。平板划线法和稀释涂布平板法都能在培养基表面形成单个的菌落。
8.右面是微生物平板划线示意图。划线的顺序为①②③④⑤。下列叙述正确的是( )
A．在五个区域中划线前后都要对接种环和培养基进行灭菌 B．划线操作时完全打开皿盖，划完立即盖上
C．接种时不能划破培养基，否则难以达到分离单菌落的目的 D．第①区和第⑤区的划线最终要连接起来，以便比较前后的菌落数
解析：选C 在每次划线前后都要对接种环进行灭菌；进行划线操作时，左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖；注意接种时不能划破培养基，否则难以达到分离单菌落的目的；划线时第①区和第⑤区的划线不能相连。
二、非选择题(共26分)
9．(12分)回答下列微生物培养的问题：
(1)如表是某培养液的成分及含量，该培养液培养的微生物同化作用类型是________；若用此培养液培养固氮微生物，则应除去的成分是__________，应加入的物质是________。
编号 成分 含量 (2)下表为牛肉膏蛋白胨培养基的成分列表，据此回答：
成分 含量
①牛肉膏、蛋白胨在培养基中的作用是提供__________、________、________等营养。 ②要用表中所给材料配制观察细菌菌落状况的培养基，还需添加的成分是________。 ③
表
中
各
成
分
含
量
确
定
的
原
则
是
牛肉膏 0.5 g 蛋白胨 1 g NaCl 0.5 g H2O 100 mL ① (NH4)HCO3 0.5 g ② KH2PO4 3.0 g ③ CaSO4 0.5 g ④ FeCl2 0.5 g ⑤ 维生素 少许 ⑥ 水 1 000 mL ________________________________________________________________________。
④培养基配制好后，分装前应进行的工作是__________。
⑤从配制培养基直到培养完成，所采用的预防杂菌感染的方法0是______________、______________、______________等。