荧光探针的合成及自由基检测研究
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表2 样品中SOD活性检测
样品 数量 建议方法x±SD (U g) 标准方法x±SD (U g-1) 葱 7 180.2±3.1 182.1±5.6 蒜 7 71.3±2.8 72.2±5.2 洋葱 7 50.8±3.5 51.2±6.0 —
—
-1
2.5 方法的再现性
根据这种方法进行了11次测定。峰高的标准偏差是0.42，相对标准偏差是0.28%，这表明该方法的再现性非常良好。
2.6 干扰影响
31种干扰被单独研究来测定以该过程从1.20×10-3molL-1Na2S2O4获得O2-·时对其造成的影响。相对荧光强度±5%的误差可以接受。以下(每mol可接受的量)Na+，Cl-，(超过1500)；葡萄糖，乳糖(1000)；蔗糖，K+，Mg2+(500)；Cu2+，Ca2+，Br-，NO3-(200)；乳糖，SO42-，I-(120)；Zn2+(100)；L-苯丙氨酸，Co2+，Pb2+(80)；HAS，胸腺嘧啶，胞嘧啶(40)；腺嘌呤，鸟嘌呤(30)；硫脲，DNA(20)；RNA，牛血清白蛋白(15)；色氨酸，DL-酪氨酸(10)；及Fe3+，Al3+(2)无影响。试验结果表明大
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多数生物体样本无影响。
2.7 清除O2-·的效果
SOD是O2-·的特定清除剂，这种清除O2-·效果可以用来验证该方法的效率。由图7可见清除效果和SOD数量呈明显线性关系，这证明该方法有效。
2.8 检测样品中SOD的活性
基于这种实验方法成功检测出葱，大蒜，洋葱中SOD活性(表2)。与经典邻苯三酚自氧化检测法相比，该方法具有高敏感度，短检测时间和自动反应的优点。更为重要的是，反应时间由程序严格控制并且反应可以与时间无关迅速完成。虽然经典测定SOD活性的方法，即邻苯三酚自氧化与检测时间密切相关，但这时间不能严格控制，这使得测定不规范并且产生更大误差。此外，金属离子在经典方法中有更大的影响。
3 结论
在这次研究中，碱性Na2S2O4被采用为O2-·的来源，2-(2-吡啶)-苯并噻唑作为新型荧光探针，葱，大蒜，洋葱中SOD活性得以通过流动注射法成功检测。荧光探针因为只能检测O2-·所以具有更好的选择性，而H2O2和相应量HO·不会对超氧阴离子自由基有影响。此外，该反应为全自动并且分析速度迅速，这样更适用于块状样品的检测。因此该法在大规模筛选抗氧化药物和SOD活性检测中有重要使用价值。
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致谢
对国家自然项目科学重点项目基金(No.20335030)和中国山东自然科学基金(No.Z2003B01)表示感谢。
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