这根管路上)和荧光检测器,右侧连接紫外检测器。
10. 打开电脑,双击CLASS-VP→双击Instrument 2,此时如果电脑与仪器成功连接上了,应该听到一声长鸣。
11. Control→LC Setup Assistant 调出LC设备控制界面(有时候双击Instrument 2就有该界面,不用调取),界面上有图形化的泵,自动进样器样品盘,色谱柱等。
12. File→Method→New,点击LC设备控制界面中泵的图形。点击Pumps,B.Flow处输入B泵流速,P.Max处输入最大压力(超过该压力,仪器自动停泵,保护仪器和柱子,一般设定为?)。点击CTO-10Avp,Oven temp处输入柱温。点击RID-10A,~~temp?处输入柱温,Acquisition Channel On前打勾,Run Time处输入运行时间。如果需要梯度洗脱,点击Time Program进行设定。关掉该界面,注意不要关掉Instrument2的界面,点击屏幕右上角的×,这里有两个×,上边的×是Instrument2的,别点错了。
13. File→Method→Save,File name处输入Method名称,一般格式为:“年月日+自己名字”,例如:20110825lzm。Save in处点击下拉菜单选择Local Disk(C:)\\CLASS-VP\\Methods\\年的文件夹,例如:Local Disk(C:)\\CLASS-VP\\ Methods\\2011。点击LC设备控制界面中的Download,载入该方法。 14. File→Sequence→New,Data path处输入:C:\\CLASS-VP\\Data\\data年\\年-月\\年月日+自己姓名。例如:C:\\CLASS-VP\\Data\\data2011\\11-08\\20110825lzm。Data file处输入:年月日a(00)。例如:110825a(00)。Start vial处输入第一个样品在自动进样器样品盘中的位置编号,一般为0。End vial处输入最后一个样品在自动进样器样品盘中的位置编号+1。Injection volume处输入:进样量,单位μL。Repetitions create multiple records签名打勾。全设定完,点击对话框右上部的OK。电脑会用英语询问该文件夹不存在,是否创建之,点Yes。 点击Yes后,会出现Sequence界面,将第一行Reps处的“1”修改为“2”,意为第一个样品进样两次。第一个样品多走一针是为稳定机器。最后一行vial处改为-1,Volume改为1,这样做的目的是为了保护色谱柱,也有其他的保护柱子的方法可以调取出来,酌情选之,或者自己按照14、15中的步骤创建之,但是保护色谱柱的这一步必须要有。
15. File→Sequence→Save,Save in处点击下来菜单,选择Local Disk(C:)\\ClASS-VP\\Sequence\\年\\年-月,例如:Local Disk(C:)\\ ClASS- VP \\ Sequence\\2011\\11-08。File name处输入:年月日+自己名字,例如20110825lzm。 点击Save。点击LC设备控制界面中的Download,载入该Sequene。 16. 看Instrument 2主界面,最上边一行为File、Edit、View等,第二行为新建,打开,保存等命令的图标,第三行为柱温箱开关,RID R.FLOW,Balance,基线归零,冲洗自动进样器,冲洗自动进样器(那两个图标都是冲洗自动进样器?),泵的开关等的图标,点击第一、二、五、六图标按钮。
17. 10 min后,点击泵开关的图标按钮,关掉泵,安装色谱柱,柱子上的一般应有一个箭头的图示,此为流动相流过柱子的方向,这台仪器,柱子按箭头朝上的方向安装,安装好后,再点击泵开关的图标按钮,检查柱子的上下是否漏液,如果漏液则要重新安装。
18. 20min后,点击RID R.FLOW图形按钮,关掉R.FLOW,点击Balance(第三行控制按钮中的第三个)。
19. Control→preview,调出正在运行的图谱,Balance一段时间后,待示差检测器上两个示数均在-50~50之间,点击Instrument 2主界面第三行中图标按钮中的第四个(基线归零)。
20. 最小化preview界面,回到LC设备控制界面,点击Sequence Run→start。 21. 仪器会按Sequence编辑的序列逐一进样,点击LC设备控制界面中,形象化的样品盘图标可进入Sequence界面,跑完的样品会在Status处显示为“Completed”。没有Completed的样品可在Sequence界面上修改,例如:删除或者插入样品,更改Method等。
22. 更改正在运行的样品运行时间的方法:Control→ Extend,输入数字。例如:Control→ Extend,输入5,则延长5min,输入-5则缩短5分钟。
23. 中断当前运行样品和当前Sequence的方法:看上数第二行的命令按钮,在运行Sequence后,有一个红色圆形按钮,鼠标点击之,电脑会用英语询问:“是否停止当前样品,点Yes;是否停止当前Sequence,点No。”此时当前样品就停止了,直接运行下一个样品。如果要停止当前的Sequence,就这两次询问都点Yes。
24. 看跑完样品的图谱的方法:点击CLASS-VP→ offline processing→ Instrument 2→ File→ Data(按年月日和自己的名字找文件夹) → Open→选择要看的图谱,点Open,谱图即被打开,如果谱图上没有积分的峰高和峰面积,就点击屏幕最上边一行的命令按钮中的Analyze。点击Reports → view→ Area%,则能得到更清楚全面的数据报告。
25. 如果梯度洗脱不会设定,即设定方法时,Time Program表格不会填写,点击CLASS-VP→ offline processing→ Instrument 1→ File→Method,随便点击别人的方法,打开,看看有没有设定梯度洗脱的,仿照别人Time Program表格的填法,自己设计自己的Time Program表格。注:设定梯度洗脱,开始时间只能从0.1开始,不能从0开始。
26. 整个Sequence跑完后,关闭软件,电脑与设备成功断开连接,也会听到一声长鸣。
27. 关掉各种设备,最先关掉主控器,其他设备关闭的顺序无严格要求。
流动相:5mM 硫酸 柱温:50/55℃ 进样量:20微升 流速:0.6ml/min
葡萄糖出峰时间:8.5-9.0min 运行时间:15min