四、试验用品:
1、显微镜、温箱、1/1000天平。
2、盖玻片、载玻片、培养皿、量筒、三角烧瓶、皮头玻璃棒、酒精灯、小瓶、滴瓶、石棉网。
3、无水酒精、冰醋酸、蒸馏水、洋红。 4、小镊子、解剖针、吸水纸。
五、试验方法:
1、配置药品:
(1) 卡诺液:纯酒精3份,冰醋酸1份。 (2) 醋酸洋红:
取45毫升冰醋酸加入55毫升蒸馏水中,至于酒精灯上加热至沸,移去火源,徐徐加入2克洋红粉末。再加热1-2分钟冷却后加入几滴2%铁明矾(硫酸铁铵),过滤后至于棕色瓶中备用。
2、取材固定:取材的时间及大小必须十分恰当,才能获得更多的花粉母细胞分裂相,各类作物减数分裂时相关的形态特征表现不一,现列表简述,供参考。
附表:各类作物花粉母细胞减数分裂时期的相关形态特征 作物名称 相关形态特征 猕猴桃 幼蕾横径4~5mm为宜。 蚕豆 幼小花蕾长约3~4mm为宜。 豌豆 同
大葱 从总苞刚刚散开的上端花蕾 洋葱 同
西瓜 花蕾约长1mm左右。 杏 花芽顶端微型小口7×3mm
桃 花芽顶部有裂口,裂缝线露白,大小在6×3mm。 白梨 花芽基部露绿或褐色,花蕾大小3×2.5mm为宜。 苹果 花芽定形后,露叶1-2片,花蕾大小7.5×3mm。 葡萄 展叶4-5或4-8片,花蕾横径1.4-1.5mm。 枣 花蕾横径1.5mm左右。
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在花序的分枝上,以上中部小穗发育早,无柄小穗发育早。
在一天内减数分裂旺盛的时间,因作物不同,时间不一,西瓜在早晨4-5时,蚕豆、豌豆在8-10时,洋葱在3-11时,玉米7-8:30,果树以6-11时为好。
按标准取来之材料,投入卡诺氏液中,固定1-2小时,用95%的酒精洗两次,转入70%酒精中保存。
3、染色制片
用镊子取出经过固定的大小合适的花苞,先置于吸水纸上,吸去保存液或固定液,移至载玻片上,剖出花药,滴一小滴染色液,(醋酸洋红、醋酸地衣红、或醋酸-铁矾-苏木精I或III)注意切勿多加,用弯头解剖针截断花粉,并轻轻挤压,使花粉母细胞从切口散出。而后用镊子把所有药壁残渣检除干净,这很重要,否则材料不易分散压平,片面不清洁,有碍观察,而且制作固定片时会引起材料的大量脱落。置镜下初步检查,如花粉母细胞正处于分裂期即加上盖片,在其四周稍加染色液,将载片在酒精灯焰上来回烘烤几次,注意勿使药液沸腾,接着压片,如果染色太浅,可在盖片四周稍加染色液,待其渗透,再烘、再压,直至染色体着色明显清晰为止。
4、镜检
观察时首先要识别几种细胞:体细胞、花粉母细胞、四分体脱开后刚发育的幼小花粉粒以及成熟的花粉粒等。一般在镜下可以看到一些形态较小而且整齐均一的细胞,那是花药壁体细胞,同时可看到一些形态显著较大,比前面那种细胞大上十倍、圆形或扁圆形,不很规则,其细胞核较大,那就是花粉母细胞,如有形状比体细胞大但比花粉母细胞小,略呈扇形的细胞,那就是从四分体脱开后的幼小的花粉,如有形状较大,椭圆形,似有明显的外壳,内部较透明的细胞,则是长大的花粉粒。减数分裂是从花粉母细胞开始的,凡形状大小同花粉母细胞相近而核范围内似有空腔出现丝状、条状、棒状物者,即正在进行减分裂,注意对这类细胞进行观察检查。
六、作业
1、每人作出二张良好的临时片。
2、绘制减数分裂图二个(分裂期不限),并简述其特征。
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实验三 染色体核型分析
一、实验目的及意义
把生物核内全部染色体按其形态特征所进行的综合分析,称为染色体核型分析。染色体数目的多少和组成是生物性状稳定的前提,对生物染色体的核型分析,对于鉴定和确定染色体变异具有重要意义。
通过本实验,要求学生理解核型分析的原理及目的,掌握染色体核型分析的一般方法。
二、原理:
各种生物的染色体数目都是恒定的,而且它们在体细胞中常常是成对存在的。可以根据同源染色体的形态特征如长度、臂比、着丝点的类型、随体的有无等进行配对、鉴别和命名,为研究染色体变异提供参考。
三、用品:
剪刀、尺子、胶水、染色体照片
四、材料和方法
1、材料:黑麦2n=2x=14 2、方法:
(1)测定染色体的长度:染色体长度可分为绝对长度和相对长度。绝对长度是在显微镜下测量的长度(u)。一般采用相对长度,相对长度(%)是指一条染色体的实测长度占整个染色体组的总长的百分率。
(2)臂比=长臂长度/短臂长度
(3)着丝点类型:臂比为1.00时,为正中着丝点(T),臂比为1.01一1.70时,为中部着丝点(m),臂比为1.71一3.00时,为近中着丝点(sm),臂比为3.01一7.00时为近端着丝点(st),臂比为7.00以上时,为端部着丝点(t)。
(4)根据所测数据,对各对染色体进行配对,并剪下粘贴,给予序号命名。
五、作业
对黑麦的染色体进行核型分析。
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暂编号 1′ 2′ 3′ 4′ 5′ 6′ 7′ 8′ 9′ 10′ 11′ 12′ 13′ 14′ 相对长度(%) 臂比 着丝点类型 备注
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实验四 分离规律的验证
一、实验目的:
通过对杂种二代(F2)一对性状的分离现象的观察,加深对孟德尔分离规律的理解。
二、实验材料
1、玉米杂种F2分离果穗和固定的杂种Fl雄蕊。 2、番茄杂种F2分离植株。
三、实验用品
培养皿、镊子、吸水纸、显微镜、载玻片、盖玻片、解剖刀、铅笔、橡皮、报告计载表、计算器、I2一KI溶液。
四、实验原理
分离规律指出,相对性状由相对的两个遗传因子控制,一个来自交方,另一个来自母方,两个遗传因子在体细胞内成对存在。
当杂种形成配子时,成对因子彼此分离,因此,每个配子内只含有相对因子的一个,配子数目相等,并且各种异性配子相互结合的机会均能等,从而使杂种植株在自交或测交的情况下,表现出一定的比例(3:1或1:1)。现以玉米性状分离和配子分离来证实。
(一). 玉米:
1、性状分离:玉米中,紫色籽粒玉米和红色籽粒表现为一对基因的差别,以隐性红色籽粒玉米为母体,与纯合显性紫色籽粒玉米杂交,子代为紫色籽粒。F1植株在减数分裂时,等位基因要发生分离,F1自交产生显隐性为3:1的分离比例,F1与隐性亲本测交后,得到显隐性为1:1的分离比例。
2、配子分离:杂合非糯玉米在花粉粒上的分离,直接证明配子发生分离,也直接说明了相对基因的分离,纯合糯玉米(wxwx)产生的花粉粒含枝链淀粉,与碘作用呈红棕色,纯合非糯玉米{WxWx}产生的花粉粒含枝链淀粉,与碘作用呈红棕色,杂合非糯玉米(Wxwx)则产生上述两种数目相等的花粉粒,用碘染色后后,半数花粉粒呈兰黑色,半数花粉粒呈红棕色,由此证明,基因的分离是在形成配子的减数分裂过程中进行的。
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