Western Blot实验步骤(3)

2021-09-24 15:17

溶解后,用浓盐酸调pH至所需点(见下所示),最后用蒸馏水定容至250ml,高温灭菌

后室温下保存。

PH HCl

7.4 约17ml

7.5 约16m

7.6 约15ml

8.0 约10ml

1.74mg/ml (10mmol/L)PMSF

PMSF 0.174g

异丙醇 100ml

溶解后,分装于1.5ml离心管中,-20℃保存。

0.2mol/L NaH2PO4

NaH2PO4(MW119.98) 12g

蒸馏水至 500ml

溶解后,高压灭菌,室温保存。

0.2mol/LNa2HPO4

Na2HPO4·12H2O(MW 358.14) 71.6g

蒸馏水至 1000ml

溶解后,高压灭菌,室温保存。

10%SDS

SDS 10g

蒸馏水至 100ml

50℃水浴下溶解,室温保存。如在长期保存中出现沉淀,水浴溶化后,仍可使用。 10%过硫酸胺(AP)

过硫酸胺 0.1g

超纯水 1.0ml

溶解后,4℃保存,保存时间为1周。

1.5mol/L Tris·HCl(pH8.8)

Tris (MW121.14) 45.43g

超纯水 200ml

溶解后,用浓盐酸调pH至8.8,最后用超纯水定容至250ml,高温灭菌后室温下保存。 0.5mol/L Tris·HCl(pH6.8)

Tris (MW121.14) 15.14g

超纯水 200ml

溶解后,用浓盐酸调pH至6.8,最后用超纯水定容至250ml,高温灭菌后室温下保存。

Western Blot实验步骤

40%Acr/Bic(37.5:1)

丙稀酰胺(Acr) 37.5g

甲叉双丙稀酰胺(Bic) 1g

超纯水至 100ml

37℃下溶解后,4℃保存。使用时恢复至室温且无沉淀。

20%Tween20

Tween20 20ml

蒸馏水至 100ml

混匀后4℃保存。

(二)使用液

单去污剂裂解液(50mmol/L Tris·HCl pH8.0,150mmol/L NaCl,1%TritonX-100,100 g/ml PMSF):

1mol/L Tris·HCl(pH8.0) 2.5ml

NaCl 0.438g

TritonX-100 0.5ml

蒸馏水至 50ml

混匀后, 4℃保存。使用时,加入PMSF至终浓度为100 g/ml(0.87ml裂解液加入1.74mg/ml PMSF50μl)。

0.01mol/L PBS( pH 7.2-7.4)

0.2 mol/L NaH2PO4 19ml

0.2 mol/L Na2HPO4 81ml

NaCl 17g

蒸馏水至 2000ml

G250考马斯亮蓝溶液(测蛋白含量专用)

考马斯亮蓝G250: 100mg

95%乙醇: 50ml

磷酸: 100ml

蒸馏水至 1000ml

配制时,先用乙醇溶解考马斯亮蓝染料,再加入磷酸和水,混匀后,用滤纸过滤,4℃保存。 0.15 mol/L NaCl

NaCl(MW58.44) 0.877g

蒸馏水至 100 ml

高温灭菌后,室温保存。

100mg/ml 牛血清白蛋白(BSA)

BSA 0.1g

0.15 mol/L NaCl 1ml

溶解后,-20℃保存。制作蛋白标准曲线时,用0.15 mol/L NaCl进行100倍稀释成1mg/ml,-20℃保存。

10%分离胶和4%浓缩校

10%分离胶(两块胶,10ml) 4%浓缩胶(两块胶,5ml) 超纯水 4.85ml 3.16ml

40%Acr/Bic(37.5:1) 2.5ml 0.5ml

1.5 mol/L Tris·HCl(pH8.8) 2.5ml -

Western Blot实验步骤

0.5 mol/L Tris·HCl(pH6.8) - 1.26ml

10%SDS 100 l 50 l

10%AP(过硫酸胺) 50 l 25 l

TEMED 5 l 5 l

加TEMED后,立即混匀即可灌胶。

还原型5XSDS上样缓冲液(0.25mol/L Tris·HCl pH6.8,0.5mol/L二硫叔糖醇,10% SDS,0.5%溴酚蓝,50%甘油)

0.5 mol/L Tris·HCl(pH6.8) 2.5ml

二硫叔糖醇(DTT,MW154.5) 0.39g

SDS 0.5g

溴酚蓝 0.025

甘油 2.5ml

混匀后,分装于1.5ml离心管中,4℃保存。

电泳液缓冲液(25mmol/L Tris,0.25mol/L甘氨酸,0.1% SDS)

Tris(MW121.14) 3.03g

甘氨酸(MW75.07) 18.77g

SDS 1g

蒸馏水至 1000ml

溶解后室温保存,次溶液可重复使用3~5次。

转移缓冲液(48mmol/L Tris,39mmol/L甘氨酸,0.037% SDS,20%甲醇)

甘氨酸(MW75.07) 2.9g

Tris(MW121.14) 5.8g

SDS 0.37g

甲醇 200ml

蒸馏水至 1000ml

溶解后室温保存,次溶液可重复使用3~5次。

10X丽春红染液

丽春红S 2g

三氯乙酸 30g

磺基水杨酸 30g

蒸馏水至 100ml

使用时将其稀释10倍。

TBS缓冲液(100mmol/ L Tris·HCl pH7.5,150mmol/L NaCl)

1 mol/ LTris·HCl(pH7.5) 10ml

NaCl 8.8g

蒸馏水至 1000ml

TBST缓冲液(含0.05%Tween20的TBS缓冲液)

20%Tween20 1.65ml

TBS 700ml

混匀后即可使用,最好现用现配。

1*TBST 1L

Tris base 2.422g (MW121.4)

Nacl 8.775g

Western Blot实验步骤

Tween20 0.5ml

封闭液(含5%脱脂奶粉的TBST缓冲液)

脱脂奶粉(国产,安怡牌) 5g

TBST 100ml

Western Blot实验步骤(3).doc 将本文的Word文档下载到电脑 下载失败或者文档不完整,请联系客服人员解决!

下一篇:个人所得税年度申报表

相关阅读
本类排行
× 注册会员免费下载(下载后可以自由复制和排版)

马上注册会员

注:下载文档有可能“只有目录或者内容不全”等情况,请下载之前注意辨别,如果您已付费且无法下载或内容有问题,请联系我们协助你处理。
微信: QQ: