量取芦丁标准液1.00mL，置10mL刻度试管中，加30%乙醇至5mL，加5%NaNO20.30mL，摇匀后放置5min，加10% Al(NO3)3 0.30mL，摇匀后放置6min,加4%NaOH2.00mL，再用30% 乙醇稀释至刻度，摇匀后放置10mL，置1cm比色皿中在波长400-600nm 之间，测定吸收谱,确定最大吸收波长为500nm，WFZ UV-4802H紫外可见分光光度计扫描得下图，可知在波长400-600nm 之间，其峰值在500nm处。
超声强化碱法从槐米中提取芦丁的工艺研究
图5.1 芦丁标准样波长扫描图
③标准曲线制备
精密吸取0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00mL上述芦丁标准溶液，分别置于6 支10mL 刻度试管中，按②项下的方法，自“加30% 乙醇至5mL”起，同法操作，于500nm 测定吸光度（30%乙醇作测定空白），并记录数据。
④数据处理
实际称取的芦丁标准品为0.0131g，而标准品供UV法测定，含量为92.5%，所以经过换算后，将其对应的质量浓度填入下表，单位是mg/ml。
表5.3 芦丁标准液浓度- 吸光度值
芦丁标准液体积（ml）
芦丁标准液浓度（mg/ml）
吸光度 0
1 2 3 4 5
0.024235 0.048470 0.072705 0.096940 0.121175
0.293 0.586 0.820 1.041 1.379
超声强化碱法从槐米中提取芦丁的工艺研究
用Microsoft Excel 工作表处理，得芦丁标准液浓度C 与吸光度A 的关系曲线的回归方程。
图5.2 芦丁标准曲线
（2）芦丁样品溶液制备与测定
①样品溶液的制备
取槐米样品2g置于锥形瓶中，按各因素条件经碱和超声波处理后过滤得溶液，过滤后得到样液。
②芦丁吸光度的测定
取4支10mL刻度试管并编号，将①中的样液精密吸取1.00mL分别置于3支10mL刻度试管中，另一支加入1.00mL30%乙醇作测定空白，加30%乙醇至5mL，加5%NaNO20.30mL，摇匀后放置5min，加10% Al(NO3)3 0.30mL，摇匀后放置6min,加4%NaOH2.00mL，再用30% 乙醇稀释至刻度，摇匀后放置10min，置1cm比色皿中测定500nm处的吸光度，并记录数据。 ③计算公式
得到芦丁的标准曲线后，可以推导出芦丁提取率的计算公式： 首先可以得到芦丁的质量浓度C（mg/ml）与吸光度A的关系：
A 11.05C 0.017
·······················································（5.1）
超声强化碱法从槐米中提取芦丁的工艺研究
而芦丁提取率Y与芦丁的质量浓度C的关系为（即芦丁提取率的计算公式）：
Y
提取出芦丁的质量槐米样品的质量
100%
CDVM
·························（5.2） 100%·
式中：
Y为提取率，即芦丁在样品中的含量百分比； C为芦丁的质量浓度，单位为mg/ml；
D为显色处理时稀释倍数，为10，由比色皿最大刻度（10ml）除以吸取样液体积（1ml）得到；
V为处理槐米样品时的液体体积，单位为ml（有料液比有关，比如料液比为1:40，则V=80ml如果料液比为1:50，则V=100ml）； M为槐米样品的质量，单位为g。
综合公式5.1和公式5.2，可得芦丁提取率简化公式：
Y
（A-0.017）V
100% %
100 M11.05 MCV
································（5.3）
由于为简化公式，所以式中字母不带单位，仅表示数据。
6 结果与讨论
6.1 超声波处理时间对芦丁提取率的影响
为了探讨超声波处理时间对芦丁提取率的影响，在其他参数相同的条件下，即将超声波粉碎机的保护温度设为40℃，提取PH为9，功率400W，料液比1:50分别在提取时间为3、5、7、9、11min下提取芦丁，所得芦丁提取率与处理时间之间的关系如表6.2所示。
时间（min）
3
5 7 9 11
吸光度（平均）
1.275 1.436 1.563 1.289 1.349
芦丁提取率（%）
5.58 6.39 7.02 5.57 5.75
表6.1 超声波处理时间对芦丁提取率的影响
由表6.1可知，开始，随着超声波处理时间的增长，芦丁的提取率也增加，到7min
超声强化碱法从槐米中提取芦丁的工艺研究
时出现最大值，之后芦丁的提取率便降的很快，到11min时虽说有点回升，但回升不是很明显。之所以跌得很快，应该是处理时间过长造成大量的细胞被完全破坏，使细胞中其他物质大量的被溶解。
6.2 超声波处理功率对芦丁提取率的影响
为了探讨超声波处理功率对芦丁提取率的影响，在其他参数相同的条件下，即将超声波粉碎机的保护温度设为40℃，提取时间为7min，提取PH为9，分别在提取功率为200、300、400、500、600W下提取芦丁，所得芦丁提取率与处理功率之间的关系如表6.2所示。
功率（W）
200 300 400
500 600
吸光度（平均）
1.443 1.522 1.573
1.402 1.157
芦丁提取率（%）
6.39 6.80 7.05
6.03 5.12
表6.2 超声波处理功率对芦丁提取率的影响
由表6.2可知，芦丁的提取率随着功率的上升而平稳上升，到400W时达到最大值，之后便下降，到500W后，下降的很快，可能是因为功率过大导致其他物质的溶解量增大，对芦丁的提取率受到干扰。
6.3 PH对芦丁提取率的影响
为了探讨PH对芦丁提取率的影响，利用氢氧化钠改变溶液的PH值，在其他参数相同的条件下，即将超声波粉碎机的保护温度设为40℃，提取时间为7min，功率400W，分别在提取PH为8、9、10、11、12下提取芦丁，所得芦丁提取率与PH之间的关系如表6.3所示。
PH 8 9 10 11 12
吸光度（平均）
1.321 1.581 1.661
1.316 1.105