舒筋活络胶囊抗类风湿性关节炎作用及机理研究(2)

2021-09-24 17:34

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类风湿关节炎(rheumatoidarthritis,RA),是以对称性、多

发性关节炎为主要表现的全身性疾病,我国的患病率为O.3%~O.4%。任何年龄均可发病,多见于30~50岁女性Ⅲ。发病年龄80%在20~45岁,女性是男性的3倍。自1800年RA被首次认定以来,全球平均有O.3~2.1%的人群罹患此病,所造成的活动功能障碍是非RA病人的6倍,其生命预期值与正常人群相比降低15~20年n¨”。患RA因种族、地理环境不同而有异,据统计,在美国65岁以上RA发生率高达10%“1。该病早期由于关节的衬里和被覆的肌腱炎症造成关节肿胀、疼痛、活动困难,约有10%~15%患者病情进展迅速,在两年内出现关节软骨、骨破坏和畸形。约70%患者的多关节炎呈反复、周期性发作,并逐渐加重,最终导致关节功能减退和丧失。RA是一种慢性、致残率很高的常见病。据美国统计,RA在所有丧失劳动能力疾病中,占第二位“1。

类风湿性关节炎属于祖国医学中的“痹证”范畴,其病因较复杂,

在《素问 痹论》中曾提出:“风寒湿三气杂至合而为痹”,后来又有医家从刁i同侧面充实。中医药治疗RA有复方、单味药和外治等方法,取得了较好疗效。现代医学认为RA发病机制与感染、遗传、内分泌等因素有关,主要病理改变为关节滑膜及周围结缔组织异常增生,关节软骨进行性破坏为主的慢性自身免疫性疾病。以滑膜衬里层细胞增生,血管翳形成,单核细胞浸润,进而软骨侵蚀和关节破坏‘61。西医以非甾体抗炎药及生物制剂应用最多,但因长期大剂量应用此类药物,其不良反应较为严重,并且大部分生物制剂需要高度纯化的蛋白质,不仅价格昂贵,而且口服活性差,在体内又很快被消除。

舒筋活络胶囊具有祛风除湿、舒筋活络、消炎止痛等功效,主治

风寒湿痹、筋骨疼痛,类风湿性关节炎等症。本课题运用现代药理学研究手段,观察舒筋活络胶囊抗炎、镇痛作用及对免疫功能的影响,并对其抗RA药理作用及机理进行了探讨,为其临床应用提供药理学依据。

实验研究

1、实验材料

1.1实验药品与试剂

舒筋活络胶囊处方由五加皮、威灵仙、羌活等中药组成,由四川

省中药研究所中试中心提供,批号:03l009。实验前用蒸馏水稀释成大鼠给药浓度为33.2%、16.6%、8.3%(g生药/100m1),灌胃(ig)体积为1m1/1009体重。小鼠给药浓度为16.6%、8.3%、4.15%(g生药/lOOml),灌胃(ig)体积为O.2ml/109体重。实验分高、中、低剂量,分别相当于临床成人(60kg)日用量的20、10、5倍。

正清风痛灵:西安利君制药股份有限公司,批号:0310379;

地塞米松磷酸钠注射液:湖北天药药业股份有限公司,批号:

20030813:

盐酸吗啡注射液:沈阳第一制药厂,批号:95030l;

硫酸庆大霉素注射液:8万单位/2m1,批号:0204131,石家庄

制药集团公司;

注射用环磷酰胺:上海华联制药有限公司,批号:030801;

卡介苗佐剂:北京生物制品研究所,批号:20040114,60mg/支:

不完全佐剂:1mg/m1sigma公司,与卡介苗佐剂配制成10mg/ml;

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角叉菜胶:(carrageenan)SigIIla公司,以生理盐水配制成浓度

为1%的溶液;

伊文思兰:(Evansblue)上海化学试剂采购供应站,进口分装,

97040l:

2,4一二硝基氯苯:上海试剂一厂,890901:

NO试剂盒(硝酸还原酶法):南京建成生物工程研究所,030822;TNFRIAKit:解放军总医院科技开发中心放免所;

PGE。RIAKit:解放军总医院科技开发中心放免所:

Bc卜2试剂:一抗:bc卜2(c一2)mousem。noclonalIgGlsanta

cruz公司;二抗及相应试剂盒:北京中杉金桥生物技术有限公司;

fas试剂:一抗:fas(A一20)rabbitpolyclonalIgGsantacruz

公司;二抗及相应试剂盒:北京中杉金桥生物技术有限公司:

1.2实验动物:

小鼠:昆明种,雌雄兼用,体重20±29,由成都中医药大学实

验动物中心提供,动物合格证号:J|『实动管第11号。

大鼠:SD,全雄,体重150一1809,由成都中医药大学实验动物

中心提供,动物合格证号:川实动管第11号。

1.3主要仪器:

热板测痛仪:GJ一8402型,浙江宁海县白石电子医药仪器厂:

电子天平:沈阳龙腾电子称量仪器有限公司,型号:LD600一1,

精度:0.19;

电子天平:sartorious,BP61,精度:0.1mg;

分光光度计:上海棱光技术有限公司,sepectrumlab,22pc;

XH一60lOA型Y计数仪:西安国营二六二厂;

FJ一2lOTP型液体闪烁计数器:西安国营二六二厂:

奥林巴斯Bx一50光学显微镜:日本;

Mias一2000图形分析系统:四川大学图像图形研究所。

1.4统计方法:

使用spsslO.0统计软件包处理实验数据。正态分布数据两两比较采用成组t检验,多组比较采用方差分析。

2、方法与结果

2.1抗炎实验‘71‘8’

2.1.1对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响

取健康雄性小鼠50只,按体重随机分为5组。第一组灌胃蒸馏

水作为空白对照组;第二至四组分别灌胃舒筋活络胶囊高、中、低浓度的药液,作为给药组;第五组腹腔注射O.0059/kg地塞米松作为阳性对照组。每天给药1次,连续3天。末次给药30min后,将20u1二甲苯涂于小鼠左耳廓两面致炎,右耳不涂为对照,致炎1h后处死动物,用直径8111In的打孔器在两耳对称位置取下左右耳片称重,耳廓肿胀度(mg)=左耳片重量一右耳片重量。结果见表l。

表l舒筋活络胶囊对小鼠耳廓肿胀度的影响(X±sD)


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