经重复及其它辅助试验确认其差异后，此４组菌质（复选菌质的１／４）进入决选。复选采用的化学成分比较法应根据样品性质试验决定。１．３第三层决选
一般情况下．决选多以与临床治疗目标紧密相关又较方便的药效试验为指标，例如优选抗慢性乙肝药物，可试用以血清ＩＦＮ诱生为指标等，然而用双向发酵进行雷公藤解毒持效研究。却要求菌质的安全性与有效性并重，因此在决选中安全性以急毒预试ＬＤ∞为主，结合ＨＰＬＣ检测雷公藤甲素含量变化，而有效性因雷公藤有多个药效方向，决定先从第一方向免疫抑制人手。另根据需要增设ＣＫ２（已经灭菌处理的雷公藤药性基质）。试验结果为毒性以ＣＫ。最强，小鼠死亡率达１００％，毒性稍大于ＣＫ２，其它供试各组的毒性都有下降，其强弱顺序为８号＞１４号＞１０号＞４号．４号灵芝菌种组菌质的小鼠死亡率最低，３个剂量组均为０．ＨＰＬＣ测定雷公藤甲素下降规律与毒性下降情况相应。各组供试材料进行免疫试验，各试验组都有不同程度免疫抑制倾向。其不同剂量组间有差别，从体液免疫抑制与细胞免疫抑制等全局来看，４号灵雷菌质的作用全面、良好，灵芝就成为首选菌种。ＩＡ回选试验
为确保优选可靠．决选后还需再加１次回选，故又称３＋１试验，即从首选菌种所产菌质（４号）所属同一类型（Ａ型）中再选择另一组“比较菌质”，即与３号所用的槐耳菌与４号灵芝进行比较试验，结果二者的作用基本相
万方数据
同，说明优选正确，又经反复比较。３号槐雷菌质在“解毒”方面、４号灵雷菌质在“持效”方面各稍占优势．最后参照其它有关冈素选定灵芝作为发酵菌种。比较菌质也可选用１种已被充分证实有效的菌种．于同样基质上发酵所产生的菌质．如曾用云芝Ｃｏｒｉｄｕｓｖｅｕｉｃｏｌｏｒ代替槐耳与含黄芪的全性基质组合发酵成“云苠菌质Ｂ”，作为“比较菌质”与槐芪菌质￡进行比较后，确认槐芪菌质Ｅ被优选。
综观３＋１优选法．初选是基础。复选是核心。决选是关键。回选是保证，都有重要作用而意义有所不同。目前看来它对发酵组合的优选是有益的．但在此基础上更待改进完善。
２复方基质成分配比用量标准优化法
对应用复合成分（由多种不同材料组成）的营养基质、药性基质或全性基质。其配方中的各种材料成分的配比、用量等需进行合理优化．例如研制“槐芪菌质Ｅ”对其全性基质的配方，优化方法是根据槐耳菌质已知的适宜临床剂量，推算出其营养基质的用量，即在其中添加中药黄芪的常规用量（如每人每日１５ｇ），同时扣除等量营养基质就成为全性基质供试配方的标准组，根据此再设立黄芪的半量组、倍量组等不同梯级组，接种槐耳菌种并在一、定条件下进行固体发酵。对各组菌质进行药效、成分比较，从而选定其全性基质的最佳成份、含量配比，才能成为此发酵基质（全性基质）的标准配方。可参照此法用以制定各类有关发酵基质的标准配方。发酵组合才完全优选成功。
３
固体发酵过程基质、菌质成分药效动态比较
在发酵组合优选及优化基质配方成功的基础上。需建
要立一套科学的产品生产工艺。能阐明发酵周期和正确判断发酵终点的标准和方法。可试用“发酵过程动态比较法”。
以灭菌后的基质作为发酵０ｄ．以接种发酵菌种的当天起至菌丝体长满全瓶（全部基质）作为菌丝体生长期，其时间因菌种类别、接种体与基质性状、环境条件等不同而有所不同，如有时即使在看似相同条件下。同一组合的不同发酵瓶间菌丝体的全瓶期也会有差异，就有可能会影响瓶问菌丝体的菌龄和以后同期出料菌质的性效．因此在产品研发时期．发酵周期的计算不宜由真菌在接种后开始生长起计算．而更适宜从菌丝体长满全瓶基质时开始计算．即从全瓶期也即生长期结束起作为发酵的第ｌ天，因此各试验瓶间的发酵起始Ｅｌ期有所不同．这使它们虽有相同的发酵周期，但到达发酵终点的日期仍有不同，直到预设的发酵终点期为止，在此全程内定期（一般隔５ｄ～１０ｄ左右），对瓶内经过不同生长或发酵时间的基质（菌质）无菌操作出样，进行成分与药效检测。以掌握其动态变化规律，可以阐明最合理的发酵周期、正确的发酵终点及其判断方法。在产品投产工艺已稳定后，也可将菌丝体生长期＋发酵期作为总发酵期．比较方便实用。总发酵期满后菌质经出样检验合格即可全面出料、应用。
（下转第１４页）
３．１发酵周期
真菌药用_固体发酵_上游工程建设基本研究方法
１４
中国食用菌
ＥＤＩＢＬＥＦＵＮＧｌ０ＦＣＨＩＮＡ
Ｖ０１．２８Ｎｏ．４
上。畦间行距为４０ｃｍ，便于采菇操作。经５ｄ一８ｄ休整后熟培养使断裂菌丝得以恢复，生物酶活性增强；８ｄ后开袋．挖掉菌袋袋口两头老化菌种，并进行搔菌，把菌袋朝上的料面梳理整平。保持菇棚相对湿度８０％～８５％，温度为１８℃．２０℃。’前期需氧量不是太大，每天适度通风ｌｈ即可：当菌袋袋口菌丝较为浓密时。进入催蕾管理，此阶段菇棚的空气相对湿度８５％～９０％，温度８℃～１８℃为宜，实施变温刺激，一般温差为１０℃为宜，可促进原基形成，此时加强通风，每天适度通风３ｈ左右；１周后当幼菇蕾长
到１ｃｍ左右．此时空气相对湿度８５％一９０％，温度保持在
害。低温时，喷雾到菇面。高温时，只向空气中喷雾化水．原则上少量多次。当菇体长大时，菇柄长３ｃｍ。茹柄粗ｌ
ｃｍ～２
ｃｍ一８
ｃｍ时，菇体已达八分熟。一手握菌
柄，一手抓住菌袋，轻轻旋转即可采下。第一潮菇采后，停止喷水１ｄ一２ｄ。一般情况下每袋可采３潮一４潮菇．生物学效率可达８５％。
【参考文献１
【１】刘月廉，谭树明．野生洛巴伊口蘑菌株分离与鉴定【Ｊ】．食用菌学
报．２００１，８（２）：１９—２３．
【２】王琛．鸡腿菇ＷＰ菌丝生物学特性研究咖．食用菌，２００８。
２２—２４．
１５℃。１８℃．进行育菇期培养。高温育出的菇菇质较差，贮藏时间短，低温反之；应依据菇体生长情况，及时掌控通风量，菌盖太小，菌柄粗短，说明通风太少；菌盖太大．菌柄细，说明通风太强。一般每日２ｈ，．菇棚内的光照强度以能看报纸为宜。菇棚湿度太大则易引发细菌性病
（４）：
【３】华秀红，宋金娣，刘超．棕色蘑菇的栽培特性阴．中国食用菌，
２００８，２７（１）：２５—２６．