;
F、电镜超薄切片技术超薄切片(Ultrathin sectioning) 系供电子显微镜观察用的切片。由于电子穿透组织的能力低， 所以供电子显微镜观察用的切片要求极薄（一般厚度为40～50 nm） ，即为超薄切片。 ;
G、Northern杂交Northern印迹杂交（Northern blot）。这是一种将RNA从琼脂糖凝胶中转印到硝酸纤维素膜上的方法。DNA印迹技术由Southern于1975年创建，称为Southern印迹技术，RNA印迹技术正好与DNA相对应，故被称为Northern印迹杂交，与此原理相似的蛋白质印迹技术则被称为Western blot。 H、放射自显影技术放射自显影技术是利用放射性同位素的电离辐射对乳胶（含AgBr或AgCl）的感光作用，对细胞内生物大分子进行定性、定位与半定量研究的一种细胞化学技术。放射自显影技术（radioautography；autoradiography）用于研究标记化合物在机体、组织和细胞中的分布、定位、排出以及合成、更新、作用机理、作用部位等等。
I、核磁共振技术核磁共振技术可以直接研究溶液和活细胞中相对分子质量较小(20，000 道尔顿以下)的蛋白质、核酸以及其它分子的结构， 而不损伤细胞。 J、DNA序列分析
K、原位杂交技术原位杂交技术的基本原理是利用核酸分子单链之间有互补的碱基序列，将有放射性或非放射性的外源核酸(即探针)与组织、细胞或染色体上待测DNA或RNA互补配对，结合成专一的核酸杂交分子，经一定的检测手段将待测核酸在组织、细胞或染色体上的位置显示出来。为显示特定的核酸序列必须具备3个重要条件：组织、细胞或染色体的固定、具有能与特定片段互补的核苷酸序列(即探针)、有与探针结合的标记物
L、Western blot杂交技术蛋白质印迹法即Western Blot。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息。 M、GFP的应用
绿色荧光蛋白(green fluorescent protein)，简称GFP，这种蛋白质最早是由下村修等人在1962年在一种学名Aequorea victoria的水母中发现。其基因所产生的蛋白质，在蓝色波长范围的光线激发下，会发出绿色萤光。这个发光的过程中还需要冷光蛋白质Aequorin的帮助，且这个冷光蛋白质与钙离子(Ca2+)可产生交互作用。 ;
N、电镜负染色技术
负染色首先由Hall在1955年提出。Hall在病毒研究中用磷钨酸染色后，发现图像的背景很暗，而病毒象一个亮晶的\空洞\被清楚地显示出来。在超薄切片的染色中，染色后的样品电子密度因染色而被加强，在图像中呈现黑色。而背景因未被染色而呈光亮，这种染色称为正染色。而负染色则相反，由于染液中某些电子密度高的物质(如重金属盐等)\包埋\低电子密度的样品，结果在图像中背景是黑暗的，而样品像\透明\地光亮。两者之间的反差正好相反，故称为负染色。
对于负染色的机制目前还不十分了解。对颗粒状的生物材料的研究而言，负染色技术与超薄切片方法相比具有分辨率高(可达15Å)，简单快速等优点。因此，在生物学研究中得到越来越广泛的应用。它可以显示生物大分子、细菌、病毒、分离的细胞器以及蛋白质晶体等样品的形状、结构、大小以及表面结构的特征。尤其在病毒学中，负染色技术成为不可取代的实验技术 ;
O、细胞融合技术细胞融合(cell fusion)，细胞遗传学名词，是在自发或人工诱导下，两个不同基因型的细胞或原生质体融合形成一个杂种细胞。基本过程包括细胞融合形成异核体(heterokaryon)、异核体通过细胞[2]
[1]
有丝分裂进行核融合、最终形成单核的杂种细胞。细胞融合可作为一种实验方法被广泛适用于单克隆抗体的制备，膜蛋白的研究。 P、免疫共沉淀免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。
Q、免疫电镜技术免疫电镜(immunoelectron microscopy)技术是免疫化学技术与电镜技术结合的产物，是在超微结构水平研究和观察抗原、抗体结合定位的一种方法学。它主要分为两大类：一类是免疫凝集电镜技术，即采用抗原抗体凝集反应后，再经负染色直接在电镜下观察；另一类则是免疫电镜定位技术。
免疫电镜的应用，使得抗原和抗体定位的研究进入到亚细胞的水平。
R、冷冻蚀刻复型技术冷冻蚀刻复型技术室电镜样品的一种制备技术，以显示细胞、组织微细结构的立体构象。
S、BrdU incorporation 溴-脱氧尿嘧啶掺入法：为非放射性标记物BrdU取代放射性3H-TdR标记。 5′-溴-脱氧尿嘧啶(5′-bromo-deoxyuridine, BrdU) 与胸腺嘧啶结构相似,其特点是胸腺嘧啶Ⅲ期嘧啶环与5 位C 连结的甲基被Br 代替,在DNA 合成过程中能与胸腺嘧啶一样掺入其中,固定通透后,通过检测BrdU标记的细胞便能定性、定量地反映细胞的增殖状态。
T、DNA定点突变技术定点突变是指通过聚合酶链式反应（PCR）等方法向目的DNA片段（可以是基因组，也可以是质粒）中引入所需变化（通常是表征有利方向的变化），包括碱基的添加、删除、点突变等。定点突变能迅速、高效的提高DNA所表达的目的蛋白的性状及表征，是基因研究工作中一种非常有用的手段。 [(1)探讨内质网的分布与微管系统分布的方法如下 内质网作为一种脂质膜结构，我们可以选用放射性标记的CDP-胆碱作为标记物，CDP胆碱可以用于卵磷脂的合成。然后利用放射自显影技术进行观察。而微管由于可以被紫杉醇结合而抑制解聚，我们可以用罗丹明标记的抗微管蛋白的抗体与微管特异性结合（免疫荧光技术），然后使用荧光显微镜观察。然后对比以上两组观测图像是否具有相关性 （2）常使用的方法是将带有罗丹明标记的微管蛋白连续注入体外培养的动物细胞，用荧光显微镜观察。 （3）1.可以利用oligo-DT或者oligo-U对提取的总RNA进行亲和层析，提取mRNA，然后用DNA探针或者RNA探针进行southern杂交。2.当然卵清蛋白作为一种蛋白质，自然可以利用免疫荧光技术。 （4）利用的是western blot。这个不细说了 （5）将M期的hela细胞与其他间期细胞在仙台病毒下诱导融合，并继续培养一段时间。发现与M期hela细胞融合的间期细胞发生了各种形态的染色体凝集，并称之为PCC（早熟染色体凝集）。这种染色体则被称为超前凝集染色体。G1为单线状，S为粉末状，G2为双线染色体状。 （6）要观察细胞表面形态结构的变化，毫无疑问利用的是扫描电镜技术。扫描电镜技术是利用电子束光源照射到细胞表面而产生的散射电子，并将其收集成像。其基本过程包括固定，脱水，干燥，镀膜，观察等过程。干燥过程一般选用CO2临界点干燥法，由于不存在气液相面，细胞的原始形态能够得到良好的保持。镀膜是为了得到良好的二次电子信号。扫描电镜成像具有良好的立体感，分辨率达0.7nm。 （7）方法是表达融合了绿色荧光蛋白（GFP，Green fluorescence protein）的CENP-E蛋白。提取并注入真核细胞。绿色荧光蛋白不是一种糖蛋白，而且是一种胞质蛋白，可以采用原核如大肠杆菌表达系统进行表达。 （8）BrdU incorporation后培养较长一段时间。只有在复制过程中的DNA才会掺入BrdU。掺入后易引起DNA突变，可对特定的某段DNA进行序列分析。 （9）虽然不知道Racl基因是为何物，但是目前使用最多的抑制基因表达的方法主要是基因打靶技术和参考中的RNAi技术。当然还有反基因技术（注意：是区别于反义RNA的技术，使用的是DNA片段） （10）可采用荧光共振能量转移或者酵母双杂交实验，具体可以查阅百度百科。（参考中的方法无此方法） ] 问题：
1）探讨内质网的分布与微管系统的分布关系。内质网分为滑面内质网和粗面内质网，分布在蛋白质合成和蛋白质合成后加工集中的地方。内质网对生物蛋白质的合成和合成后的加工起了重要作用. 微管、微丝是分布在细胞质基质（或胞质溶胶）中蛋白纤维网架系统。解析：微管是由微管蛋白组装成的长管状结构，在细胞内呈网状或束状分布，参与纺锤体、中心体、神经元轴突等结构。微丝呈细长状，主要成分是肌动蛋白。在细胞内交织成网，与微管共同构成细胞支架，与细胞收缩运动直接有关。 2）微管系统的动态不稳定性。微管一直处于组装和去组装的动态状态, 称为动态不稳定性。影响微管稳定性的决定因素有两个: 游离微管蛋白的浓度和GTP水解成GDP的速度。高浓度的微管蛋白适合微管的生长, 低浓度的微管蛋白引起GTP的水解, 形成GDP帽, 使微管解聚。GTP的低速水解适合于微管的连续生长, 而快速的水解造成微管的解聚, 细胞内的微管处于动态不稳定状态(dynamic instability)。
3）已克隆了鸡卵清蛋白的基因，如何证明在雏鸡的输卵管中该基因不转录而在产卵母鸡输卵管中则活跃的转录。
用RNAi技术使雏鸡和母鸡输卵管中该基因沉默，观察产出鸡卵的变化。 4） 已克隆了人的rDNA，问rDNA分布在人的哪几条染色体上。
基因是DNA具有遗传效应的片断，说白了就是一段DNA序列；而DNA和蛋白质构成了染色体，双螺旋DNA在内部，外由蛋白质包被，呈棒状。基因在染色体上是线性排列的，好比一串糖葫芦。基因在DNA上,DNA在染色体内,染色体是线状结构,DNA是双螺旋结构 5）M期HeLa细胞中具有促进分裂间期细胞染色质提前凝集的活性，实验证明。
海拉细胞（英语：Hela Cells，有时音译为海乐细胞，亦称实验用增殖表皮癌细胞）是生物学与医学研究中使用的一种细胞，源自一位美国妇女海莉耶塔?拉克斯（Henrietta Lacks）的子宫颈癌细胞的细胞系。在医学界海拉细胞被广泛应用于肿瘤研究、生物实验或者细胞培养，已经成为医学研究中非常重要的工具。将M期的hela细胞与其他间期细胞在仙台病毒下诱导融合，并继续培养一段时间。发现与M期hela细胞融合的间期细胞发生了各种形态的染色体凝集，并称之为PCC（早熟染色体凝集）。这种染色体则被称为超前凝集染色体。G1为单线状，S为粉末状，G2为双线染色体状。 6）体外培养细胞，从G1期到S期，细胞表面形态结构的变化。 1）G1期（DNA合成前期）： 主要事件，合成RNA和核糖体。 2)S期（DNA合成期）： 主要是遗传物质的复制，即DNA、组蛋白和复制所需要酶的合成。 3)G2期（DNA合成后期）： 有丝分裂的准备期，主要是RNA和蛋白质（包括微管蛋白等）的大量合成。 形态结构的变化是为了功能的变化打基础 7）CENP-E在细胞分裂的前中期与微管结合，以后逐渐转移到动粒上，到分裂后期转移到纺锤体的中间区。如何证明。
目的:探讨纺锤体检查点蛋白E(Cenp-E)基因在肝癌细胞中的定位和作用,为进一步阐明肝癌细胞染色体数目异常的机理奠定基础。方法:利用FQ-PCR检测Cenp-E基因在用Nocodazole(诺考达唑)同时处理HepG-2细胞和LO2细胞中mRNA的表达水平。用间接免疫荧光技术观察Cenp-E蛋白在用Nocodazole(诺考达唑)同时处理HepG-2细胞和LO2细胞中的定位及表达。在LO2细胞中用RNAi技术干扰Cenp-E基因后,用FQ-PCR检测Cenp-E基因在干扰前后mRNA表达水平。并利用间接免疫荧光进一步评价干扰后的细胞功能情况。结果:Nocodazole处理前Cenp-E基因和蛋白在LO2和HepG-2细胞中表达无显著差异,处理后Cenp-E基因和蛋白在两种细胞表达都增高,但LO2细胞上调水平大于HepG-2细胞,差异具有统计学意义。间接免疫荧光结果显示Cenp-E蛋白主要定位细胞核内,并且在出现异常分裂的细胞核内Cenp-E蛋白的表达明显低于正常分裂的细胞核。在干扰Cenp-E后,间接免疫荧光显示干扰后的LO2细胞中出现核异常比例明显高于正常细胞。结论:Cenp-E过低表达可能是肝癌细胞染色体数目异常重要原因之一。
8）原代细胞长成致密单层，由于接触抑制作用DNA合成停止，如何证明。 接触抑制是指细胞在生长过程中达到相互接触时停止分裂的现象。 将正常细胞因相互接触而抑制分裂的现象改称为密度依赖性的生长抑制。 在相同条件下培养的恶性细胞对密度依赖性生长抑制失去敏感性，因而不会在形成单层时停止生长，而是相互堆积形成多层生长的聚集体。 同时我们知道ESC（胚胎干细胞）、IPS（多能诱导干细胞）在体外的培养往往是立体的细胞球样生长，而这种就没有发生接触抑制。猜测可能有3种解释： 1. 细胞需要达到一定的密度才会接触抑制。 2. 干细胞和普通的细胞不同。 3. 接触抑制仅限定在贴壁生长的细胞，而三维空间（如细胞球、体内的情况）是不同的，或者说三维的空间是足够的。 9） 探讨Racl基因表达的抑制对NIH3T3细胞迁移行为（如迁移路线、迁移速度等）的影响。 10）CyclinB和CDK1为MPF的两个亚基，如何证明CyclinB和CDK1的结合？
目的 :探讨胃癌发生中CyclinB1、CDK1表达异常及其临床病理学意义。方法 :采用免疫组织化学ABC法检测CyclinB1、CDK1在 15例正常胃组织、35例胃癌组织 (其中 15例为低分化腺癌 ,2 0例为中、高分化腺癌 )中的表达。结果 :CyclinB1、CDK1阳性表达多数定位于细胞质 ,少数在细胞核和细胞质中同时表达 ;在胃正常粘膜中CyclinB1、CDK1表达阳性率分别为 13.3% (2 / 15 )、6 .7% (1/ 15 ) ,胃癌组织中表达阳性率分别为 94 .3% (33/ 35 )、91.4 % (32 / 35 ) ,有统计学意义 (P 0 .0 1) ;在低分化腺癌、中高分化腺癌CyclinB1、CDK1均有表达 ,不同分化程度胃癌之间阳性表达差异有统计学意义 (P 0 .0 1)。结论 :CyclinB1、CDK1在不同分化程度胃癌中有过表达现象 ,可能是胃癌发生中早期分子事件 ,并可能对胃癌分化起重要作用
苏州大学2009年考研细胞生物学试题 名词解释
1.motor proteins （Engine Protein）马达蛋白：利用ATP水解酶释放的能量驱动自身沿微管或微丝定向运动的蛋白，如驱动蛋白、动力蛋白和肌球蛋白驱动蛋白:利用ATP水解酶的能量向正极运输小泡动力蛋白:驱动向负极的运输
2.membrane domain就是跨膜结构域，包括α螺旋β折叠。主要是α螺旋。
3.contact inhibition接触抑制(contact inhibition)是指细胞在生长过程中达到相互接触时停止分裂的现象，1954年，由艾伯克龙比(Aberchrombie)等首先发现。由于培养基中的生长因子耗尽时也会产生生长抑制，所以将正常细胞因相互接触而抑制分裂的现象改称为密度依赖性的生长抑制(density-dependent inhibition of growth)。在相同条件下培养的恶性细胞(malignant cells)对密度依赖性生长抑制失去敏感性，因而不会在形成单层时停止生长，而是相互堆积形成多层生长的聚集体，这种现象也说明恶性细胞的生长和分裂已经失去了控制，调节细胞正常生长和分裂的信号对于恶性细胞不再起作用。
4.voltage-gated channel 电位门通道（voltage gated channel）是对细胞内或细胞外特异离子浓度发生变化时，或对其他刺激引起膜电位变化时，致使其构象变化，“门”打开。K+电位门通道由四个α亚单位（I-IV）构成，每个亚单位均有6个(S1-S6)跨膜α螺旋节段，N和C端均位于胞质面。连接S5-S6段的发夹样β折叠 (P区或H5区)，构成通道的内衬，大小可允许K+通过。
5.molecular chaperone 细胞核内能与组蛋白结合并能介导核小体有序组装的核质素（ nucleoplasmin ）称为分子伴侣。根据 Ellis 的定义，这一概念延伸为“一类在序列上没有相关性但有共同功能的蛋白质，它们在细胞内帮助其他含多肽的结构完成正确的组装，而且在组装完毕后与之分离，不构成这些蛋白质结构执行功能时的组份”。热休克蛋白就是一大类分子伴侣。
6.endosome核内体（英语：Endosome，又称内体）在细胞生物学中指的是一种真核细胞中的膜结合细胞
器，属于一种囊泡结构[1]。作为细胞内吞作用中运载途径的一个区室，核内体从细胞质膜被传递到溶酶体被其降解，或者再循环回到细胞质膜[2]。一个成熟的内体直径大约500纳米[3]。
7.map kinase MAP激酶 (mitogen-activated protein)是存在于真核生物中的丝氨酸/苏氨酸激酶,是传递外界刺激的信号分子之一。确认与细胞增殖、分化、基因表达、细胞凋亡等相关。
8.nuclear lamina核纤层普遍存在于高等真核细胞中，是内层核被膜下纤维蛋白片层，其纤维直径为10毫微米左右，纤维纵横排列整齐呈纤维网络状。核纤层在核内与核基质连接，在核外与中等纤维相连，构成贯穿于细胞核和细胞质的统一网架结构体系。它位于内层核膜与染色质之间，与核膜、染色质及核孔复合体在结构上有密切联系，核纤层蛋白向外与内层核膜上的蛋白结合，向内与染色质的特定区段结合。其厚度随不同细胞而异，为30～100毫微米。 9.gap junction 略
10.cell determination细胞决定(cell determination)
细胞决定是指细胞在发生可识别的形态变化之前, 就已受到约束而向特定方向分化, 这时细胞内部已发生变化, 确定了未来的发育命运。细胞在这种决定状态下, 沿特定类型分化的能力已经稳定下来, 一般不会中途改变。 简答题
1、如何理解细胞质膜的不对称性及其意义？质膜即细胞膜，是包被在细胞质外层的一层薄膜，主要由蛋白质和脂质组成。
质膜的主要特性是不对称性和流动性：1、不对称性表现在：膜脂的分布是不对称的，膜蛋白的分布是不对称的。（可以拓展说一下）2.流动性：脂质双分子层是质膜的主要骨架，它既具有液态分子的流动性，也有固态分子的有序性。在相变温度以上是为液态，以下为晶态。
主要功能：1.维持细胞内环境的稳定性：将细胞与外环境分隔开，使细胞内部的环境保持相对稳定：2.物质运输：细胞膜上的具有运输相关的蛋白质载体，帮助物质进出细胞。3.信息传递，如细胞上一些受体可以与膜外的信号分子结合，在胞外信号传递到胞内。4.能量转换.5.细胞保护.6.免疫功能等。
2、有被小泡的分子结构及其功能如何？配体与膜上受体结合后，网格蛋白聚集在膜下一侧，逐渐形成50-100nm的质膜凹陷，称网格有被小窝，一种小分子GTP结合蛋白在深陷有被小窝的颈部装备成环，dynamin蛋白水解与其结合的GTP引起颈部缢缩，最终脱离质膜形成网格蛋白有被小泡。
3、为什么说线粒体是一种半自主性细胞器：我们之所以叫它们半自主性细胞器因为它们能够利用自身DNA合成少量自己代谢所需的蛋白质，但并不能合成所有蛋白质，并且它们还受细胞核的控制。 4、微管特异性药物colchicine和taxol被用作癌症治疗药物，叙述两种药的作用机理。
Colchicine即秋水仙碱，可抑制纺锤体的形成秋水仙碱可与微管蛋白二聚体结合，阻止微管蛋白转换，使细胞停止于有丝分裂中期，从而导致细胞死亡。
Taxol即紫杉醇，本品是新型抗微管药物,通过促进微管蛋白聚合抑制解聚,保持微管蛋白稳定,抑制细胞有丝分裂。体外实验证明紫杉醇具有显著的放射增敏作用，可能是使细胞中止于对放疗敏感的G2和M期。 5、简述从DNA到染色体的包装过程。核小体的装配是染色体装配的第一步, DNA包装成核小体, 大约压缩了7倍。染色质以核小体作为基本结构逐步进行包装压缩, 经30nm染色质纤维、超螺旋环、最后压缩包装成染色体, 总共经过四级包装。● 从核小体到螺线管(solenoid)● 从螺线管到超螺线管(supersolenoid)● 从超螺线管到染色体
6、试述显示一种蛋白质抗原在细胞内分布的两种方法 .1. 免疫组化，用抗体识别
2。在细胞内表达该蛋白和GFP的融合蛋白，荧光显微镜观察GFP的位置。