优势。原因如下：（1）以生物氧化代替化学氧化简化了生产工艺。（2）省略了丙酮化反应步骤，节省了丙酮、硫酸等大量化工原料和其防爆设备，节约了成本，有利于安全生产。（3）三废和污染较小。（4）提高了生产能力。
3.简要说明，两步发酵生产工艺过程中的两步发酵？（从菌种及反应过程进行说明。）
答：第一步发酵运用黑醋酸杆菌，从D―山梨醇到L―山梨糖只是把c2位的羟基氧化为羰基,其他集团保持不变。第二步发酵采用氧化葡萄糖酸杆菌和巨大芽孢杆菌混合培养，从L-山梨糖到2-酮基L-古龙酸将c1位羟基氧化为羧基。
第十四章
填空题
1、表达载体基本特征（自主复制性）、（不相容性）、（转移性）、（选择标记）、（多克隆位点）。 2、在大肠杆菌中，外源基因表达产物的主要形式为（可溶性蛋白）和（不溶性蛋白）。 3、基因工程菌的构建包括（目标基因的获得）、（最佳表达载体的构建）、（工程菌构建）三个主要环节。
4、基因工程技术中常用的载有（质粒）、（噬菌体）、（噬菌粒）、（黏粒）。 5、克隆真核基因常用的方法是（逆转录法）和（化学合成法）。 选择题
1、真核基因的获得可采取下列哪种方法（D）
A、直接从生物体中提取后再化学合成 B、直接从生物体提取
C、直接从生物体中提取后在进行PCR扩增 D、逆转录法
2.大肠杆菌表达真核基因时对其蛋白质产物（D）
A、能进行翻译后修饰，故对蛋白质产物能进行糖基化 B、能进行翻译后修饰，故对蛋白质产物不能进行糖基化 C、不能进行翻译后修饰，故对蛋白质产物能进行糖基化 D、不能进行翻译后修饰，故对蛋白质产物不能进行糖基化
3、基因工程大肠杆菌与宿主菌的培养基的本质区别在于，前者必须加入（A） A、抗生素 B、氨基酸 C、前体 D、激素 4、目前生产生用于表达外源基因的动物细胞，均为（A）
A、传代细胞系 B、原代细胞 C、二倍体细胞系 D、杂交瘤细胞 5、基因工程的单元操作顺序是（B）
A、酶切、转化、连接、筛选 B、酶切、连接、转化、筛选 D、连接、转化、酶切、筛选 D、酶切、连接、筛选、转化 简答题
1、大肠杆菌表达系统与酵母表达系统的异同？
相同点：易操作，繁殖快、成本低、易于工业化生产、
不同点：1、大肠杆菌表达系统转录信号与酵母系统不同，与核糖体的结合位点不同
2、大肠杆菌中表达不存在翻译后修饰作用，故对蛋白质产物不能糖基化；酵母 菌具有原核细菌无法比拟的真核蛋白翻译后加工系统。
3、大肠杆菌表达系统由于分泌能力不足，真核蛋白质常形成不溶性的包涵体，表达产物必须在下游处理过程中经过变性和复性处理才能恢复其生物活性；酵母菌具有真核生物表
达系统基因表达调控和蛋白质修饰功能，避免了产物活性低、包涵体变性复性等问题。
第十五章
填空题
1.干扰素是机体免疫细胞产生的一类（结构类似）、（功能接近）的生物调节蛋白。 2.干扰素的生物活性包括（广谱抗病毒活性）、（直接抗肿瘤活性）和（免疫调节活性）。
3.在正常情况下，免疫产生（保护性排斥性）反应，对机体有利；在异常情况下，免疫也会产生（）反应，对机体造成损伤。
4.干扰素表达载体的构建过程中，将表达载体导入（假单胞杆菌干扰素）中，筛选得到（工程菌）。 简答题
1、简述干扰素及其功能。
抗体受到病毒感染时，免疫细胞产生的一组结构类似、功能接近的细胞因子称为干扰素；用于干扰病毒在细胞内增殖。
2、简述在原核工程菌中生产重组干扰素包括哪些环节。
工程菌构建；发酵培养；包涵体；复性；重组人干扰素。 3、简述重组人干扰素α-2b的分离工艺过程。
（1）、菌体裂解。一定pH条件下，表面活性剂或强离子剂可使细胞裂解； （2）、预处理。加絮凝剂进行絮凝，加凝聚剂进行沉淀，离心； （3）、初级分离。盐析、离心、收集沉淀保存。
第十六章
选择题
1、胰岛素是有那个细胞团合成分泌的(A) A、胰岛B细胞B、胰岛A细胞 C、肾上腺细胞C、甲状腺分泌细胞 2、胰岛素的作用(B)
A、促进脂肪的消耗B、促进葡萄糖转化为其他物质 C、促进其他物质向葡萄糖转化D、促进非糖物质的消耗
3、下列哪一项不是国内的重组人胰岛素的提取工艺共同点(D) A、粗制提取B、色谱分离 C、重结晶D、凝胶电泳
4、下列哪一项不是的重组人胰岛素的质量控制工艺(B) A、特异性鉴别B、纸层析法鉴定 C、效价测定D、人胰岛素原鉴定
5、下列哪一项不是重组人生长激素的临床引用(B)
A、治疗侏儒症儿童及生长激素缺乏症B、促使葡萄糖向糖元的转化 C、调节心肾功能D、用于延缓衰老改善运动能力 填空题
1、胰岛素原是由N端、C端A链和中间连接的C肽组成，C肽有助于形成构象和。
2、胰岛素原要经过Ⅰ型内蛋白酶切除和B链的连接，Ⅱ型内蛋白酶切除C肽与的连接，生成成熟的胰岛素分泌到细胞外，进入
3、A链具有氨基酸残基，B链有30 个按激素那残基，对二硫键，2对位链间二硫键。 4、目前临床上应用的重组人胰岛素制剂主要有三种类型、和
5、前肽序列是的前序列，其作用是引导新合成的微小胰岛素原通过正确的分途径，即从细胞到，随后分泌到胞质外。
6、胰岛素制剂中可加入或作为防腐剂，应对其进行限量检查，限度为80%~110%。 7、生长激素是由动物脑前叶外侧的特异分泌细胞分泌的一种促进生长的蛋白质激素。
8、通常所说的人生长激素一般都是指 生长激素，由个氨基酸残基组成， 无（填“有”或“无”）糖基化。
9、下列流程是大肠杆菌发酵工艺流程图，填补空缺过程： 菌种 种子培养 离心 G-25色谱 填空题答案 生长激素 DWAE色谱 S-100色谱 Phenyl色谱 1.B链二硫键 3.213 5.酵母交配因子内质网高尔基体 7.垂体 9.发酵培养粗提 简答题
2.血液循环A链C肽 4.中效速效长效 6.苯酚或间甲酚 8.22ku191
1.简述重组人生长激素工艺流程： ①基因工程大肠杆菌的培养 ②基因工程大肠杆菌的发酵工艺 ③重组人生长激素的分离工艺 ④重组人生长激素的纯化工艺
⑤重组人生长激素制剂的质量控制。
2.简述重组DNA技术上产的重组人胰岛素在临床运用上的优点 ① 供应充分
② 消除了动物胰岛组织中存在病原体而导致疾病意外传播的危险。 ③ 经济适用
3.简述用酵母表达人胰岛素的工艺优缺点。
优点:表达产物二硫键的结构与位置正确，不需要复性加工处理; 缺点：表达量低，发酵时间长。
4.简述重组人生长激素生产流程与传统的包含体技术相比的优点。
1使生长激素以天然的结构直接分泌到菌体之外的培养液中，避免了重折叠； 2收率高 3受菌体蛋白污染少纯度高 4更安全 问答题
1、常用的重组人胰岛素制剂有哪些？分别举例。
① 经动物胰腺提取或纯:猪、牛胰岛素粗体后经凝胶过滤处理后的胰岛素，再用离子交换色谱
进行纯化，以进一步降低胰岛素原的含量并去除部分杂质。 ② 半合成人胰岛素:以猪胰岛素为原料进行修饰得到的人胰岛素。
③ 生物合成人胰岛素：用重组DNA技术生产的人胰岛素，又称重组人胰岛素，为中性可溶性
单组分人胰岛素。
④ 胰岛素类似物：通过重组DNA技术，对人胰岛素氨基酸序列进行修饰生成的可模拟正常胰
岛素分泌和作用的一类物质。
2、简述胰岛素和胰高血糖素的作用机制。
胰岛素是降血糖，胰高血糖素是升血糖。其中降血糖原理是当血糖高的的时候，通过胰岛B细胞分泌胰岛素，来促进细胞对葡萄糖的吸收和分解。和葡萄糖的向糖原和非糖物质转化。胰高血糖素则是当血糖低的时候，通过胰岛A细胞分泌增加体内蛋白质糖原等非糖物质转化分解为葡萄糖，进而增加血糖。他们是拮抗作用。其整个过程是神经体液调解。血糖高了或者低了，都能反馈给垂体和下丘脑。就是反馈调节了。
填空题
1、在动物细胞培养中，__________和_________是提供能量和合成代谢的前体，且在不同培养条件下，两者代谢的能量以_________和__________的形式提供。 2、根据细胞的传代次数和寿命，细胞系可分为__________、和__________或_______________。 3、 动物细胞的表达载体：_________、___________。
4、动物细胞培养基的种类有__________、____________、____________。
5、氨基酸可通过________或____________途径转变为糖或脂肪酸，间接提供能量。 6、根据细胞的生长特性和对基质的依赖性，可将细胞分为___________细胞和___________细胞。 7、目前用于制药的动物细胞有4类，分别是_____________、__________、___________、___________。
8、为了防止微生物污染，可在培养基中添加__________，以避免轻度污染。对于支原体污染，常用__________、__________处理培养物。 选择题
1、下列哪项描述不属于永久细胞系的特点（）
A、细胞形状规则B、没有接触抑制现象C、有异常染色体D、可以连续培养 2、下列哪种细胞的G0期相对较短（）
A、淋巴细胞B、腺细胞C、肝细胞D、结缔组织细胞 3、下列哪项不属于昆虫表达系统的优点（）
A、安全易饲养B、高量表达C、高效表达D、外源基因的表达在转染的晚期 4、下列哪项属于正常血浆的渗透压：__________。 A．260B.270C.290D.320
5、在杂交瘤培养中，血清的加入对培养非常有效，一般为_________的胎牛血清。 A. 5%~10%B.8%~15%C.10%~20%D.12%~20% 6下列哪一个不属于兼性细胞（）
ＡＣＨＯ细胞 Ｂ Ｌ９２９细胞 Ｃ淋巴细胞 ＤＢＨＫ细胞 7理想的微载体具备的性能（）
Ａ质地较硬，耐高温，透明性，密度较低 Ｂ质地柔软，不耐高温，透明性，密度较高 Ｃ质地柔软，耐高温，透明性，密度较低 Ｄ质地柔软，耐高温，不透明性，密度较低
8. 下面哪种方法不能用于对凋亡细胞的检测（）
A.透射电镜观察B.HE染色C.台盼蓝染色D.荧光显微镜观察 9.以下哪种不能用于测定细胞活性() A.苯胺黑B.结晶紫C.醋酸洋红D.台盼蓝
10.卡那霉素的作用对象是()
A.真菌B.支原体C.G+、G-细菌D.G-细菌 简答题
1、简述动物细胞培养基的主要成分及其作用。
2、动物细胞的大规模培养的技术包括哪些？并简要说明。
3、细胞培养到一定时间为何要进行传代？能一直传代下去吗？阐述其机理。 答案：
一、 填空题：
1、葡萄糖、谷氨酰胺、ATP、NADPH
2、有限细胞系、无限细胞系、连续细胞系 3、病毒载体、质粒载体
4、天然培养基合成培养基无血清培养基 5、生糖生酮
6、贴壁依赖性、非贴壁依赖性
7、原代细胞系、二倍体细胞系、异倍体细胞系、融合或重组的工程细胞系 8、抗生素卡那霉素金霉素 二、单选题：
1~5 CCDCC6~10 CCCCC 三、简答题：
1、动物细胞培养基的成分主要有糖类、氨基酸、维生素与无机盐、激素及附加成分。作用：糖类提供细胞生长的碳源和能源。分解后释放出能量ATP。氨基酸可通过生糖或生酮途径转变为糖或脂肪酸，间接提供能量。维生素既不是细胞的物质基础，也不是能量物质，对代谢和生长起调节和控制作用。
无机盐是细胞代谢所需酶的辅基，同时保持细胞的渗透压和缓冲PH的变化。激素对细胞的生长有刺激作用。贴附因子的作用是让细胞的贴壁生长。 2、答：（１）单层贴壁培养。单层贴壁培养是指把细胞贴附于一定的固体支持表面上，生长形成单层细胞的培养方法，适合于贴壁依赖性细胞培养。
（２）悬浮培养。悬浮培养是指细胞在细胞反应器内游离悬浮生长的培养过程，主要对于非贴壁性依赖性细胞，如杂交瘤细胞。
（３）微囊培养。把动物细胞包埋在微载体内或胶囊内固定化后，进行悬浮培养，适合于贴壁依赖性和非贴壁依赖性细胞。
（４）微载体培养。微载体是三维培养系统，有很大的比表面积，细胞贴附于载体上增值，再悬浮于细胞液中，兼具有贴壁和悬浮培养的双重优点。
3、答：①因为进入衰亡期,细胞发生接触抑制,营养逐渐耗尽,有毒废物积累,细胞变大自溶.这时就要重新接种培养。②不能。正常细胞每分裂一次端粒会逐渐缩短，分裂次数过多会衰老直至死亡。但肿瘤细胞除外
选择题
1.红细胞生成素与靶细胞的特定结合，促进（A）的增值，分化并成熟为红细胞，增加骨髓向循环血中释放红细胞。
A.红细胞前体细胞B.造血干细胞C.造血组织D.血夜
2.红细胞生成性素的主要作用于红系集落生成单位，促进其产生红细胞，维持（B）的正常红细