氮、磷、钾、铁元素对辣椒幼苗生长的影响
3.5.1提取叶绿素
取材料的叶片 0.5g ,加入纯丙酮酸5ml (CaCO3,石英砂)→ 研磨,加入80%丙酮酸5ml → 过滤 → 用80%丙酮酸定容至20ml。 3.5.2 测量光密度
测定叶绿素在663nm和645nm出的光密度值 , 以80%丙酮为空白对照测定。 3.5.3 计算结果
根据测量得到的光密度OD663、OD645,代入以下公式1计算溶液中叶绿素a的浓度(Ca),代入公式2计算得到叶绿素b的浓度(Cb),代入公式3计算得到叶绿素总浓度(Ct)[5]。
公 式
1 Ca=12.7OD663-2.69OD645 2 Cb=22.9OD645-4.68OD663 3 Ct=20.2OD645+8.02OD663
3.5.4 叶绿素含量(mg/g.鲜重)= 叶绿素浓度(mg/L)*提取液总量(ml)
样品鲜重*1000
3.6 硝酸还原酶活性的测定(磺胺法) 3.6.1 提取待测溶液
将新鲜叶片水洗,用吸水纸吸干水分,剪碎,在天平上称取等量的叶片两份,每份0.5克,分别置于含有下列溶液的三角瓶中。
(1)0.1mol/L磷酸缓冲溶液5ml+蒸馏水5ml。 (2)0.1mol/L磷酸缓冲溶液5ml+0.2mol/L KNO3 5ml。
然后将三角瓶置于真空干燥器中,接上真空泵抽气,放气后,叶片即沉于溶液中,(如果没有真空瓶,也可以用20ml注射器代替,将反应液及叶片一起倒入) 3.6.2 NO2-的测定
保温30分钟结束时,吸取反应溶液1ml于一试管中,先加入磺胺试剂2ml,后加入a-萘胺试剂2ml,混合摇匀,静置30分钟,用分光光计进行比色测定,比色时用520nm波长,记下光密度。
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3.6.3 计算酶活性
测得样品光密度,代入以下公式1算出反应液的NO2-含量;然后再按公式2计算硝酸还原酶的活性。
公 式
1 提取液中NO2-含量(μg/mL)=8.288?OD520-0.03
2 硝酸还原酶活性(μg NO2-/gFW.h)=(NO2-含量?10)/(样品重?提取时间)
3.7 过氧化物酶活性(POD)的测定
3.7.1制定待测溶液
0.4g材料 → 研磨→ 匀浆→离心(4000转/分)→ 上清液待用
3.7.2测量吸光度值
比色,测光密度值:调波长、调零,先往比色杯中加入2ml的反应液,放进比色计,然后快速地加入1ml的酶液,计时,先读第一个原始数据,然后每30秒读一次,共读5个数据。
3.7.3计算结果
以每分钟光密度变化值表示过氧化物酶活性大小。 ∑(ODn+1 – ODn) ×稀释倍数 过氧化物酶活性= ———————————————— n×鲜重(g) ×反应时间(min) 过氧化物酶活性单位:△OD470/min·g FW
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4实验结果和分析
4.1形态特征(拍摄) 4.1.1形态照片
(图1.为3.21即培养第11天的生长情况)
(图2.为4.06即培养第26日的生长情况)
4.1.2 结果分析
从相片可以看到完全液培养的植株生长最好,从颜色上来看,缺氮组的黄色最明显,而缺铁组叶色偏红,缺钾和缺磷组的叶色相似。以株高为例,完全液>缺铁组>缺磷组>缺氮组>缺钾组,综合以上现象发现,生长状况最不好的为缺铁的植株,可以见到,幼苗十分矮小,叶片数量少,茎秆红色,说明缺铁不但影响叶绿素的合成,也影响到植株蛋白质等物质的合成,也就是说,缺铁比缺其他三种更为严重。
氮、磷、钾、铁元素对辣椒幼苗生长的影响
4.2氮、磷、钾、铁元素对辣椒幼苗幼苗株高和根长的影响 4.2.1 实验结果
表1 氮、磷、钾、铁元素对辣椒幼苗株高的影响 cm
种植天数:0d
处理
株高/cm
完全液 缺铁 缺磷 缺钾 缺氮
- - - - -
表2 氮、磷、钾、铁元素对辣椒幼苗根长的影响 cm 种植天数:0d
处理
根长/cm
完全液 缺铁 缺磷 缺钾 缺氮
占对照% 100.00 -
- - -
根长/cm 14.33 3.60 14.50 15.14 14.00
占对照% 100.00 25.12 101.19 105.68 97.70
种植天数:14d
占对照% 100.00 - - - -
株高/cm 20.88 13.10 11.15 9.425 10.50
占对照% 100.00 62.74 53.40 45.14 50.29
种植天数:14d
- - - - -
4.2.2 结果分析
从记录结果来看,跟完全液的植株相比,缺钾的植株长得最矮小,而缺铁的植株根长最短其他缺素植株也出现了不同程度的矮小。缺铁导致光合作用、呼吸作用中的细胞色素和非血红铁蛋白合成受阻,导致幼叶缺少叶绿素,有机物合成减少,植株无法生长。缺磷时,导致细胞分裂减慢,生长缓慢,因此看到缺磷的幼苗明显比完全液的幼苗长的慢。而缺钾的植株明显根比较小、短,容易倒伏 ,因为钾在根尖、形成层等分裂活动旺盛的部位作用大。缺氮的辣椒幼苗会出现分支少,这是因为氮元素为植株提供氨基酸合成的原料,缺乏氮的植株蛋白质合成受阻。
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4.3氮、磷、钾、铁元素对辣椒幼苗鲜重、干重和相对含水量的影响 4.3.1 实验结果
表4 氮、磷、钾、铁元素对辣椒幼苗鲜重、干重和相对含水量的影响 g
全株 (每株) 种植天数(14d)
处理
鲜重/g
完全液 缺铁 缺磷 缺钾 缺氮
1 1 0.994 1 1.002
占对照% 100.00 100.00 99.40 100.00 100.02
干重/g 0.119 0.37 0.139 0.196 0.205
占对照% 100.00 310.92 116.81 164.71 172.27
含水量% 88.1 62.90 85.99 80.35 79.50
占对照% 100.00 71.40 97.62 91.20 90.24
4.3.2 结果分析
由表4可知,由表4可知,含水量大小顺序:完全>缺磷>缺钾>缺氮>缺铁 ;植株含水量多,说明有机物合成量少,细胞中大部分被水占据,以至于灰分很少。由表中可以得知,缺铁对植株的有机物合成影响最大,因为缺铁的植株,光合作用过程都受到抑制,叶绿素合成明显受阻,导致生长慢,且植株矮小,根系较短,可初步判断为吸水能力严重削弱。
4.4氮、磷、钾、铁元素对辣椒幼苗叶片叶绿素含量的影响 4.4.1 实验结果
表5 氮、磷、钾、铁元素对辣椒幼苗叶片叶绿素总含量的影响 OD值
种植天数:28d
处理
叶绿素总含量(OD值)
完全液 缺磷 缺铁 缺钾 缺氮
占比(%)
0.6682 0.6298 0.3958 0.6083 0.3590
100.00 94.25 59.23 91.03 53.73
备注:因本次实验测定叶绿素含量时仅有一个OD值,故无法以叶绿素a、叶绿素b分别区分出来,所以我们本次采用一个OD值进行叶绿素总量的比对,从而得出结论