7．对于基线阈值（threshold）和阈值循环数（Ct）确定的研究资料。
8.不同适用机型的反应条件如果有差异应分别详述。 另外，对于试剂盒的内标、定标品、对照（质控）品设臵，建议企业参考以下要求执行：
（1）乙肝病毒核酸定量检测试剂盒的外部对照（质控）品应至少设臵三个量级水平的系列定标品:临界阳性对照（质控）品、强阳性对照（质控）品和阴性对照（质控）品，定标品和质控品均应参与样本核酸的平行提取，以对整个PCR反应过程、试剂/设备、交叉污染等环节进行合理质量控制。企业应对各种对照（质控）品的Ct值做出明确的范围要求。注意，建议采用与实际检测样本具有相同或相似性状的基质溶液作为阴性对照（质控）品，不推荐采用水作为阴性对照（质控）品。
（2）样本反应管应设臵合理的内对照（内标）以对管内抑制可能造成的假阴性结果进行质控。申请人应对内标的引物、探针和模板的浓度做精确验证，既要保证内标荧光通道呈明显的阳性曲线但又不能对目的基因的检测造成竞争性抑制而导致假阴性。对内标的Ct值也应有明确的范围要求。
（七）分析性能评估资料
企业应提交原厂在产品研制或成品验证阶段对试剂盒进行的所有性能验证的研究资料，对于每项分析性能的评价都
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应包括具体研究目的、实验设计、研究方法、可接受标准、实验数据、统计方法等详细资料。有关分析性能验证的背景信息也应在申报资料中有所体现，包括实验地点（实验室）、适用仪器、临床样本来源等。分析性能评价的实验方法可以参考相关的CLSI-EP文件或国内有关体外诊断产品性能评估的文件进行。对于乙肝病毒核酸定量类检测试剂，建议着重对以下分析性能进行研究。
1、乙肝病毒核酸（DNA）提取
病毒DNA提取主要有以下目的：富集靶核酸浓度、保证靶核酸序列的完整性、增加PCR模板溶液均一性、去除PCR抑制物，是决定PCR成败的关键环节。因此，无论申报产品是否含有DNA分离/纯化的组分，企业都应对核酸提取的环节做详细的验证。临床标本中可能含有各式各样的PCR抑制物，因此，对于DNA提取试剂的选择，除最大量分离出目的DNA外，还应有纯化步骤，尽可能去除PCR抑制物。常见的DNA分离纯化方法（如酚抽提法、甲酰胺解聚法等）和改良方法各有优势和不足，申请人应结合申报产品的特性，合理选择DNA分离/纯化试剂，并提供详细的验证资料（提取效率、与后续试验的配合等）。
2、最低检测限（分析灵敏度） （1）最低检测限与定量限的确定
建议使用国际标准品/国家标准品进行最低检测限确
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定，使用多份标准品制备梯度病毒稀释液、每个梯度的病毒稀释液重复适当次数（4次），将具有95%以上阳性检出率的病毒水平作为最低检测限。建议最低检测限应≤30IU/mL。
定量限应高于或等于检测限，将多次（至少10次）测量的计算误差符合试剂准确度研究规定的误差要求的最低病毒水平作为最低定量限。
（2）最低检测限和定量限的验证
申报试剂应在最低检测限或接近最低检测限的病毒浓度对国内常见（至少包括B、C、D型）基因型进行验证，总测试数不少于60次。定量限的验证应对国内常见（至少包括B、C、D型）基因型进行验证，总测试数不少于40次。
对此，企业应能够提供用于最低检出限/定量限验证的各个病毒株的来源、型别确认及滴度确认试验等信息。
3.线性范围
线性范围确定的研究应使用高值临床样本（由可溯源至国家标准品/国际标准品的方法定量）进行梯度稀释，稀释剂应使用经确认为阴性的混合人血清或血浆，应包含9-13个浓度（应包含接近最低检测限的临界值浓度），使用至少3个批次的试剂进行试验。通过评价一定范围内的线性关系及各水平的准确度确定该方法的线性范围。
4. 准确度
对测量准确度的评价依次包括：与国家标准品（和/或国
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际标准品）的偏差分析、回收实验、方法学比对等方法，企业可根据实际情况选择合理方法进行研究。 （1） 与国家（国际）标准品的比对研究
该检测有相应国家（国际）标准品，使用国家（国际）标准品进行验证，重点观察对相应标准品检测结果的偏差情况。
（2） 回收试验。用于评估定量检测方法准确测定加入纯分析物的能力，结果用回收率表示。通常对样本进行3-5次回收试验，取平均值即平均回收率。 回收试验注意事项：
① 加入的标准液体积一般应小于样本体积的10%； ② 尽量使加入标准液后样本中的被测物浓度接近医学决定水平；
③标准物的浓度应该足够高，以得到不同浓度的回收样本； ④ 注意基质效应，尽量采用与临床待测样本接近的基质。 （3）方法学比对
采用参考方法或国内/国际普遍认为质量较好的同类试剂作为参比方法，与拟申报试剂同时检测一批病人样品，从测定结果间的相关性了解拟申报试剂与参比方法间的一致情况。如显著相关，说明两检测系统对病人标本测定结果基本相符，对同一份临床样本的医学解释，拟申报试剂与参比方法相比不会产生显著差异结果。
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在实施方法学比对前，应分别对拟申报试剂和参比试剂进行初步评估，只有在确认两者都分别符合各自相关的质量标准后方可进行比对试验。方法学比对时应注意质量控制、样本类型、浓度分布范围并对结果进行合理的统计学分析。 5.精密度
测量精密度的评价方法并无统一的标准可依，可根据不同产品特征或企业的研究习惯进行，前提是必须保证研究的科学合理性。具体实验方法可以参考相关的CLSI-EP文件或国内有关体外诊断产品性能评估的文件进行。企业应对每项精密度指标的评价标准做出合理要求，如标准差或变异系数的范围等。针对本类产品的精密度评价主要包括以下要求。
（1）对可能影响检测精密度的主要变量进行验证，除申报试剂（包括提取组分和PCR组分）本身的影响外，还应对PCR分析仪、操作者、地点等要素进行相关的验证。
（2）合理的精密度评价周期，例如：为期至少20天的连续检测，每天至少由2人完成不少于2次的完整检测，从而对批内/批间、日内/日间以及不同操作者之间的精密度进行综合评价。如有条件，申请人应选择不同的实验室进行重复实验以对室间精密度进行评价。
（3）用于精密度评价的质控品应至少包括四个水平: ①阴性质控品：不含HBV DNA的质控品，阴性检出率应为100%（n≥20）。
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