②临界阳性质控品：待测物浓度略高于试剂盒的最低检测限，阳性检出率应高于95%（n≥20）。
③弱阳性质控品：待测物浓度呈弱阳性（高于定量限浓度1个数量级），阳性检出率为100%且变异系数（CV）符合标准要求（n≥20）。
④强阳性质控品：待测物浓度呈中度至强阳性，阳性检出率为100%且变异系数（CV）符合标准要求（n≥20）。 另外，建议申请人选择适量临床采集的新鲜病人样本（包括所有样本类型）作为无定值质控品进行精密度评价，以更好地模仿临床检测环境。
6.HBV不同基因型的覆盖
应对乙肝病毒国内常见基因型（至少包括B、C、D型）进行检测，重点考察各基因型病毒样本的最低检测限、准确性及精密度指标；每个基因型的病毒样本稀释成至少3个浓度水平，对每水平样本进行重复测定。考察每种基因型样本的准确度和精密度，以评价试剂的包容性。
7.分析特异性 （1）交叉反应
①用于乙肝病毒核酸检测试剂交叉反应验证的病原体种类主要考虑以下几方面可能性：核酸序列具有同源性、易引起相同或相似的临床症状。（见表1）。
②建议在病毒和细菌感染的的医学相关水平进行交叉
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反应的验证。通常，细菌感染的水平为10 cfu/ml或更高，病毒为10 pfu/ml或更高。
③申请人应提供所有用于交叉反应验证的病毒和细菌的来源、种属/型别和浓度确认等试验资料。有关交叉反应验证的信息应以列表的方式在产品说明书的【产品性能指标】项中有所体现。
表1 用于交叉反应研究的微生物（推荐）
微生物 人巨细胞病毒 E-B病毒 人类免疫缺陷病毒 丙型肝炎病毒 甲型肝炎病毒 人类T细胞亲淋巴病毒Ⅰ型 人类T细胞亲淋巴病毒II型 5
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人类疱疹病毒6型 单纯疱疹病毒1型 单纯疱疹病毒2型 甲型流感病毒 痤疮丙酸杆菌 (PA) 金黄色葡萄球菌 (SA) 白色念珠菌 (CA) （2）干扰物质
①潜在的干扰物质主要包括：内源性物质（见表2）和常用的治疗药物如普通IFNα（2a、2b和1b）和聚乙二醇干扰素α（2a和2b）[PegIFNα（2a和2b）]、拉米夫定（lamivudine）、阿德福韦酯（adefovir dipivoxil）、恩替卡韦（entecavir）、替比夫定（telbivudine）等。
②使用医学相关水平的干扰物浓度进行验证，另外，亦
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建议申请人在每种干扰物质的潜在最大浓度(“最差条件”)条件下进行评价。对于常见药物干扰试验，建议参照相应药物药代动力学研究确定的治疗药物浓度添加相应药物进行干扰验证，并建议添加最大治疗药物剂量做最差条件验证。
③建议在病毒的检测临界值水平对每种干扰物质的干扰影响进行检测。
表2 建议用于干扰研究的物质（推荐）
物质 人白蛋白 胆红素* 游离血红蛋白* 甘油三酯* 系统性红斑狼疮患者血 抗核抗体 类风湿因子 总IgG* *为必须验证的干扰物质。 8.溯源性
应提交详细的溯源性研究资料。企业制备的企业标准品、二级标准品、用于制备商品化标准品的储备液以及不同基因型的阳性样本均应能够溯源至国际标准品/国家标准品。使用国家标准品/国际标准品为定标品，应用多台仪器对企业一级定标品进行定标，以下逐级对企业二级标准品、定标储备液、阳性参考品（质控）进行定标。 9. 其它需注意问题
对于适用多个机型的产品，应提供如产品说明书【适用机型】项中所列的所有型号仪器的性能评估资料。
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（八）参考值（范围）确定资料
对于此类试剂，正常人群中不应检出HBV DNA，因此不存在cut-off值或参考值范围。参考值确定资料主要是指Ct值的确认资料，建议申请人采用受试者工作特征（ROC）曲线的方式对申报产品用于结果判断的临界值予以确认。
（九）稳定性研究资料
稳定性研究资料主要涉及两部分内容，申报试剂的稳定性和适用样本的稳定性研究。前者主要包括实时稳定性（有效期）、高温加速破坏稳定性、运输稳定性、开瓶稳定性及冻融次数限制等研究，申请人可根据实际需要选择合理的稳定性研究方案。稳定性研究资料应包括研究方法的确定依据、具体的实施方案、详细的研究数据以及结论。对于实时稳定性研究，应提供至少三批样品在实际储存条件下保存至成品有效期后的研究资料。
应对样本稳定性进行研究，主要包括室温保存、冷藏和冷冻条件下的有效期验证，可以在合理的温度范围内选择3-5个温度点（应至少包括范围的上限和下限温度），每间隔一定的时间段即对储存样本进行全性能的分析验证，从而确认不同类型样本的效期稳定性。在对样本进行效期稳定性的评价时，同时应对推荐使用的抗凝剂及采血管进行合理验证。适于冷冻保存的样本还应对冻融次数进行评价。
试剂稳定性和样本稳定性两部分内容的研究结果均应在
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说明书【储存条件及有效期】和【样本要求】两项中进行详细说明。
（十）临床试验研究 1. 研究方法
对于该类试剂已有同类产品上市，按照法规要求选择境内已批准上市、临床普遍认为质量较好的同类产品作为参比试剂，采用拟申报产品（以下称考核试剂）与之进行对比试验研究，证明本品与已上市产品等效或优于已上市产品。
建议预实验选择两种参比试剂同时进行验证，考察其误差范围，选择其中一种作为正式试验的参比试剂，另一种作为第三方验证试剂。选择的参比试剂样本类型及检测范围应能够涵盖考核试剂的相关样本及检测性能，以免造成考核试剂部分性能无法验证的情况。
对比试验结果不一致（包括是否检出及检测值差异较大的）的样本应采用公认较好的第三方试剂进行验证。
2. 临床研究单位的选择
建议申请人在选择临床单位时，应考虑到各试验单位之间的平行性和一定的地域代表性；临床研究单位应具有分子生物学方法检测的优势，实验操作人员应有足够的时间熟悉检测系统的各环节（仪器、试剂、质控及操作程序等），熟悉评价方案。在整个实验中，考核试剂和参比方法都应处于有效的质量控制下，最大限度保证试验数据的准确性及可重
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