①培养过程中需不断振荡的目的是。
，统计的菌落
②若想对固氮菌进行计数，可采用的接种方法是数往往比活菌的实际数目③由上述结果可知，。
菌的固氮效率最高。
30. (8分)我国科学家屠呦呦因青蒿素的研究荣获2015年诺贝尔生理学和医学奖。青蒿素是目前世界上最有效的治疗疟疾药物，为青蒿植株的次级代谢产物，其化学本质是一种萜类化合物，其生物合成途径如图1所示。正常青蒿植株的青蒿素产量很低，难以满足临床需求，科学家为了提高青蒿素产量，将棉花中的FPP合成酶基因导入了青蒿植株并让其成功表达，获得了高产青蒿植株，过程如图2所示。
图1
图2
(1) 研究人员从棉花基因文库中获取FPP合酶基因后，可以采用
技术对该目的基因进行大量扩增，该技术除了需要提供模板和游离的脱氧核苷酸外，还需要提供(2) 图2中的①为、等条件。 等酶；棉花FPP合。
，形成过程中需要酶基因能够和质粒连接成①的主要原因是(3) 若②不能在含有抗生素Kan的培养基上生存，则原因是。
(4) 由题意可知，除了通过提高FPP的含量来提高青蒿素的产量外，还可以通过哪些途径来提高青蒿素的产量？(试举一例) 。
31．（8分）骨肉瘤是最常见的恶性成骨性肿瘤之一。科研人员研究曲古抑菌A（TSA）对人骨肉瘤细胞凋亡的影响及作用机制，为临床治疗寻找新方向。实验过程如下：
步骤1用含青霉素和链霉素的高糖培养基，在37℃、5%CO2培养箱中培养人骨肉瘤细胞一段时间。
步骤2取适宜浓度的处于生长旺盛期的人类骨肉瘤细胞，用加入不同浓度的TSA（0～200ng·mL-1）的培养基继续培养24h。
步骤3对各组细胞进行抽样检测，检测方法是先用台盼蓝试剂（一种细胞活性染料）染色再用血细胞计数板计数，统计细胞存活率（未染色细胞数/细胞总数×100%），结果如图1。
步骤4分别提取TSA浓度为0 ng·mL-1、25 ng·mL-1、50 ng·mL-1处理的3组细胞，测量细胞中与凋亡相关的基因（Bax、Bcl-2）和β-肌动蛋白基因（不同的组织细胞中表达相对恒定）表达的蛋白质量并计算比值，结果如图2。
分析回答：
（1）骨肉瘤细胞的恶性增殖和转移与细胞膜上 ▲ （成分）种类和数量的改变有关。高糖培养基中加入青霉素和链霉素的目的是 ▲ ，细胞培养箱中保持5% CO2的作用是 ▲ 。
（2）步骤2中，设置0 ng·mL-1 TSA实验的主要目的是 ▲ 。 （3）用台盼蓝试剂检测细胞活性的主要原理是 ▲ 。（2分） （4）图1所示结果表明 ▲ 。
（5）根据图2判断，骨肉瘤细胞中 ▲ 基因过度表达会加速细胞凋亡。
32．（8分）人乳头状瘤病毒( HPV)与宫颈癌的发生密切相关，抗HPV的单克隆抗体可以准确检测出 HPV，从而及时监控宫颈癌的发生，以下是以HPV衣壳蛋白为抗原制备出单克隆抗体的过程，请据图回答：
(1)述单克隆抗体制备过程中涉及的细胞工程技术有分）
(2)杂交瘤细胞中染色体数目与普通淋巴细胞相比具有的特点是，在HAT培养基上存活的细胞可能包括（填下列序号）
。（2
①无抗体分泌的细胞 ②抗HPV抗体的分泌细胞 ③其它无关抗体的分泌细胞
(3)对于抗体检测呈性的杂交克隆应尽早进行克隆化，克隆化的方法最常用的是有限稀释法，即稀释细胞到3～l0个细胞/mL，
每孔加入细胞稀释液mL( 0. 1/1/10) ,使每个孔内不多于一个
细胞，达到单克隆培养的目的。
(4)由上述过程生产出的单克隆抗体不能直接用于人体，理由是。
(5)科学家从某些无限增殖细胞的细胞质中分离出了无限增殖调控基因( prG)，该基因能激发动物细胞分裂，这为单克隆抗体的制备提供了更多的思路。除本题描述的一种制备单克隆抗体技术外，请再简要写出一种制备单克隆抗体的思路。
33.（8分）生物技术与社会现象、生产实际联系密切，请回答下列关于生物技术实践的问题。
（1）在果酒果醋的自然发酵过程中，酵母菌的来源是装置内加入果汁后要留出约1/3的空间，目的是，发酵。酒精发酵后
。
转入醋酸发酵前，除改变温度外，还需调整的发酵条件是（2）普通酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，有人将地衣芽孢杆菌的
基因转入酵母菌中，经筛选得到了可高效利用淀粉的工程酵母菌菌种：
图一中的②、③过程需重复几次，目的是进一步。某同学尝试过程③的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图二所示，推测
该同学接种时可能的操作失误是。
（3）制备固定化酵母细胞时要将干酵母活化，并将溶化好的溶液冷却至室温，加入已活化的酵母细胞，进行充分搅拌，使其混合均匀，再转移至注射器中，以恒定的速度缓慢地将注射器中的溶液滴加到配制好的
沁园春·雪 <毛泽东>
溶液中，观察凝胶珠的形成。
北国风光，千里冰封，万里雪飘。
望长城内外，惟余莽莽；
大河上下，顿失滔滔。
山舞银蛇，原驰蜡象，
欲与天公试比高。
须晴日，看红装素裹，分外妖娆。
江山如此多娇，引无数英雄竞折腰。
惜秦皇汉武，略输文采；
唐宗宋祖，稍逊风骚。
一代天骄，成吉思汗，
只识弯弓射大雕。
俱往矣，数风流人物，还看今朝。
薄雾浓云愁永昼，东篱把酒黄昏后，
瑞脑消金兽。 佳节又重阳，有暗香盈袖。 莫道不消魂，玉枕纱厨，帘卷西风，半夜凉初透。人比黄花瘦。