蓬莱市疾病预防控制中心
作 业 指 导 书
寄生虫检测作业指导书
文件编号：PLCDCW031014
版号：第2版 第2页共4页
每份粪便至少检查两张涂片，镜检时应仔细识别血吸虫卵和其他蠕虫卵。然后将盛有粪便沉渣的三角烧瓶加水至离瓶口1cm处，放入孵化室（箱）或在室温下孵化。一定时间后取出烧瓶，观察毛蚴。一般需观察2次～3次，观察时间随温度高低而不同。温度高时孵出较早；温度低时毛蚴孵出迟。气温超过30℃时，第1次观察可在0.5h～1h后进行，阴性者可在4h后观察第2次，8h观察第3次，3次均为阴性者，判作阴性结果；气温在26℃～30℃时，可在孵化后4h开始观察，阴性者8h及12h再观察1次；气温在20℃～25℃时，则可在8h后观察第1次，12h后观察第2次；如利用自然气温孵化，一昼夜之间的气温悬殊，可在操作后的次晨再观察1次。一般室温在25℃以上时，可利用自然气温孵化，无需加温。 观察毛蚴时，应将烧瓶向着光源，并衬以黑纸板。要注意毛蚴与水中原生动物的区别。如有怀疑，可用毛细吸管吸出，在显微镜下鉴别。 1.6.2改良加藤厚涂片法
操作步骤：置尼龙绢片（80目～100目/25.4mm）于受检粪样上，用软性塑料刮片在尼龙绢片上轻刮，粪便细渣即由绢片微孔中露至绢片表面。将定量板（3cm×4cm×2.5mm，板中圆孔的孔径为1.5mm，刮平后，孔中可容粪量41.7mg）放在载玻片中部，以刮片从尼龙绢片上刮取细粪渣填入定量板的中央孔中，填满刮平。小心提起定量板，粪样即留在载玻片上。取一张经甘油-孔雀绿溶液浸渍24h的亲水性玻璃纸（30 mm×30mm），盖在粪便上，用橡皮塞或另一块载玻片覆于玻璃纸上轻压，使粪便均匀展开至玻璃纸边缘。编号后置于25℃室温，相对湿度75%下过夜，镜检。否则会因透明过度而漏检。每份粪样至少需做2张涂片，以镜检每片平均检出的虫卵数乘以24即为1g粪便中的虫卵数（EPG）。 1.6.3集卵透明法
操作步骤：将粪便充分搅匀后，取5g置于搪瓷杯中，加水调成粪液。把粪液通过60目/25.4mm的铜丝筛淋水滤入2只套叠在一起的尼龙袋中（袋深20cm ，袋口直径8cm，外袋 260目/25.4mm，内袋120目/25.4mm）。然后移去铜丝筛，继续淋水冲洗袋内粪渣，并把袋轻轻振荡，使加速过滤，直至滤出液变清为止。用药勺刮取外袋内全部沉渣，分作涂片。 在沉渣图片上，覆盖经甘油-孔雀绿溶液浸渍24h的亲水性玻璃纸（2cm ×5cm），以玻片压匀，置室温中过夜，次日镜检。以全部沉渣获得的虫卵数相加，再除以5得出每克粪便中虫
2009年08月10日发布 2009年08月14日实施
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寄生虫检测作业指导书
文件编号：PLCDCW031014
版号：第2版 第2页共4页
卵数（EPG）。 D 肺吸虫检验 病原诊断
⑴痰或粪便虫卵检查：查获并殖吸虫虫卵可确诊（粪检参考A的改良加藤厚涂片法）。 ⑵活检：皮下包块或结节手术摘除可能发现童虫，或典型的病理变化。 免疫试验
⑴皮内试验：常用于普查，阳性符合率可高达95％以上，但常有假阳性和假阴性。 ⑵酶联免疫吸附试验：敏感性高，阳性率可达90％～100％。
⑶循环抗原检测：近期应用酶连免疫吸附抗原斑点试验（8ST－ELIS8）直接检测血清中循环抗原，阳性率在98％以上，且可作为疗效评价。 E 华支睾吸虫检验
病原学检查粪检找到华支睾吸虫卵是确诊的根据，一般在感染后1?个月可在大便中发现虫卵，常用的方法有
(1)涂片法：直接涂片法操作虽然简便，但由于所用粪便量少，检出率不高，且虫卵甚小，容易漏诊。定量透明法（KAto-KAtz，甘油纸厚涂片透明法），在大规模肠道寄生虫调查中，被认为是最有效的粪检方法之一，可用于虫卵的定性和定量检查。
(2)集卵法：此法检出率较直接涂片法高。集卵法包括漂浮集卵法和沉淀集卵法两类，沉淀集卵常用水洗离心沉淀法，乙醚沉淀法。
F 牛、猪肉绦虫检验：
对可疑的患者应连续数天粪便检查，必要时还可试验性驱虫。收集患者的全部粪便，用水淘洗检查头节和孕节可以确定虫种和明确疗效。将检获的头节或孕节夹在两载玻片之间轻压后，观察头节上的吸盘和顶突小钩或孕节的子宫分支情况及数目即可确诊，并与牛带绦虫相鉴别。
G 丝虫检验（厚血片法） 1.1 厚血膜法
2009年08月10日发布 2009年08月14日实施
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寄生虫检测作业指导书
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1.1.1 血片制作：于晚9时至翌晨2时，以酒精棉球消毒耳垂(或指端)待干，用三棱针快速深刺，轻挤出血液，取血3大滴，约等于60μL，置于已编号的清洁载玻片上，涂成边缘整齐、厚薄均匀的椭圆形或长方形厚血膜(约长3cm、宽1.5cm)，平放于有盖的玻片盒内，以防落灰或虫吃。
1.1.2 血片染色：次日，将经自然干燥的血片放入清水中溶血5～10min，至血膜呈乳白色，取出晾干，甲醇固定，染色。大规模普查可用硼砂美蓝染色，鉴定虫种及保存宜用吉氏液或苏木素染色。
1.1.2.1 硼砂美蓝染色法：取美蓝2g，硼砂3g，置研钵内，边研边加水，待溶解后冲洗入瓶中，加蒸馏水100mL配成原液，过滤后放置备用。染色时取原液5mL加清水配成5％稀释液，染3～5min，使血膜呈天蓝色，然后用清水轻轻冲洗。本法染色前可不必先溶血、固定。 1.1.2.2 吉氏染色法：染液由吉氏粉0.5g，中性甘油25mL及甲醇25mL配成。先置染粉于研钵内，加少量甘油充分研磨，边研边加，至甘油加完为止，然后倾入100mL玻塞瓶内，用甲醇小量多次洗涤甘油染液倾入瓶内，塞紧瓶塞，充分摇匀，置于55～60℃温箱内24h或室温下3～5天，即为原液，放置愈久染色效果愈佳，临用时稀释。将溶血后已干的血片用甲醇固定约1min，然后滴加10％染液(原液加清水稀释配成)染45min，用蒸馏水轻轻冲洗。 1.1.2.3 德氏苏木素染色法；染液由A液即铵明矾饱和液(铵明钒20g、蒸馏水100mL)；B液(苏木素结晶1g加纯酒精10mL)；C液(甘油25mL加甲醇25mL)配成。将B液逐滴加入A液中，倒入一不盖紧的容器内，置于空气流通处，经2周至1个月使其充分氧化，过滤后加入C液，密封备用。血片溶血固定步骤同前。用上述染液染10～20min，用0.05％～0.1％稀盐酸脱色片刻，流水冲洗至血膜呈蓝色。
1.1.3 血片镜检：将染色的血片在低倍显微镜下顺序逐个视野检查微丝蚴并计数，根据微丝蚴的大小、体态、折光性、有无鞘膜、表皮是否光滑及内部结构等特征，予以识别。在高倍镜下观察微丝蚴的体核及头端空隙、神经环、排泄细胞、排泄孔、肛孔、尾核等结构。必要时需要用油镜作进一步鉴别。
H 旋毛虫检查（压片法查幼虫包囊）
2009年08月10日发布 2009年08月14日实施