12、可逆性抑制作用分为__________和___________两种主要类型，前者是_______改变而不改变______可通过___________方法来消除这种抑制作用；后者改变_______而不改变________。
（竞争性抑制， 非竞争性抑制， Km， V, 增加底物浓度， V, Km）
13、酶活性部位上的基团可分为两类： 和 。酶的活性部位不仅决定酶的 ，同时也对酶的 起决定性作用。 （结合基团 催化基团 专一性 催化性质） 14、米氏常数Km是 常数，可用来近似表示 。Km愈大，则表示 ，愈小则表示 。
（酶的特征性物理酶对底物亲和力的大小酶对底物亲和力小酶对底物亲和力大） 15、根据酶催化反应的类型,把酶分为六大类,它们是 、 、 、 、 、 。
（氧化还原酶、转移酶、水解酶、裂解酶、异构酶、合成酶）
16、酶具有高催化效率的因素主要是 、 、 、 。 （邻近定位效应、张力与变形、酸碱催化、共价催化） 17、当_ 时，酶促反应速度与[E]成正比。（底物过量）
18、酶活性中心的两个功能部位为__ 和__ 。 （结合中心 催化中心）
19、酶的负协同效应使酶的 对 不敏感。 （反应速度 底物浓度）
20、酶的辅助因子在酶促反应中起 作用，而酶蛋白决定酶的 。 （催化作用 专一性）
21、蛋白水解酶类可分为 、 和 三类。 （肽链内切酶 肽链外切酶 二肽酶） 22、根据酶蛋白分子结构的特点，可把酶分为三类： 、 、 。 （单体酶、寡聚酶、多酶络和物）
23、酶对底物的专一性可以分为两种情况： 和 。 （结构专一性，立体异构专一性） 24、影响酶促反应速度的因素有 、 、 、 、 、 和 等。（酶浓度，底物浓度，PH，温度，激活剂，抑制剂） 25、作为生物催化剂的酶与无机催化剂不同的特点是：（1） 、（2） （3） （4） 。（催化效率高，专一性强，酶易失活，酶活力的可调性） 26、竞争性抑制剂使 Vmax , Km 。非竞争性抑制的酶反应中Vmax___ __,Km_____ ____。 （不变， 增加 ， 减小，不变）
五、计算
1、某酶制剂的比活力为42单位/mg蛋白质,每ml含12mg蛋白质,
(1) 计算1ml反应液中含5μl酶制剂时的反应初速度
(2) 若1ml反应液内含5μl酶制剂,在10分钟内消耗底物多少? 解：
(1) 1个酶活力单位为特定条件下,1分钟内能转化1μmol底物的量.
反应初速度v=5×10-3×12×42 =2.52（μmol/L/min） (2) 10分钟内消耗底物: 2.52μmol/L/min×10min=25.2μmol
2、某酶的Km为4.7*10-3M，如果该反应的Vmax是22μmol*L-1*min-1,在底物浓度为2*10-4M和抑制的浓度为5*10-4M的情况下在：
（1） 竞争性抑制，其反应速度将是多大？
（2） 非竞争性，其反应速度又将是多大？（Ki在这两种情况下都是3*10-4）
（共3分）
解：（1）v=Vmax[S]/{ Km(1+[I]/ Ki)+[S]}
=22*10-6*2*10-4/{4.7*10-3*(1+5*10-4/3*10-4)+2*10-4} =3.46*10-7(mol*L-1*min-1)
(2) v=( Vmax/(1+[I]/ Ki) [S])/( Km+ [S])
=3.57*10-7(mol*L-1*min-1
3、某一符合米氏方程的酶，当[S]=2Km时，其反应速度Vmax等于多少？
v=Vmax[S]/(Km+[S])
v=Vmax*2Km/(Km+2Km) v=2/3Vmax
即此时反应速度为最大反应速度2/3
#4、某酶的Km为4.0×10-4mol/L,Vmax=24μmol/L/min，计算出当底物浓度为2×10-4mol/L，非竞争性抑制剂浓度为6.0×10-4 mol/L,Ki为3.0×10-4 mol/L时的抑制百分数。
有抑制剂存时：
v=Vmax[S]/(1+[I]/Ki)(Km+[S]) v=24 *2×10-4/(1+6.0×10-4/3.0×10-4)( 4.0×10-4+2×10-4) v=24 *2×10-4/18 v=8/3×10-4(μmol/L/min) 无抑制剂存时： v=Vmax[S]/(Km+[S]) v=24 *2×10-4/( 4.0×10-4+2×10-4) v=8×10-4(μmol/L/min) [1-8/3×10-4(μmol/L/min)/ 8×10-4(μmol/L/min)]*100%=66.7%
即有非况争性抑制剂存在时,其抑制百分数为66.7%
5、已知1亳升酶溶液中含蛋白质量为0.625mg，每亳升酶溶液所含酶单位为250，些酶的活性是多少？（3’）
250/0.625=400U/mg
6、一酶促反应的速度为Vmax的80%,在Km与[S]之间有何关系?
Km=[S]/4
7、某一酶促80反应的速度从最大速度的10%提高到90%时，底物浓度要做多少改变？ 需提高80倍
8、一种纯酶按重量算含Leu 1.65%和Ile 2.48%,问该酶最低分子量为多少?
解：设该酶的最低分子量为M, 最少含X个 Leu残基, 含Y个Ile残基
则：XMLeu/M=1.65% YMIle/M=2.48% 因为 MLeu ＝ MIle ＝131
所以X/Y=1.65/2.48＝2/3 即X＝2 Y＝3
代入公式：2 x 131/M=1.65% M=2 x 131/1.65%=15800
答该酶最低分子量为15800
9、过氧化氢酶Km值为2.5*10-2克分子/升，当底物过氧化氢浓度为100毫克分子/升时，求在此浓度下，过氧化氢酶被底物所饱和的百分数（即V/Vmax=？） 解答：V=Vmax[S]/（Km+[S]）
故V/Vmax=[S]/（Km+[S]）=100*10-3/（2.5*10-2+10-1）=0.1/0.125*100%=80% 10、某酶的Km为4.0×10-4mol/L,Vmax=24μmol/L/min，计算出当底物浓度为2×10-4mol/L，非竞争性抑制剂浓度为6.0×10-4 mol/L,Ki为3.0×10-4 mol/L时的抑制百分数。 解答：有抑制剂存在时：
v=Vmax[S]/(1+[I]/Ki)(Km+[S]) v=24 *2×10-4/(1+6.0×10-4/3.0×10-4)( 4.0×10-4+2×10-4) v=24 *2×10-4/18 v=8/3×10-4(μmol/L/min) 无抑制剂存在时： v=Vmax[S]/(Km+[S]) v=24 *2×10-4/( 4.0×10-4+2×10-4) v=8×10-4(μmol/L/min) [1-8/3×10-4(μmol/L/min)/ 8×10-4(μmol/L/min)]*100%=66.7% 即有非竞争性抑制剂存在时,其抑制百分数为66.7%
六、问答
1、同工酶有何生理意义？
同工酶指能催化同一种化学反应，但其酶蛋白分子结构组成却不同的一组酶。同
工酶可能是生命有机体对环境变化或代谢变化的另一种调节方式，即当一种同工酶受抑制或破坏时，其他同工酶仍起作用，从而保证代谢的正常进行。
#2、简述多底物反应的几种机理。
多底物反应有：依次反衣机理，即产生的底物随酶催化反应依次释放；随机反应机理，即底物以随机的方式释放；乒乓反应机理。
3、如何解释酶活性与pH的变化关系，假如其最大活性在pH=4或pH=11时，酶活性可能涉及那些氨基酸侧链？
解答：(1)过酸、过碱影响酶蛋白的构象，甚至使酶变性失活。
(2)PH改变不剧烈时，影响底物分子的解离状态和酶分子的解离状态，从而影响酶对底物的结合与催化。
(3)PH影响酶分子中另一些基团的解离，这些基团的解离状态与酶的专一性及酶分子的活性中心构象有关。
如果酶的最大活性在PH=4时，可能涉及酸性氨基酸：天冬氨酸、谷氨酸； 如果酶的最大活性在PH=11时，可能涉及碱性氨基酸：赖氨酸、组氨酸和精氨酸。
4、 述酶活性调控的几种机制。
解答：酶活性调控的机制有：别构效应的调控，可逆共价修饰调控，酶原的激活和激促蛋白或抑制蛋白质的调控。
5、运用生化理论，试分析下述现象：绝大多数酶溶解在纯水中会失活，为什么？ 解答：酶溶解在蒸馏水中，（1）不能为酶催化反应提供最适的PH环境，特别是当反应过程中，PH发生变化时，不能起缓冲作用；（2）在蒸馏水中蛋白质容易变性；（3）酶在净水溶液中缺乏必需的离子，且对温度变化敏感，所以对酶来说在蒸馏水中容易失活。
第五章 核酸
一、名词解释
1、cAMP和cGMP：分别是环腺苷酸和环鸟苷酸，它们是与激素作用密切相关的代谢调节物。
#2、断裂基因
断裂基因：真核生物的基因由于内含子的存在，而使基因呈不连续状态，这种基因称为断裂基因。
3结构基因：为多肽或RNA编码的基因叫结构基因。
4、假尿苷：在tRNA中存在的一种5-核糖尿嘧啶，属于一种碳苷，其C1与尿嘧啶的C5
相连接。
#5、Southern印迹法：把样品DNA切割成大小不等的片段，进行凝胶电泳，将电泳分离后的DNA片段从凝胶转移到硝酸纤维素膜上，再用杂交技术与探针进行杂交，称Southern印迹法。
6、核酸的变性：高温，酸，碱以及某些变性剂（如尿素）能破坏核酸中的氢键，使有规律的螺旋型双链结构变成单链的无规则的“线团”，此种作用称为核酸的变性。
7、核酸的变性：高温、酸、碱以及某些变性剂（如尿素）能破坏核酸种的氢键，使有规律的双螺旋结构变成单链，似无规则的“线团”，此谓核酸的变性。 8、内含子：基因中不为蛋白质、核酸编码的居间序列，称为内含子。
9、假尿苷：tRNA分子中存在一种核糖尿嘧啶，其C1’是与尿嘧啶的第三个碳原子相连。 10、增色效应：核酸变性或降解时其紫外线吸收增加的现象。 11、hnRNA：称为核不均一RNA，是细胞质mRNA的前体。
12、退火：变性核酸复性时需缓慢冷却，这种缓慢冷却处理的过程，叫退火。
13、复制子：基因组能独立进行复制的单位称为复制子。原核生物只有一个复制子，真核生物有多个复制子。
14、增色效应：DNA或RNA变性或降解时其紫外吸收值增加的现象称增色效应。 15、减色效应：DNA或RNA复性时其紫外吸收值减少的现象称减色效应。
16、Northern印迹法：将电泳分离后的RNA吸印到纤维素膜上再进行分子杂交的技术，称Northern印迹法。
17、解链温度：DNA的加热变性一般在较窄的温度范围内发生，通常把DNA的双螺旋结构失去一半时的温度称为DNA的解链温度。
二、选择
#1、把RNA转移到硝酸纤维素膜上的技术叫：（B）
A Southern blotting B Northern blotting
C Western blotting D Eastern blotting 2、外显子代表：（E）
A 一段可转录的DNA序列 B 一段转录调节序列
C一段基因序列 D一段非编码的DNA序列 E一段编码的DNA序列 3、脱氧核糖的测定采用（ B ）
A、地衣酚法 B、二苯胺法 C、福林-酚法 D、费林热滴定法 *4、在DNA双螺旋二级结构模型中，正确的表达是：（CF）
A 两条链方向相同，都是右手螺旋 B 两条链方向相同，都是左手螺旋 C 两条链方向相反，都是右手螺旋 D 两条链方向相反，都是左手螺旋 E 两条链的碱基顺序相同
‘