实验五 大鼠阴道涂片、肺水肿模型及其它试教实验
一、实验目的
通过实际操作，掌握大鼠阴道涂片的制作方法及性周期的观察；强化实验动物疾病模型的基本概念，掌握诱发性急性肺水肿动物模型的建立方法，观察肺脏的病理变化；通过试教初步了解裸鼠肿瘤接种的流程及操作技巧，金黄地鼠的颊囊及比格犬的年龄判断、前肢背桡外侧静脉和后肢侧皮下小静脉的采血操作。
二、实验材料
1. 实验动物：SD大鼠，裸鼠，金黄地鼠，比格犬；
2. 实验材料：毛细滴管、载玻片、酒精灯、生理盐水、吉姆萨染色液、846合剂、手术剪、手术镊、2ml注射器、5ml注射器、干棉球、酒精棉球、绷带、橡皮绑带、显微镜。
三、实验内容
1. 大鼠阴道涂片及性周期观察 2. 大鼠急性肺水肿模型的建立 3. 裸鼠肿瘤接种的试教实验 4. 比格犬年龄判断
5. 比格犬前肢背桡外侧静脉、后肢侧皮下小静脉采血 6. 金黄地鼠颊囊的观察
四、实验方法与步骤
1. 大鼠阴道涂片及性周期观察
哺乳类动物在性成熟后出现动情周期变化，其中啮齿类动物在动情周期不同阶段引导粘膜发生比较典型的变化。因此可将阴道分泌物涂片染色，根据图片的细胞学改变来鉴别性周期的不同阶段。
左手抓住大鼠，食指和中指卡紧大鼠颈部，无名指与小拇指握住胸部，小指压住腹部，右手拉住尾巴稍用力向后拉，以充分暴露雌鼠阴道。用滴管吸生理盐水1-2滴，然后插入大鼠阴道深部反复冲洗，吸出洗液滴一滴涂于载玻片上，用酒
精将片子烘干，吸阴道分泌物时，要反复冲洗4-5次，确保吸到阴道分泌物。用吉姆萨染液染色20min，水洗，在显微镜下观察。显微镜下看到大量角化细胞，没有找到明显有核细胞和分叶细胞，可能是烘干片子时细胞结构被破坏。 实验中观察到聚集的有核细胞，无核细胞均有，且细胞量少，估计该大鼠处于发情间期。
2. 大鼠急性肺水肿模型的建立
称取大鼠重量。左手抓住大鼠，食指和中指卡紧大鼠颈部，无名指与小拇指握住胸部，小指压住腹部，右手拉住尾巴稍用力向后拉，腹腔注射0.6mL 8%氯化铵溶液（雌性：7-8mL/kg，雄性：9-11mL/kg），观察大鼠一般情况与呼吸状况，存活时间。实验中见2-3分钟后大鼠出现轻微抽搐，5-6分钟后突然倒下，全身僵直，剧烈抽搐，持续1-2分钟后死亡。
大鼠死亡后进行解剖，打开胸腔，找到两侧肺组织，剪断气管，取出双肺。实验中观察到双肺明显肿胀，颜色变深，布满暗红色纹理，严重红细胞浸润。 3. 裸鼠肿瘤接种的试教实验
采用细胞悬液接种法。注射器吸取适量细胞悬液注射与裸鼠皮下，部位看实验要求而定，一般在腋下或背部皮肤，每个接种部位注射0.1-0.2mL。将培养的细胞收集跳刀适宜浓度重悬于不含血清的培养液或PBS中，直接注射即可。裸小鼠较脆弱，注意操作温柔，切勿用力，避免裸鼠死亡。 4. 比格犬年龄判断及前、后肢采血实验
判断狗的年龄，主要依靠狗牙齿的磨损和脱落情况。狗出生后十几天即生出乳齿，两个月后开始由门齿、犬齿、臼齿逐渐换为恒齿，六个月门齿长齐，8-10个月恒齿换齐，但需要1岁半以后牙齿才能生长坚实，年龄越大，牙齿磨损更严重，且颜色变深。实验所用比格犬思科门齿基本长齐，犬牙较尖较细，估计年龄为接近六月龄。
5. 比格犬前肢背桡外侧静脉、后肢侧皮下小静脉采血
一人抓比格犬颈部皮肤固定头部，另一人吸取狗麻醉剂846合剂，注射在其臀部。待狗较为萎靡时，用纱布固定其嘴部，纱布将比格犬嘴部紧密缠绕两圈后系于而后头部，以免被咬伤，比格犬性情温顺，若对比较狂躁、性情不温顺的犬必须固定嘴部。
前肢背桡外侧静脉位于前脚爪的上方外侧正前位，用橡皮绑带绑在比格犬前置上部，找到内侧皮下静脉，右手用6号或7号针头迅速刺穿静脉，左手放松将针固定，以适当速度抽血，以无气泡为宜，抽血失败时从远心端向近心端扎针。后肢外侧小静脉位于后肢胫部下三分之一的外侧浅表皮下，由前侧方向后行走，将胶皮带绑在狗股部，将抽血部位毛剪去，酒精消毒皮肤，找到静脉采血即可。一只狗一般采10-20ml血并不困难。 6. 金黄地鼠颊囊的观察
一般情况下地鼠不咬人，当感受到地鼠呼气时则需小心，可能会咬人。地鼠皮肤很松弛，若仅抓少量皮肤，地鼠可能翻过来咬人。抓取时可用手指一起呈杯状伸到笼内，把地鼠揪出，另一手将其围在球型掌内，抓住颈部和肩胛部的大部分松软皮肤将其固定住。用镊子轻轻拨开地鼠的嘴观察到口腔内有一凹进去的槽即为颊囊。