附件1
2011年动物源细菌耐药性监测计划
表1. 采样与细菌的分离
检测单位 中国兽医药品监察所 辽宁兽药饲料蓄产品质量安全检测中心 上海兽药监察所 四川省兽药监察所 广东省兽药与饲料监察总所 中国动物卫生与流行病学中心 样品来源 选5-8个省市 本省或 相邻省市 本省或 相邻省市 本省或 相邻省市 本省或 相邻省市 本省或 相邻省市 采样地要求 养殖场或屠宰场或奶牛场10-20个 养殖场或屠宰场或奶牛场6-15个 养殖场或屠宰场或奶牛场6-15个 养殖场或屠宰场或奶牛场6-15个 养殖场或屠宰场或奶牛场6-15个 养殖场或屠宰场或奶牛场10-15个 采样部位 泄殖腔拭子或动物组织，牛奶 泄殖腔拭子或动物组织，牛奶 泄殖腔拭子或动物组织，牛奶 泄殖腔拭子或动物组织，牛奶 泄殖腔拭子或动物组织，牛奶 泄殖腔拭子或动物组织，牛奶 细菌数要求 大肠杆菌≥500株，沙门氏菌≥50株，金葡菌≥30株，弯曲杆菌≥50株 大肠杆菌≥300株，沙门氏菌或金葡菌≥30株 大肠杆菌≥300株，沙门氏菌或金葡菌≥30株 大肠杆菌≥300株，沙门氏菌或金葡菌≥30株 大肠杆菌≥300株，沙门氏菌或金葡菌≥30株 大肠杆菌≥300株，沙门氏菌或金葡菌≥30株，弯曲杆菌≥50株 注：1. 同一养殖场采样时，应对不同饲养阶段的动物分别采样，对鸡的采样应当为雏鸡和成鸡，对猪的采样应当为仔猪和架子猪，每一阶段的动物采样30-50份。
2. 采样与细菌的分离。采样和分离方法按附件2、附件4进行；采样的动物种类、动物场和数量、分离细菌数量要求见表1。 3. 细菌鉴定。分别对分离株按附件2进行大肠杆菌、沙门氏菌和金葡菌鉴定。必要时进行血清学测定。 4. 细菌的耐药性测定。分别对分离的每种菌株按附件3要求对14种药物做耐药性测定。
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附件2
2011年度动物源耐药性监测的采样、检测技术要点 一、采样 1. 采样地点选择
中国兽医药品监察所在全国范围内选取7个左右省市的16个左右养殖场；中国动物卫生与流行病学中心选取3个左右省市的12个左右养殖场；辽宁、上海、成都、广东和青岛五省市耐药性监测实验室在本省市（或周围地区）选择鸡场6个、猪场5个（规模化养殖场和小型养殖场各占一半）。本年度大肠杆菌的耐药性监测采样要求在各实验室在前几年耐药性监测基础上，每个实验室应选择5～6个养殖场，定点、定季度跟踪采样监测。
2. 采样类型
利用棉花拭子采泄殖腔（禽）和肛门（猪、牛）作大肠杆菌、沙门氏菌和弯曲杆菌分离，或从孵化后期死亡鸡胚采样分离沙门氏菌。选择奶牛场1-2个，采取新鲜牛奶分离金黄色葡萄球菌，根据养殖场规模，每个场采样30-50份。
3. 病原检测种类
本年度动物源细菌检测种类包括前几年监测的大肠杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌和本年度新增加的弯曲杆菌。病原菌沙门氏菌和金黄色葡萄球菌可根据各地采样、细菌分离情况任选其一进行监测，也可同时进行。
二、认真做好饲料来源和饲料药物添加剂调查、采样前动物抗菌
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药使用情况调查（预防用药和治疗用药）和样品统计，据实填写采样记录表。
三、大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和弯曲菌的分离鉴定 采用特殊培养基，定向做大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和弯曲菌分离，用生化试验、PCR技术或血清学方法对分离物进行鉴定，尽早进行弯曲杆菌分离鉴定技术培训。本年度要求每个省级实验室分离大肠杆菌不少于300株（鸡场200株，猪场分离100株），沙门氏菌或金黄色葡萄球菌不少于30株，弯曲杆菌不少于50株。中国兽医药品监察所分离大肠杆菌不少于500株（鸡场300株，猪场分离200株），沙门氏菌不少于50株，金葡菌不少于30株，弯曲杆菌不少于100株。将分离到的菌株-20℃以下加甘油保护剂冷冻保存或其它合适方法保存。
四、耐药性测定
用微量肉汤稀释法（附件3），测定肠道菌、金黄色葡萄球菌对临床13种常用抗菌药物的耐药性（注意肠道菌、金黄色葡萄球菌的测试药物各有不同），弯曲杆菌统一送中国兽医药品监察所指导耐药性检测。将测定结果正确填入耐药性检测结果统计表（附件6）。药物种类、判断标准及质控菌株的质控范围见附件3，试验用标准品、质控菌株由中国兽医药品监察所统一供应。
五、结果报送
各地方动物源耐药性监测实验室的采样情况和耐药性检测结果，应填入采样记录表（附件5）和耐药性检测结果登计表（附件6）统
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一报送中国兽医药品监察所，经统计分析后上报农业部兽医局。
结果的上报分电子版和纸质2部分，电子版直接登陆“物源细菌耐药性数据库”上报。纸质结果的上报主要是监测结果总结，要求统一格式、同一内容。主要内容分6部分阐述：（1）本年度任务简述；（2）细菌分离情况；（3）耐药性监测情况；（4）耐药性监测结果分析；（5）存在问题；（6）改进措施和建议。
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附件3
采样记录表
采 样 地：___________ _____ 养 殖 场：_________ ____ ___ 采样时间：__________ ____ 联系人姓名、电话：________________ __ 样品来源
□ 猪 日龄 ____ □ 鸡 日龄 ____ □ 牛 日龄 ____ 其他________日龄 ____ □ 消化道 □ 呼吸道 □ 泌尿生殖道 □ 肝胆 □ 脑 □ 淋巴结 □ 关节 □ 奶样 □ 皮肤 □ 粪便 其他______________ 采样动物健康状况 养殖量 □ 健康 □ 发病及症状：____________________________ ________ 。 采样养殖场使用抗菌药情况 饲料来源、添加抗菌药种类 样品分离菌株 □ 大肠杆菌 □ 金黄色葡萄球菌 □ 链球菌 □ 沙门氏菌 □ 空肠弯曲杆菌 其他__________________ 菌株编号： 注：菌株编号按照“菌种、来源-采样地、采样年月-菌株编号”的格式进行。如EB-L0701-0001，其中：E（大肠杆菌）B（牛）L（鲁）07（年）01（月）-0001（菌株编号）。 菌种简写建议为：E（大肠杆菌）、S（沙门氏菌）、SA（金黄色葡萄球菌）、SC（链球菌）、C（空肠弯曲杆菌） 动物简写建议为：B（牛）、P（猪）、C（鸡） 治疗用抗菌药种类 注：a为喂奶猪或保温鸡，b为保育猪或生长鸡，c为育成猪或鸡，d为种母猪或产蛋鸡。
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