实验一 观察DNA、RNA在细胞中的分布（必修一P26）
一．实验目的：初步掌握观察DNA和RNA在细胞中分布的方法 二．实验原理：
1．甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同，甲基绿使DNA呈现绿色，吡罗红使RNA呈现红色。利用甲基绿、吡罗红混合染色剂将细胞染色，可以显示DNA和RNA在细胞中的分布。
2．盐酸能够改变细胞膜的通透性，加速染色剂进入细胞，同时使染色休中的DNA和蛋白质分离，有利于DNA与染色剂结合。
三．方法步骤： 操作步骤 注意问题 解释 取口腔上皮载玻片要洁净， 滴一滴质量分防止污迹干扰观察效果 细胞制片 数为0.9%的NaCl溶液 保持细胞原有形态 用消毒牙签在自己漱净的口腔内侧壁 消毒为防止感染，漱口避免取材失败 上轻刮几下取细胞 将载玻片在酒精灯下烘干 固定装片（细胞已死亡） 水解 将烘干的载玻片放入质量分数为8%改变细胞膜的通透性，加速染色剂进的盐酸溶液中，用300C水浴保温5min 入细胞，促进染色体的DNA与蛋白质分离而被染色 冲冼涂片 用蒸馏水的缓水流冲洗载玻片10S 洗去残留在外的盐酸 染色 滴2滴吡罗红甲绿染色剂于载玻片上 两种溶液混合，现配现用 染色5min 观察 先低倍镜观察，选择染色均匀、色泽使观察效果最佳 浅的区域，移至视野中央，调节清晰后才换用高倍物镜观察
实验二 检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质（必修一P18）
一．实验目的： 尝试用化学试剂检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质
二．实验原理：某些化学试剂能使生物组织中的有关有机化合物，产生特定的颜色反应。 1．可溶性还原糖（如葡萄糖、果糖、麦芽糖）与斐林试剂发生作用，可生成砖红色的Cu 2O沉淀。如：
加热 葡萄糖+ Cu ( OH ) 2 葡萄糖酸 + Cu 2O↓（砖红色）+ H 2O，即Cu ( OH ) 2被还原成Cu 2O，葡萄糖被氧化成葡萄糖酸。
2．脂肪可以被苏丹Ⅲ染液染成橘黄色（或被苏丹Ⅳ染液染成红色）。淀粉遇碘变蓝色。 3．蛋白质与双缩脲试剂发生作用，产生紫色反应。（蛋白质分子中含有很多肽键，在碱性NaOH溶液中能与双缩脲试剂中的Cu2+作用，产生紫色反应。） 三．实验材料
1．做可溶性还原性糖鉴定实验，应选含糖高，颜色为白色的植物组织，如苹果、梨。（因为组织的颜色较浅，易于观察。）
2．做脂肪的鉴定实验。应选富含脂肪的种子，以花生种子为最好，实验前一般要浸泡3~4小时（也可用蓖麻种子）。
3．做蛋白质的鉴定实验，可用富含蛋白质的黄豆或鸡蛋清。 四、实验试剂 斐林试剂（包括甲液：质量浓度为0.1g/ mL NaOH溶液和乙液：质量浓度为0.05g/ mL CuSO4溶液）、苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液、双缩脲试剂（包括A液：质量浓度为0.1g/ mL NaOH溶液和B液：质量浓度为0.01g/ mL CuSO4溶液）、体积分数为50%的酒精溶液，碘液、蒸馏水。 五、方法步骤：
（一）可溶性糖的鉴定 操 作 方 法 注 意 问 题 解 释 1. 制备组织样液。 苹果或梨组织液必须临时制备。 因苹果多酚氧化酶含量高，（去皮、切块、研磨、过滤） 组织液很易被氧化成褐色，将产生的颜色掩盖。 2. 取1支试管，向试管内注 入2mL组织样液。 3. 向试管内注入1mL新制应将组成斐林试剂的甲液、乙液斐林试剂很不稳定，甲、乙的斐林试剂，振荡。 分别配制、储存，使用前才将甲、液混合保存时，生成的Cu 乙液等量混匀成斐林试剂； ( OH ) 2在70~900C下分解 成黑色CuO和水； 切勿将甲液、乙液分别加入苹果甲、乙液分别加入时可能会组织样液中进行检测。 与组织样液发生反应，无Cu ( OH ) 2生成。 04. 试管放在盛有50-65C温最好用试管夹夹住试管上部，使防止试管内的溶液冲出试水的大烧杯中，加热约2分试管底部不触及烧杯底部，试管管，造成烫伤； 钟，观察到溶液颜色：浅蓝口不朝向实验者。 色 → 棕色 → 砖红色（沉 淀） 模拟尿糖的检测 1、取样：正常人的尿液和糖尿病患者的尿液
2、检测方法：斐林试剂（水浴加热）或班氏试剂或尿糖试纸 3、结果：（用斐林试剂检测）试管内发生出现砖红色沉淀的是糖尿病患者的尿液，未出现砖红色沉淀的是正常人的尿液。 4、分析：因为糖尿病患者的尿液中含有还原糖，与斐林试剂发生反应产生砖红色沉淀，而正常人尿液中无还原糖，所以没有发生反应。
（二）脂肪的鉴定 操 作 方 法 注 意 问 题 解 释 花生种子浸泡、去皮、切下一些子干种子要浸泡3~4小因为浸泡时间短，不易切片，叶薄片，将薄片放在载玻片的水滴时，新花生的浸泡时浸泡时间过长，组织较软，切中，用吸水纸吸去装片中的水。 间可缩短。 下的薄片不易成形。切片要尽可能薄些，便于观察。 在子叶薄片上滴2~3滴苏丹Ⅲ或苏染色时间不宜过长。 丹Ⅳ染液，染色1分钟。 用吸水纸吸去薄片周围染液，用 酒精用于洗去浮色，不洗去浮50%酒精洗去浮色，吸去酒精。 色，会影响对橘黄色脂肪滴的观察。同时，酒精是脂溶性溶剂，可将花生细胞中的脂肪颗粒溶解成油滴。 用吸水纸吸去薄片周围酒精，滴上 滴上清水可防止盖盖玻片时产1~2滴蒸馏水，盖上盖玻片。 生气泡。 低倍镜下找到花生子叶薄片的最装片不宜久放。 时间一长，油滴会溶解在乙醇薄处，可看到细胞中有染成橘黄色中。 或红色圆形小颗粒。
三、蛋白质的鉴定 操 作 方 法 注 意 问 题 制备组织样液。 （浸泡、去皮研磨、过滤。） 鉴定。加样液约2ml于试管中，加入双缩脲试剂A，摇匀；再加入双缩脲试剂B液3~4滴，摇匀，溶液变紫色。 A液和B液也要分开配制，储存。鉴定时先加A液后加B液。 CuSO4溶液不能多加。 蛋清要先稀释。 解 释 黄豆浸泡1至2天，容易研磨成浆，也可购新鲜豆浆以节约实验时间。 先加NaOH溶液，为Cu2+与蛋白质反应提供一个碱性的环境。A、B液混装或同时加入，会导致Cu2+变成Cu ( OH ) 2沉淀，而失效。 否则CuSO4的蓝色会遮盖反应的真实颜色。 如果稀释不够，在实验中蛋清粘在试管壁，与双缩脲试剂反应后会粘固在试管内壁上，使反应不容易彻底，并且试管也不易洗干净。 以免影响颜色观察 可用蛋清代替豆浆。 附：淀粉的检测和观察 碘液不要滴太多 用试管取2ml待测组织样液，向试管内滴加2滴碘液，观察颜色变化。 考点提示：
（1）常见还原性糖与非还原性糖有哪些？ （2 ）还原性糖植物组织取材条件？
（3）研磨中为何要加石英砂？不加石英砂对实验有何影响？
（4）斐林试剂甲、乙两液的使用方法？混合的目的？为何要现混现用？ （5）还原性糖中加入斐林试剂后，溶液颜色变化的顺序为： （6）花生种子切片为何要薄？
（7）转动细准焦螺旋时，若花生切片的细胞总有一部分清晰，另一部分模糊，其原因一般是什么？
（8）脂肪鉴定中乙醇作用？
（9）双缩脲试剂A、B两液是否混合后用？
（1）葡萄糖、果糖、麦芽糖都是还原性糖；淀粉、蔗糖、纤维素都是非还原性糖。 （2 ）含糖量较高、颜色为白色或近于白色，如：苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜等。 （3）加石英砂是为了使研磨更充分。不加石英砂会使组织样液中还原性糖减少，使鉴定时溶液颜色变化不明显。
（4）混合后使用；产生氢氧化铜；氢氧化铜不稳定。 （5）浅蓝色 棕色 砖红色
（6）只有很薄的切片，才能透光，而用于显微镜的观察。 （7）切片的厚薄不均匀。 （8） 洗去浮色。
（9）不能混合；先加A液的目的是使溶液呈碱性；先留出一些大豆组织样液做对比。
实验四 用高倍镜观察线粒体和叶绿体（必修一P47） 一．实验目的：
使用高倍镜观察叶绿体和线粒体的形态分布。
二．实验原理：
叶绿体的辨认依据：叶绿体是绿色的，呈扁平的椭圆球形或球形。
线粒体辨认依据：线粒体的形态多样，有短棒状、圆球状、线形、哑铃形等。 健那绿染液是专一性染线粒体的活细胞染料，可以使活细胞中线粒体呈现蓝绿色。 三．实验材料：
观察叶绿体时选用：藓类的叶、黑藻的叶。取这些材料的原因是：叶子薄而小，叶绿体清楚，可取整个小叶直接制片，所以作为实验的首选材料。
若用菠菜叶作实验材料，要取菠菜叶的下表皮并稍带些叶肉。因为表皮细胞不含叶绿体。 四．方法步骤： 步 骤 注 意 问 题 分 析 1．制片。用镊子取一片黑藻制片和镜检时，临时装片中的否则细胞或叶绿体失水收缩，的小叶，放入载玻片的水滴叶片不能放干了，要随时保持将影响对叶绿体形态和分布中，盖上盖玻片。 有水状态 的观察。 2．低倍镜下找到叶片细胞 3．高倍镜下观察叶绿体的形 态和分布 4．制作人的口腔上皮细胞临在洁净载玻片中央滴一滴健 时装片 那绿染液→用牙签取碎屑→盖盖玻片 5．观察线粒体 蓝绿色的是线粒体，细胞质接 近无色。 讨论： 1、细胞质基质中的叶绿体，是不是静止不动的？为什么？
答：不是。呈椭球体形的叶绿体在不同光照条件下可以运动，这种运动能随时改变椭球体的方向，使叶绿体既能接受较多光照，又不至于被强光灼伤。 2、叶绿体的形态和分布，与叶绿体的功能有什么关系？
答：叶绿体的形态和分布都有利于接受光照，完成光合作用。如叶绿体在不同光照条件下改变方向。又如叶子上面的叶肉细胞中的叶绿体比下面的多，这可以接受更多的光照。
实验六 观察植物细胞的质壁分离和复原（必修一P61“探究”） 一、实验目的：
1．学会观察植物细胞质壁分离与复原的方法。 2．了解植物细胞发生渗透作用的原理。 二．实验原理：
1．质壁分离的原理：当细胞液的浓度小于外界溶液的浓度时，细胞就会通过渗透作用而失水，细胞液中的水分就透过原生质层进入到溶液中，使细胞壁和原生质层都出现一定程度的收缩。由于原生质层比细胞壁的收缩性大，当细胞不断失水时，原生质层就会与细胞壁分离。 2．质壁分离复原的原理：当细胞液的浓度大于外界溶液的浓度时，细胞就会通过渗透作用而吸水，外界溶液中的水分就通过原生质层进入到细胞液中，整个原生质层就会慢慢地恢复成原来的状态，紧贴细胞壁，使植物细胞逐渐发生质壁分离复原。 二、实验材料：
紫色洋葱鳞片叶的外表皮。因为液泡呈紫色，易于观察。也可用水绵代替。0.3g/ml的蔗糖溶液。用蔗糖溶液做质壁分离剂对细胞无毒害作用。 三、实验步骤： 步 骤 注 意 问 题 分 析 1．制作洋葱表皮的临时装 片。 在载玻片上滴一滴水，撕取盖盖玻片应让盖玻防止装片产生气泡。 洋葱鳞片叶外表皮放在水滴中展平（也可挑取几条水绵放入水滴中）。盖上盖玻片。 2．观察洋葱（或水绵）细胞 可看到：液泡大，呈紫色，原生质层紧贴着细胞壁。（或水绵细胞中有带状叶绿体，原生质层呈绿色，紧贴着细胞壁。 3．观察质壁分离现象。 从盖玻片的一侧滴入0．3g/ml的蔗糖溶液，在另一侧用吸水纸吸引，重复几次。镜检。观察到：液泡由大变小，颜色由浅变深，原生质层与细胞壁分离。原生质层与细胞壁之间充满蔗糖溶液。 片的一侧先触及载玻片，然后轻轻放平。 液泡含花青素，所以液泡呈紫色。 先观察正常细胞与后面的“质壁分离”起对照作用。 蔗糖溶液浓度大于细胞液浓度，细胞通 过渗透作用失水，细胞壁伸缩性小原生 质层的伸缩性大，液泡和原生质层不断 收缩，所以发生质壁分离。 为了使细胞完全浸入蔗糖溶液中。 否则，细胞严重失水死亡，看不到质壁重复几次 分离的复原。 糖液浓度不能过高 4．观察细胞质壁分离的复原 细胞液的浓度高于外界溶液，细胞通过发生质壁分离的装渗透作用吸水，现象。 所以发生质壁分离复原从盖玻片的一侧滴入清水，片，不能久置，要现象。 在另一侧用吸水纸吸引，重马上滴加清水，使因为细胞失水过久，也会死亡。 复几次。镜检。观察到：液其复原。 为了使细胞完全浸入清水中。 泡由小变大，颜色由深变浅，重复几次。 原生质层恢复原状。 实验讨论答案： 1．如果将上述表皮细胞浸润在与细胞液浓度相同的蔗糖溶液中，这些表皮细胞会出现什么现象？
答：表皮细胞维持原状，因为细胞液的浓度与外界溶液浓度相等。
2．当红细胞细胞膜两侧的溶液具有浓度差时，红细胞会不会发生质壁分离？为什么？ 答：不会。因为红细胞不具细胞壁。
考点提示：
（1）洋葱为何要选紫色的？若紫色过淡怎么办？ （2）洋葱表皮应撕还是削？为何？
（3）植物细胞为何会出现质壁分离？
（4）质壁分离时，液泡大小和颜色的变化？复原时呢？
（5）若发生质壁分离后的细胞，不能发生质壁分离复原，其原因是什么？ （6）高倍镜使用前，装片如何移动？
（7）换高倍物镜后，怎样使物像清晰？视野明暗度会怎样变化？如何调亮？ （8）所用目镜、物镜的长度与放大倍数的关系？
（9）物像清晰后，物镜与载玻片之间的距离和放大倍数的关系？
（10）总放大倍数的计算方法？放大倍数具体指面积的放大倍数还是长度的放大倍数？ （11）放大倍数与视野中细胞大小、多少、视野明暗的关系？
（12） 更换目镜，若异物消失，则异物在目镜上；更换物镜，若异物消失，则异物在物镜上、移动载玻片，若异物移动，则异物在载玻片上。
（13）怎样利用质壁分离现象来测定植物细胞液的浓度？
（1）紫色的洋葱有紫色的大液泡，便于观察液泡的大小变化；缩小光圈，使视野变暗些。 （2）表皮应撕不能削，因为削的表皮往往太厚。
（3）当细胞失去水分时，其原生质层的伸缩性大于细胞壁的伸缩性；动物细胞不会发生质