实验四 双缩脲法测定蛋白质浓度
[实验原理]
具有两个或两个以上肽键的化合物皆有双缩脲反应，在碱性溶液中蛋白质与铜离子形成紫色配合物，在540nm处有最大吸收。在一定浓度的范围内，蛋白质和浓度与双缩脲反应所呈的颜色深浅成正比，可用比色法定量测定。
[实验仪器及用品]
实验器材：容量瓶、试管、吸管、722型（或7220型）分光光度计。 实验试剂：双缩脲试剂；卵清蛋白质溶液；未知液 [实验内容及步骤] 一、标准曲线的绘制
将6只10ml容量瓶编号，按下表加入试剂，即得6种不同浓度的蛋白质溶液。 瓶号 1 2 3 4 5 6 2mg/ml卵清蛋白液体积 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 蒸馏水 稀释至刻度 稀释至刻度 稀释至刻度 稀释至刻度 稀释至刻度 稀释至刻度 蛋白质浓度/（mg/ml） 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 取干净试管7只，按0、1、2、3、4、5、6编号，1-6号管分别加入上述不同浓度的蛋白质液3.0ml。0号为对照管，加入3.0ml蒸馏水。各管加入双缩脲试剂2.0ml，充分混匀，即有紫色出现，用540nm光测定各管吸光度，绘制浓度-吸光度曲线。
二、样液的测定
取未知浓度的蛋白质溶液3.0ml臵试管内，加入双缩脲试剂2.0ml，混匀，测其540nm吸光度。
三、数据记录和处理
根据标准溶液的吸光度，在坐标纸上绘制出浓度-吸光度曲线，测出位知液的吸光度后，在标准曲线上查出未知液的浓度。
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实验五 酵母核糖核酸的分离及组分鉴定 一、目的
了解核酸的组分，并掌握鉴定核酸组分的方法。 二、原理
酵母核酸中RNA含量较多。RNA可溶于碱性溶液，在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀，由此即得到RNA的粗制品。
核糖核酸含有核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸各组分。加硫酸煮沸可使其水解，从水解液中可以测出上述组分的存在。 三、器材
1．乳钵 2．150mL锥形瓶 3．水浴 4．量筒 5．布氏漏斗及抽滤瓶 6．吸管 7．滴管 8．试管及试管架 9．烧杯 10．离心机 11．漏斗 四、试剂和材料
1．0．04 mol／L氢氧化钠溶液 1000 mL 2．酸性乙醇溶液 500mL 将0．3毫升浓盐酸加入30毫升乙醇中。 3．95％乙醇 1000mL 4．乙醚 500 mL 5．1．5 mol／L硫酸溶液 200mL 6．浓氨水 50 mL 7．0．1 mol／L硝酸银溶液 50mL 8．氯化铁浓盐酸溶液 80mL
将2mLl0％三氯化铁溶液(用FeCl3?6H2O配制)加入到400mL浓盐酸中。 9．苔黑酚乙醇溶液 10 mL
溶解6g苔黑酚于100mL 95％乙醇中(可在冰箱中保存1个月)。 10．定磷试剂 50mL
（1）17％硫酸溶液 将17 mL浓硫酸(比重1．84)缓缓加入到83mL水中。 （2）2．5％钼酸铵溶液 将2．5g钼酸铵溶于100mL水中。
（3）10％抗坏血酸溶液 10 g抗坏血酸溶于100 mL水中，贮棕色瓶保存。溶液呈淡黄色时可用，如呈深黄或棕色则失效，需纯化抗坏血酸。 临用时将上述3种溶液与水按如下比例混合。
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17％硫酸溶液:2.5％钼酸铵溶液:10％抗坏血酸溶液:水=1:1:1:2(V／V)。 11．酵母粉 200 g 五、操作
将15g酵母悬浮于90 mL 0.04 mol/L氢氧化钠溶液中，并在乳钵中研磨均匀。将悬浮液转移至150毫升锥形瓶中。在沸水浴上加热30分钟后，冷却。离心(3 000r/min)15分钟，将上清液缓缓倾人30 mL酸性乙醇溶液中。注意要一边搅拌一边缓缓倾人。待核糖核酸沉淀完全后，离心(3000r/min)3分钟。弃去清液。用95％乙醇洗涤沉淀两次，乙醚洗涤沉淀一次后，再用乙醚将沉淀转移至布氏漏斗中抽滤。沉淀可在空气中干燥。
取200ng提取的核酸，加入1.5 mol/L硫酸溶液10mL，在沸水浴中加热10分钟制成水解液并进行组分的鉴定。
1．嘌呤碱 取水解液1 mL加入过量浓氨水，然后加入约1 mL 0.1 mol/L硝酸银溶液，观察有无嘌呤碱的银化合物沉淀。
2．核糖 取1支试管加人水解液1 mL、三氯化铁浓盐酸溶液2mL和苔黑酚乙醇溶液0．2 mL。放沸水浴中10分钟。注意溶液是否变成绿色，说明核糖的存在。 3．磷酸 取1支试管，加入水解液1 mL和定磷试剂I mL。在水浴中加热，观察溶液是否变成蓝色，说明磷酸是否存在。
思 考 题
1．如何得到高产量RNA的粗制品? 2．本实验RNA组分是什么?怎样验证的?
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实验六 酶的活化、抑制及专一性
一．目的：
1、巩固活化剂和抑制剂对酶活性的影响 2、加深对酶的专一性认识 二．内容：
（一）淀粉酶的活化和抑制
1、 原理：酶的活性受活化剂和抑制剂的影响，氯离子为唾液淀粉酶的活化剂，铜离子为该酶的抑制剂。
2、 器材：恒温水浴，试管及试管架，
3、 试剂和材料：（1）0.2%淀粉溶液（2）1%氯化钠溶液 （3）1%硫酸铜溶液（4）1%硫酸钠溶液 4、 操作： 管号 1 2 3 0.2%淀粉溶液（ml） 1.5 1.5 1.5 稀释唾液（ml） 0.5 0.5 0.5 1%硫酸铜溶液（ml） 0.5 1%氯化钠溶液（ml） 0.5 1%硫酸钠溶液（ml） 0.5 蒸馏水（ml） 37℃恒温水浴保温10分 KI-I2溶液（d） 2~3d 现象
（二）、酶的专一性
1、 原理：酶具有高度的专一性。本实验以唾液淀粉酶和蔗糖酶对淀粉和蔗糖的作用为例，来说明酶的专一性。
蔗糖和淀粉无还原性，但它们的水解产物是有还原性的，用Benedict试剂检查糖的还原性。
2、 器材：恒温水浴，试管及试管架、沸水浴 3、 试剂和材料：（1）1%淀粉溶液（2）2%蔗糖溶液 （3）蔗糖酶溶液（4）Benedict试剂 4、 操作：
（1）淀粉酶的专一性 管号 1
4 1.5 0.5 0.5 2 4
3 4 5 6 1%淀粉溶液(d) 2%蔗糖溶液(d) 稀释唾液（ml） 煮沸唾液（ml） 蒸馏水（ml） Benedict试剂(ml) 现象
4 4 4 1 1 1 37℃恒温水浴保温15分 1 1 1 沸水浴2min 4 1 1 4 1 1 4 1 1 （2）蔗糖酶的专一性 管号 1 1%淀粉溶液（ml） 4 2%蔗糖溶液（ml） 蔗糖酶溶液（ml） 煮沸蔗糖酶液（ml） 蒸馏水（ml） 1 Benedict试剂(ml) 现象
2 3 4 4 1 1 37恒温水浴5分 1 1 1 沸水浴2~3min 4 4 1 1 5 4 1 1 6 4 1 1 5、 注意事项： 当有一支试管的颜色发生变化时，立即取出所有试管. 三、作业：
1、解释酶的活化和抑制中Na2SO4的作用 2、记录实验现象，分析实验结果，写出实验结论
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