生物化学实验讲稿(4)

2019-03-21 19:32

相当的丙酮毫克数。

试剂和器材

一、

试剂

(1)动物:家兔、大白鼠等。肝糜必须新鲜,放臵久则失去氧化脂肪酸能力。

(2)Locke氏溶液:取 0.9克氯化钠、0.042克氯化钾、0.024克氯化钙、 0.015克碳酸氢钠及0.1克葡萄糖,溶于水中,稀释到100毫升。

(3)0.1N碘溶液:称取12.7克碘和约25克碘化钾,溶于水中,稀释到1000毫升,混匀,用标准硫代硫酸钠溶液标定。 (4)PH7.6,1/15的磷酸缓冲液。

(5)0.2N丁酸溶液:取18毫升正丁酸,用1N氢氧化钠溶液中和PH=7.6,并稀释至1000毫升。

(6)15%三氯乙酸溶液。 (7)10%氢氧化钠溶液。 (8)10%盐酸溶液 〔9〕0.1N硫代硫酸钠溶液 二、器材

(1)玻璃皿 (2)锥形瓶(50毫升) (3)试管及试管架 (4)吸量管(2、5毫升) (5)漏斗 (6)微量滴定管(5毫升) (7)剪刀及镊子 (8)小台称。 (9)恒温水浴 思考题

1.为什么说做好本实验的关键是制备新鲜的肝糜?

2.什么叫做酮体?为什么正常代谢时产生的酮体量很少?在什么情况下血中酮体含量增高,而尿中也能出现酮体?

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实验十二 过氧化氢酶和过氧化物酶的定性反应

主要内容

掌握过氧化氢酶和过氧化物酶催化反应的特点,学习酶定性反应的操作。 (一)原理:过氧化氢酶能催化过氧化氢分解,产生水及分子氧。过氧化物酶能催化过氧化氢分解释放出新生态氧以氧化某些酚类物质和胺类物质,例如氧化溶于水中的焦性没食子酸生成不溶于水的焦性没食子橙(橙红色);氧化愈创木脂中的愈创木酸成为蓝色的愈创木酸的臭氧化物。 (二)操作: 原料:

切碎猪肝(2g),制成新鲜猪肝糜。 取1g新鲜猪肝糜加适量水煮沸,将水倒去。 切碎新鲜白菜叶(2g),越细越好。

白菜梗提取液:白菜梗约5g,切成细块至研钵中,加蒸馏水15ml,经白纱布过滤,滤液备用。

每人一组进行实验。按讲义设计的表格进行操作。注意观察现象。

表1 过氧化氢酶的作用

管号 1 2 3 4 2%H2O2/ml 3 3 3 3 新鲜肝糜/g 0.5 --- --- --- 煮沸肝糜/g --- 0.5 --- --- 生马铃薯/g --- --- 1 --- 熟马铃薯/g --- --- --- 1 观察有无气泡放出,特别注意肝糜周围和马铃薯周围。

表2 过氧化物酶的作用

白菜梗提取管号 1 2 3 4 焦性没食子酸 2 2 2 2 2%H2O2/滴 2 --- 2 2 蒸馏水/ml 2 --- --- --- 液/ml --- 2 2 --- 煮沸的白菜梗提取液/ml --- --- --- 2 观察颜色变化和沉淀的出现。

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