【试剂及配制】 1．0.5× TBE 先配5× TBE贮存液，然后用三蒸水稀释10倍； 5× TBE配制：1000ml Tris 碱 54g 硼酸 27.5g
0.5mol EDTA pH8.0 2ml 2．EB ：10mg/ml 3．琼脂糖 4．上样缓冲液 0.25% 溴酚蓝
0.25% 二甲苯青FF 30%甘油
【操作方法】
1．用胶带纸封住洗净、晾干的电泳胶盒两端，放好梳齿，水平放置于工作台上； 2．0.5× TBE + 琼脂糖 （1%），电炉上融化，勿暴沸，待其冷却至50～60℃ 时，加入EB约5μl ，充分混匀；
3．将凝胶倒入胶模，厚约3～5mm，避免产生气泡；
4．在室温中放置30～45min，撕去胶带纸，放入电泳槽，电泳槽内为0.5× TBE，应没过凝胶，去除梳齿，预电泳10min；
5．将DNA样品与上样缓冲液混合，加进上样孔内，应设一marker作对照； 6．60～100V恒压电泳，使DNA向阳极移动（黑线为负极，红线为正极）；
7．电泳完成后，戴塑料手套，取出胶盒，将凝胶放紫外灯下观察有无切出的电泳带。
大量培养转化的细菌
小量酶切鉴定证实细菌内含有目的基因，即可大量培养。
【操作方法】
在500ml灭菌处理过的培养瓶中加LB培养基200ml，加入50mg/ml的氨苄贮存液200μl ，将小量培养的菌液取2ml加入瓶中，37℃ 200～300r/min，振摇培养6～10h，可过夜。
大量提取质粒
常用碱裂解法。
【试剂及配制】 1.溶液Ⅰ 2.溶液Ⅱ 3.溶液Ⅲ 4.异丙醇
5.3mol NaAc pH5.2 6.平衡酚 pH8.0
7.氯仿：乙戊醇 （24：1） 8.无水乙醇 9.70%乙醇 10.TE pH8.0
11.RNase A (10mg/ml) 12.溶菌酶
取100mg 溶菌酶，用2ml三蒸水溶解，分装成200μl /管，贮存于-20℃ 备用
【操作方法】
1．扩增好的菌液装入50ml离心管中，置冰浴10min； 2．4℃离心，5000× 10 min；
3．将沉底的细菌收集到一只50ml离心管中，再离心，弃上清，将离心管倒置滤纸上1 min，控干残液；
4．加入6ml冰预冷的溶液Ⅰ ，200μl 溶菌酶，充分振摇混匀； 5．加溶液Ⅱ10ml，缓慢振摇以充分混匀内容物，室温放置10min；
6．加入8ml冰预冷的溶液Ⅲ ，小心摇动离心管以混匀内容物，置冰酒精浴10min； 7．4℃离心，10000g × 10min；
8．小心倒出上清，弃沉淀，如有沉淀，再次离心；
9．加入0.6体积异丙醇，充分混匀，-20℃ 放置20min； 10．4℃离心，10000g × 10min；
11．弃上清，晾干，2ml TE pH8.0 溶解沉淀； 12．加入2ml冰预冷的5mol LiCl 溶液并混匀； 13．4℃离心，10000g × 10min；
14．将上清转移至另一离心管，加入0.6体积异丙醇，充分混匀，-20℃ 放置20min； 15．4℃离心，10000g × 10min；
16．弃上清，70%乙醇洗一次，4℃离心，10000g × 10min，弃上清，晾干； 17．将沉淀溶于1.2ml TE pH8.0中；
18．加RNase A 30μl ，封管口，37℃ 水浴30min； 19．将样品分装2个EP管，各加等体积平衡酚，混合； 20．室温离心，5000g× 5min；
21．将上层水相转移至另一EP管，小心勿吸出酚相；
22．重复平衡酚抽提；
23．等体积氯仿：异戊醇（24：1）抽提； 24．室温离心，5000g× 5min； 25．回收上层水相，勿吸出氯仿； 26．加1/10体积3mol NaAC (pH5.2)，再加2.5体积无水乙醇，充分混匀，置-20℃ 30min或液氮10min；
27．室温离心，12000g× 15min；
28．弃上清，70%乙醇洗一次，再离心；
29．晾干，溶于500μl TE pH8.0，-20℃ 保存；
30．取2 μl 稀释至200μl ，用紫外分光光度计测260nm、280nm OD值，OD260/OD280=1.7～2.0，如小于1.7，蛋白未提净，大于2.0，有机溶剂多。DNA含量为OD260× 50 （μg /ml）。
大量酶切质粒
【操作方法】
1．在新的灭菌EP管中依次加入： 三蒸水 70μl 10× 缓冲液 10μl 限制酶 5μl
质粒DNA（2μg /μl） 15μl 稍离心以混匀；
2．37℃ 水浴1.5～2h；
3．取5μl 电泳鉴定酶解效果，如不完全，可延长时间或加限制酶；
4．双酶解反应：如两种酶可用同一缓冲液，则可同时加入一个体系，稍增加反应体积，否则以乙醇沉淀，晾干，重建第二个反应体系。
电泳分离、回收及纯化DNA片段
电泳的方法如前述，不同点在于：① 使用低熔点琼脂糖，在4℃ 冰箱中电泳；② 将2～3个梳齿用透明胶布粘在一起，以增加上样量。
从低熔点琼脂糖中回收及纯化DNA：
【操作方法】
1．在紫外灯下将含有所需DNA片段的凝胶条切下，放入EP管中，加入2倍体积的TE缓冲液，在70℃ 保温10min，使凝胶条融化；
2．冷却至室温，加等体积平衡酚，充分混匀后以6000g离心10min，回收水相，注意不要将界面处的白色物质（即粉状的琼脂糖）吸出，再用等体积的氯仿/乙戊醇抽提一次；
3．将上清液转移到一个新的离心管中，加入0.2体积的10mol的乙酸胺和2倍体积的无水乙醇，置-20℃ 冰箱20min，离心沉淀核酸，晾干后以TE 溶解。取2μl 稀释至200μl 测DNA浓度。 标记探针
使用Boehringer Mannheim 地高辛标记探针试剂盒。
【操作方法】
1．1μl 模板DNA加灭菌三蒸水至最终体积为16μl ； 2．10min沸水浴，立即冰乙醇冷轧；
3．加入4μl 探针标记液（试剂盒中vial 1），稍微离心，混匀； 4．37℃ 水浴20h；
5．加入2μl 0.2mol EDTA pH8.0 或加热65℃ 10min以终止反应。
石蜡切片的处理
【试剂及配制】 1．二甲苯
2．乙醇（100%，95%，90%，75%） 3．甲醇
4．0.2mol HCl
5．0.1% Triton X-100 6．0.2%甘氨酸PBS 7．5mmol MgCl2-PBS 8．PBS
配制：配成10× 的贮存液，用时稀释10倍 NaCl 80g 137mmol KCl 2g 2.7mmol Na2HPO4·7H2O 11.5g 4.3mmol KH2PO4 2g 1.4mmol
配成1000ml，pH7.3，高压灭菌。 9．蛋白酶K
0.1mol Tris-Cl pH8.0 加 50mmol EDTA pH8.0 配制浓度为1μg/ml。
10．4%多聚甲醛 在通风橱中配制：称40g多聚甲醛溶于装有500ml DEPC 水的烧瓶中，加热65℃ 并磁力搅拌，使成乳白色悬液，用1mol NaOH 调节 pH7.0，呈清亮状，再加入约450ml 的2× PBS，充分混匀，再检查pH，过滤后定容至1000ml，4℃ 保存。
【操作方法】
1．将烤好的切片入二甲苯Ⅰ 30min，二甲苯Ⅱ 、Ⅲ 各10min；
2．逐级酒精入水（100%、95%、90%、75%）各5min，甲醇冲洗5min× 2； 3．用三蒸水或PBS快速洗2次；
4．0.2mol HCl 室温作用10min， 0.1% Triton X-100 作用15min； 5．0.2%甘氨酸-PBS室温孵育15min； 6．蛋白酶K37℃ 消化15～30min； 7．0.2%甘氨酸-PBS室温孵育15min； 8．PBS-5mmol MgCl2洗2次，各10min； 9．4%多聚甲醛室温下固定15min；
10．PBS-5mmol MgCl2洗2次，各10min； 11．逐级酒精脱水，37℃烤干保存。
预杂交、杂交
【试剂及配制】 1．2× SSC 先配制20× SSC贮存液，用时稀释。 NaCl 175g 3mol
枸椽酸三钠·2H2O 88g 0.3mol
三蒸水加至1000ml，用1mol HCl 调pH7.0 2．4× SSC/50%去离子甲酰胺（V/V） 去离子甲酰胺的配制：500ml 甲酰胺与25g Bio-Rad AG 501-X8(20～50目) 混合，室温避光搅拌4h，过滤，分装为50ml ，-20℃ 存放； 3．100× Denhardt液 聚蔗糖 10g
聚乙烯吡咯烷酮 10g 牛血清白蛋白 10g
消毒三蒸水定容至100ml 4．预杂交液
去离子甲酰胺 5ml 20× SSC 2.5ml
加温至50℃ ，加入硫酸葡聚糖 1g