聚合物溶解后，加入100× Denhardt 500μl 10%SDS 500μl
10mg/ml变性鲱鱼精子DNA 100μl 消毒三蒸水 400μl 充分混合； 5．杂交液
将标记好的探针用沸水浴10min，立即冰酒精冷轧，用预杂交液将探针稀释至0.5～5ng/μl 。
【操作方法】 1．用2× SSC 简洗15min； 2．4× SSC/50%去离子甲酰胺37℃ 孵育15min；
3．每片加预杂交液50μl ，放入湿盒，42℃ 孵育2h；
4．去除预杂交液，每片加杂交液50μl ，放湿盒中，42℃ 杂交12～18h，不能超过24h。
杂交后处理
【试剂及配制】 1．2× SSC 2．2× SSC/50%去离子甲酰胺 3．1× SSC/50%去离子甲酰胺 4．PBS 5．4× SSC/10mmol DTT
先配制1mol DTT：通风橱中称3.1g DTT，溶于20ml消毒三蒸水中，用时取2ml 加入198ml 4× SSC
【操作方法】
1．杂交完毕后，用2× SSC洗涤1～2min； 2．2× SSC/50%去离子甲酰胺42℃ 10min； 3．1× SSC/50%去离子甲酰胺 37℃ 30min； 4．4× SSC/10mmol DTT 1h； 5．0.1× SSC 40℃ 2× 30min；
6．PBS洗10min，然后置于PBS中，直到进行下一步。
抗体连接、显色
【试剂及配制】 1．缓冲液Ⅰ
配1000ml,需加入 顺丁烯二酸 11.6g NaCl 8.8g
用10mol NaOH 将pH调至7.5，高压消毒； 2．缓冲液Ⅱ
先制备阻断剂储存液：取试剂盒中阻断剂按10%（V/V）加入溶液Ⅰ ，混匀，用微波炉加热使其完全溶解，高压消毒后4℃ 或-20℃ 保存。用时取上述10%阻断剂储存液用缓冲液Ⅰ 按1：10稀释即制成缓冲液Ⅱ ； 3．缓冲液Ⅲ pH9.5 配制1000ml：
Tris-Cl 12.1g 100mmol NaOH 5.84g 100mmol MgCl2 10.2g 50mmol 4．缓冲液Ⅳ pH8.0 Tris-Cl (pH8.0) 10mmol EDTA (pH8.0) 1mmol
【操作方法】 1．2× SSC洗涤，2× 5min，40℃ ； 2．0.1× SSC，2× 30min，40℃ ； 3．缓冲液Ⅰ 洗，室温2min，振摇； 4．缓冲液Ⅱ 洗，室温30min，振摇；
5．擦去组织周围缓冲液，加抗地高辛抗体（vial 4，1：500～5000，用缓冲液Ⅱ 稀释），室温下于湿盒内2h； 6．缓冲液Ⅰ 室温洗2× 15min； 7．缓冲液Ⅲ 室温洗3 min；
8．擦去组织周围缓冲液，加显色液（vial 5，200μl 用缓冲液Ⅱ 稀释至10ml ），放湿盒中，室温避光显色2h至过夜；
9．显微镜下检查，阳性颗粒显深蓝色，获满意结果后终止反应； 10．缓冲液Ⅰ 洗涤，室温5min； 11．缓冲液Ⅳ 洗涤，室温2min；
12．用中性红或核固红复染细胞核数秒，水冲洗，晾干后甘油封片。