酶标仪(4)

2019-03-22 19:26

3.0~4.0Abs范围内,测定精密度CV小于士0.2%。因此,对于酶标仪的吸光度范围不必去刻意追求大的吸光度范围,主要要看在一定的吸光度范围内的线性和精密度如何。 三、光学系统

酶标仪的光学系统采用的是垂直光路多通道(通常为8或12通道,亦有单通道)检测,一般为硅光管或光导纤维,除测定通道外,有的酶标仪还有一个参比通道,每次测定可进行自我校准。酶标仪的光学系统功能如何,均可通过酶标仪测定的吸光度范围、线性度、精密度和准确度等体现出来。光学系统好的话,则上述指标也应较佳。测定的精密度与测定通道之间的均一性有直接关系。单通道可避免因通道不同所致的差异。 四、检测速度

酶标仪的检测速度是指其完成比色测定所需要的时间。检测速度快,有利于提高检测的精密度,即避免由于测定过程中,因测定时间不同所致的各微孔间吸光度间的差异。目前市场上常见的酶标仪检测速度都非常快,通常在数秒钟内,如Labsystems公司Dragon Wellscan MK-2和MK—3检测96孔只需2s(连续模式)或5s(步进模式)。Multiskan Ascent为单通道检测,亦只需9s(连续模式)或14s(步进模式)。又如BioRad公司的Benchmark的检测速度单波长为7s,双波长为15s。 五、震板功能

酶标仪的震板功能是指酶标仪在对ELISA板孔进行比色测定前对其进行振荡混匀,使板孔内颜色均一。目前市场上常见的酶标仪均有震板功能,所不同的是震板方式,有的可按上下、左右或旋转等方式及振荡幅度等任意调节,如Labsystems的MK-2;有的则较为固定,如BioRad 550。使用有震板功能的酶标仪,在进行ELISA测定显色反应完成加入终止剂后,可不必振荡混匀,直接放人酶标仪上测定即可。 六、温育功能

温育功能是指酶标仪本身能按要求自动精确地控制仪器内部的温度,使得ELISA测定中微孔板条的温育过程可在仪器内部完成,而无需再外配温箱。目前,只有少部分酶标仪具有此种功能,如Labsystems公司的Multiskan Ascent,BioRad公司的Benchmark和Biotek公司的ElxS08等。温育功能只是酶标仪的一个附加功能,是否具有并不能说明酶标仪档次的高低及仪器的优劣。作为实验室是否选择,则可根据自己实验室的条件及需要来决定。 七、软件功能

软件功能是指酶标仪所具有的对ELISA定性和定量测定及其他测定方式如酶标动力学、紫外和凝集等数据的统计分析并报告结果的功能。软件功能是中高档酶标仪的一个非常重要的功能。如果硬件方面区别不大,则软件就成为判定酶标仪优劣的惟一指标。对于用户来说,好的软件功能,对实际工作会有较大的帮助。ELISA定性测定,酶标仪如具有阳性判断值(cut-off)及其测定“灰区”(即指测定吸光度处于cut—off周围的一定区域,此区域内结果应为“可疑”)的统计计算功能,不但方便了实验室工作人员,而且在某些特定的情况下,有很高的实用价值。如血站实验室为筛检献血员血进行HBsAg、抗HCV和抗HIV等的ELISA测定时,常会遇到测定吸光度处于cut-off附近但又低于cut—off的血,按照试剂盒的标准,可判为阴性,血为合格血,可用于患者输血,但直觉告诉我们,这样的血如输给患者,导致输血后相应疾病发生的可能性较大,这是由ELISA现有的测定技术的不确定性所造成的,也就是ELISA测定的“灰区”的存在使得ELISA测定试剂盒cut-off的设定只是相对的准确,此时的假阳性和假阴性出现的可能性较低。因此,在血站筛检献血员血时,如以测定“灰区”的下限作为判断献血员血筛检不合格标准,就可以避免因“灰区”所致结果判断错误而引起输血后疾病发生的可能性。合适的软件功能对于ELISA定量测定同样很重要。有研究表明,四参数方程能较好地反映免疫测定的剂量反应曲线,最为适合于定量酶免疫测定的曲线拟合。因此,如目的是定量测定,则在酶标仪的软件功能中,最好要有这种曲线回归

方程计算分析功能。其他诸如连点、直线等回归计算,则可根据酶标仪的应用目的而定,如兼用于微量生化测定,则此类回归计算就很有必要。

此外,酶标仪兼做酶标动力学、凝集反应测定所需的软件是否应具备,当然也应根据使用目的而定。由于此类软件一般都较为昂贵,酶标仪常另外单独按需配备,如果不是实验室特殊需要,就不必强求这种软件功能。 八、语言界面

通常进口的中高档酶标仪人机对话多采用英文。这对于某些基层实验室可能会存在语言方面的困难,从而难以最大限度地发挥酶标仪的作用。为解决这方面的问题,已有一些酶标仪采用了中文界面,如Labsystems的MK-3。这样就大大方便了广大基层实验室技术人员的使用。

综上所述,尽管酶标仪的发展极为快速,种类繁多,功能也不断加强,但其最根本的功用是不变的,即比色测定。大凡比色测定,其基本要求就是在一定吸光度范围内要有好的测定准确性、线性和精密性。同样的吸光度范围,测定的准确性、线性和精密性越好则酶标仪亦越佳。

而且,由于用于酶标仪比色测定的为多孔(通常为96孔)微孑L板条,为保证测定的孔间重复性,则测定速度也是一个较重要的性能指标。至于其他如震板、温育及有关的软件功能,则可根据各自实验室的需要去比较选择。

【资料】酶标仪的使用注意事项 1、工作环境

酶标仪是一种精密的光学仪器,因此良好的工作环境不仅能确保其准确性和稳定性,还能够延长其使用寿命。根据DIN VDE 0871条例,仪器应放置在无磁场和干扰电压的位置。依据DIN 45 635 -19条例:

仪器应放置在低于40分贝的环境下。 为延缓光学部件的老化,应避免阳光直射。

操作时环境温度应在15℃-40℃之间,环境湿度在15%-85%之间。 操作电压应保持稳定。

操作环境空气清洁,避免水汽,烟尘。

保持干燥、干净、水平的工作台面,以及足够的操作空间。 2、操作注意事项

酶标仪的功能是用来读取酶联免疫试剂盒的反应结果,因此要得到准确结果,试剂盒的使用必须规范。许多医院在使用酶标仪之前是通过目测判断结果,操作过程随意性较大,在使用酶标仪后如果不能及时纠正操作习惯,会造成较大误差。在酶标仪的操作中应注意以下事项: 使用加液器加液,加液头不能混用。

洗板要洗干净。如果条件允许,使用洗板机洗板,避免交叉污染。 严格按照试剂盒的说明书操作,反应时间准确。

在测量过程中,请勿碰酶标板,以防酶标板传送时挤伤操作人员的手。 请勿将样品或试剂洒到仪器表面或内部,操作完成后请洗手。 如果使用的样品或试剂具有污染性、毒性和生物学危害,请严格按照试 剂盒的操作说明,以防对操作人员造成损害。

如果仪器接触过污染性或传染性物品,请进行清洗和消毒。 不要在测量过程中关闭电源。

对于因试剂盒问题造成的测量结果的偏差,应根据实际情况及时修改参数,以达到最佳效果。 使用后盖好防尘罩。

出现技术故障时应及时与厂家联系,切勿擅自拆卸酶标仪。


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