5.【适用仪器】
明确配套适用荧光显微镜的配置要求，至少包括对目镜与物镜的放大倍率、光源及滤光片要求。对显微镜配套耗材（如镜油）的要求进行介绍。
6.【样本要求】 重点明确以下内容：
6.1对适用样本的取材、固定、包埋与切片的具体要求。此部分内容可参考国际或国内相关标准操作性文件内容进行编写或引用。注意不同组织类型的样本应分别描述。
6.2样本的稳定性（包括蜡块与切片）。 7.【检测方法】
详细说明操作的各个步骤：
7.1明确检测需要的仪器与设备。如烤片机、恒温箱、水浴锅、染色缸、杂交盒等。注明货号及生产商（如需要）。
7.2试剂配制方法、注意事项，试剂开封、配制后使用方法及注意事项等。
7.3对于手工或半自动检测，详述脱蜡、煮片、消化、固定、核酸变性、杂交、洗涤和复染等各操作步骤。描述应尽量细化，需明确各步骤处理时间、温度、注意事项（如避光）等内容。
7.4对杂交后载玻片的储存及稳定性、复染后的储存及稳定性进行说明。
7.5详细说明质量控制情况：
建议实验室每次检测设置内对照和外对照（质控片），以对整体操作流程进行质量控制。评价指标应包括细胞结构的完整性，探针杂交信号的强度和位点的准确性，背景荧光强度，可计
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数信号（单色/双色）的细胞占全部细胞的比例等。
7.5.1内对照可为癌旁正常组织，明确样本检测的内对照使用原则，如“75%以上的肿瘤细胞核中都有杂交信号时，视为检测成功。”
7.5.2外对照可选择已知HER2基因扩增状态的组织切片或者细胞株，至少包括临界值以及无扩增样本。明确每一批次患者样本检测和更换使用新的试剂盒批次时，均应同时进行质控片检测，以监控检测性能并评估信号计数的准确性。分析质控结果不符合要求的原因并详述处理方式。
如试剂盒内不包含质控片，应明确配套使用的质控片信息，可以为商用质控片也可以为临床检测实验室自制质控片。自制质控片应为已知FISH结果的阴性和阳性质控片，详述质控片的制备方法。明确质控结果要求（试验有效性的判断），结果允许范围（如适用于不同的仪器或适用于手工与仪器方法，应分别列明结果的允许范围）。
7.6建议强调实验室检测相关的仪器设备需定期维护、校验，应建立完善的标准操作规范文件，从事检测的技术人员和病理医师应通过必要的培训和资格考核，做好记录和存档，内部定期对不同批次检测结果进行重复性分析；并积极参加相关的外部质控活动。
8.【阳性判断值】
根据相关指南及规范性文件，以HER2拷贝数平均值/细胞和/或HER2总拷贝数与CEP17总拷贝数的比值（双信号）的形式明确阳性判断值。
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9.【检验结果的解释】
9.1从细胞核形态、探针信号强度、背景情况等多方面，详述杂交后样本玻片的有效性评估标准。建议对不符合有效性评估标准情况发生时的常见问题及解决方法以列表的形式明确。
9.2明确目标区域的确定方法及仅对肿瘤细胞进行计数的要求；明确细胞计数的具体方法，包括每个样本初始读取细胞数及结果不确定样本的处理方法。明确HER2扩增异质性的处理方法。
可以列表的形式详述信号计数与阴阳性判定规则，应配合清晰彩图图例。例如对于浸润性乳腺癌，描述为“找到至少2个浸润癌区域，随机计数至少20个浸润癌细胞核中的双色信号，计算信号比值（比值=计数细胞核中红色信号总数/计数细胞核中绿色信号总数），根据以下标准对样本进行HER2基因扩增阴阳性的判断：比值≥2.0，或者比值<2.0且平均HER2拷贝数/CEP17拷贝数≥6.0时为阳性；扩增细胞应均质、连续，且占浸润癌的10％以上。比值<2.0且平均HER2拷贝数/细胞<4.0时为阴性。HER2/CEPl7比值<2.0且平均HER2拷贝数/细胞<6.0，但≥4.0时为不确定。对于不确定的样本，需再计算20个细胞核中的信号，或由另一阅片人重新计数。”
10.【检验方法的局限性】
综合产品的预期用途、临床背景、检测方法及适用范围等信息，对可能出现的局限性进行相关说明，主要包括以下描述，请申请人选择适用的条款在产品说明书中予以阐述。
10.1本试剂盒为体外诊断试剂，检测结果的临床判定均应结合患者医疗病史和其他临床诊断结果进行综合评估，不得作为临
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床诊治的唯一依据。
10.2肿瘤组织HER2基因表达的异质性可能影响检测结果。例如可导致IHC与ISH检测、原发灶与转移灶、活检标本与手术切除标本的检测结果不一致。异质性在胃癌中更常见。对于胃镜活检标本，多点活检有助于减少肿瘤异质性的影响，提高检测的准确性。另外，新辅助治疗会影响胃癌HER2状态，治疗前活检标本和治疗后手术标本的综合判断有助于更好的用药指导。
10.3本试剂盒检测结果受样本来源、样本采集过程、样本质量、样本运输条件、样本预处理等因素影响。同时由于结果判断的主观性，可能导致得出假阳性或假阴性的检测结果，使用者应了解检测过程中可能存在的潜在错误导致结果不准确等局限性。
10.4检测结果如与组织病理学特征不符，应核实病理诊断或重新检测。
10.5本产品的性能指标是基于说明书所述检测程序获得，对该程序进行更改，可能会改变该检验的结果。
10.6本试剂仅对经10%中性缓冲福尔马林固定石蜡包埋的组织进行了验证（如适用），不得用于其他样本类型或流式细胞检测等其他用途。
11.【产品性能指标】
根据分析性能评估研究结果，详述以下性能指标，包括研究方法和评估结果：
11.1灵敏度：在乳腺浸润癌/胃癌病例的组织样本，以及癌旁正常组织或者良性疾病组织样本中探针与目标基因位点的结合效率。
11.2特异性：HER2和CEP17探针对目标序列识别的特异性。
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11.3阴、阳性符合率：在不同组织类型中HER2基因的检出能力和准确性。
11.4精密度：批内、批间精密度及不同时间、地点、检测系统（如适用）、人员之间的精密度。
11.5临床试验数据总结。 12.【注意事项】
12.1有关试剂盒内人源组分（如有）生物安全性的警告。 12.2有关实验操作中涉及试剂的安全性提示，包括对有毒有害物质的防护及危险物品的处理方法等。
12.3荧光染料在光照条件下容易淬灭。为降低该影响，对所有含荧光探针的溶液，包括杂交后样本载玻片均应尽量避免或者减少在光照条件下保存和处理。
12.4使用校准过的温度计测定溶液、水浴槽和温箱温度。 三、编写单位
国家食品药品监督管理总局医疗器械技术审评中心。
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