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气体：气体也是细胞生存的必需条件之一。所需的气体主要有O2和CO2。O2参与三羧酸循环产生能量供给细胞生长、增殖和合成各种成分。CO2既是细胞代谢产物也是细胞所需成分。它主要与维持培养液pH值有直接关系。
pH值：多数细胞的适宜pH值为7.0-7.4，偏离此范围对细胞可产生有害的影响。培养液中的缓冲体系主要是碳酸氢盐/ CO2。细胞代谢产生的各种酸使pH下降，而培养液中的NaHCO3产生CO2排入空间又使pH增加。
培养器皿的处理：培养器皿处理的好坏与否对于细胞的贴壁生长影响很大。它们只有贴附于不起化学作用的物体的表面时，才能生长、生存或维持功能。目前，常用的器皿主要有玻璃及塑料二大类。玻璃器皿一般须用清洁液浸泡1至7天，清水冲洗20次后再用蒸馏水过洗2次，烤干备用。用前160℃高温消毒2小时后使用。96孔或24孔塑料板一般用2%NaOH浸泡4小时后，清水洗净再用1N HCL浸泡4小时，用清水冲洗后再用蒸馏水漂洗，37℃干燥后，紫外线灯照射消毒；新橡皮塞须先用1/2NnaOH煮沸15分钟，冲洗后再用4%HCL煮沸15分钟，清水冲洗后用蒸馏水洗5次，煮沸10分钟灭菌，或送高压灭菌。
总之，细胞在适当的培养条件下可迅速增殖，但若遇到不良环境细胞会变圆，停止生长，甚至死亡，这是细胞的保护机制。综上所述，细胞培养的基本条件主要包括了营养液、无菌条件、PH、温度、气体条件和培养器皿的清洁度。
培养液水质
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配制培养液前要制备纯净的水。
平衡盐溶液
组织培养中所用的各种平衡盐溶液主要有三个功效：作为稀释和灌注的液体，维持细胞渗透压;提供缓冲系统，是培养液的酸碱维持在培养细胞生理范围内;提供细胞正常代谢所需的水分和无机离子。
因此，平衡盐溶液的组成和含量应符合如下条件：要与培养物来源的动物血清相近似；呈溶液状态，利于物质的传递和扩散；是等渗的，否则会引起细胞的收缩（高渗透压）和膨胀（低渗透压）. 2.2.2无血清培养
无血清培养基(serum free medium,SFM):是不需要添加血清就可以维持细胞在体外较长时间生长繁殖的合成培养基。但是它们可能包含个别蛋白或大量蛋白组分。虽然基础培养基加少量血清所配制的完全培养基可以满足大部分细胞培养的要求，但对有些实验却不适合，如观察一种生长因子对某种细胞的作用，这时需要排除其他生长因子的干扰作用。而血清中可能含有各种生长因子；又如需要测定某种细胞在培养过程中分泌某种物质（抗体、生长因子）的能力；或者要大规模的培养某种细胞，以获得它们的分泌产物。
无血清培养基的基本配方:基本成分为基础培养基及添加组分两大部分。以ＤＭＥＭ基础培养基，并添加了维生素Ｃ、转铁蛋白、乙醇胺、羟基丁酸钠等成分。
无血清培养基的组成及其主要补充成分:激素和生长因子
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、结合蛋白、贴壁因子和扩展因子、低分子量营养因子、微量元素。
特别需要强调的是：配制无血清培养液必须使用高质量的水，如石英玻璃蒸馏器经三次蒸馏或超纯水净化装臵制备的水。因为无血清培养基缺乏了血清中天然成分中和毒素、保护细胞的大分子，既便水中的有毒物质含量甚微，也可能对细胞产生致死性损害。这是无血清培养能否成功的关键因素之一。
为了使细胞适应无血清培养，关键的是使所培养细胞： （1）处于对数生长中期 （2）>90% 活细胞率
（3）适应时以较高的起始细胞接种 3细胞培养方法与操作 3.1细胞培养方法
固定化培养方法
在动物细胞培养中，培养细胞的目的不仅仅要求催化活细胞培养中，培养细胞的目的不仅仅要求催化活力，更重要的是利用细胞来合成和分泌蛋白，因此如何保持细胞的活性显得尤为重要。由于动物细胞的极度敏感性，上述这些固定化方法会对动物细胞产生毒性，另外多糖(如卡拉胶等)由于具有很高的离子强度也会对细胞产生毒害。
微载体细胞培养法是一种用于培养锚地依赖性细胞的大规模培养技术。这种培养技术是在生物反应器内加入培养液和一种对细胞无毒害作用的材料支撑的颗粒(微载体)，使细胞在微载体表面附着和生长，并通
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过不断搅拌使微载体保持悬浮状态。培养液中大量的微载体为细胞提供了极大的附着表面，1 g 微载体其比表面积可达6000 cm2，从而可实现细胞的高密度培养。
微载体的直径在60~250 靘，由天然葡聚糖、凝胶或各种合成的聚合物组成，如聚苯乙烯、聚丙烯酰胺等。由这些材料及其改良型制成的微载体主要参考了细胞的粘附特性，在其表面带有大量电荷及其他生长基质物质，因而有利于细胞的粘附、铺展和增殖。 3.1.1微载体培养原理与操作
原理：其原理是将对细胞无害的颗粒-微载体加入到培养容器的培养液中，作为载体，使细胞在微载体表面附着生长，同时通过持续搅动使微载体始终保持悬浮状态。
细胞只有贴附在固体基质表面才能增殖，故细胞在微载体表面的贴附是进一步铺展和生长的关键。黏附主要是靠静电引力和范德华力。细胞能否在微载体表面黏附，要取决于细胞与微载体的接触概率和相融性。
搅拌转速：由于动物细胞无细胞壁，对剪切力敏感，因而无法靠提高搅拌转速来增加接触概率。通常的操作方式是：在贴壁期采用低搅拌转速，时搅时停；数小时后，待细胞附着于微载体表面时，维持设定的低转速，进入培养阶段。微载体培养的搅拌非常慢，最大速度75r/min。 3.1.2蛋白质作基质的微载体
明胶微载体，用明胶水溶液与疏水性有机液体如矿物油，明胶混合即聚结成微珠，继用戊二醛交联，最后用NaBH4还原，即得到淡黄色明胶
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微载体。这种微载体，具有优良的表面性质和光学性质，比重略大于水，基质是非刚性，无毒，能与多种细胞自然配位结合。特别是培养上皮形态细胞，如用其他基质微载体，收获细胞非常困难，但用明胶微载体时，用胶原酶消化细胞-微载体，明胶即完全溶解于消化液中，游离细胞悬浮在液体上层，收获很容易，且活细胞收率可达98%。所以，明胶微载体，是培养贴壁依赖细胞的一种优良微载体。Corning GlassWorks新近修饰了明胶基质，合成新的明胶微载体，培养后的细胞-微载体，用0.13%～0。2%胰蛋白酶或0.4%Dispase溶液消化12分钟，明胶珠即完全溶解。明胶微载体的缺点是能吸附或捕捉培养基中有效营养成分，特别是血清。 3.2操作步骤
3.2.1细胞的无血清驯化
取处于对数生长期的贴壁CHO细胞，活率大于95%，开始进行无血清驯化。细胞驯化在转瓶（spinner-bottle）中进行。将无血清细胞培养基和含血清培养基的按1：1（V/V）的比例进行混合，接种密度为2×105cells/ml的细胞，在37℃、5％CO2培养箱进行培养。
根据细胞生长和活率情况，在降血清的每一阶段可稳定传代1－3代，接种密度维持在2×105cells/ml。逐步提高无血清细胞培养基在混合液中的比例（V/V），即降低混合液中的血清含量，传代过程的细胞接种密度仍维持为2- 4×105cells/ml。直至混合液中的血清浓度降低至0.1-0.2%，每一代的细胞活率大于90％后，此时可将细胞完全培养在CHO无血清无动物组分培养基中。在CHO无血清无动物组分培养基中进行放大
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