106.限制性内切核酸酶在 DNA中的识别／切
割位点的二级／三级结构也影响酶切效率。一般来说，完全切割质粒或病毒 DNA，要比切割线状 DNA需要更多的酶，最高的需要20倍。
107.如果限制性内切核酸酶的识别位点位于
到的片段的两个末端都是相同的。
120.在限制与修饰系统中，修饰主要是甲基化
作用，一旦位点被甲基化了，其他的限制性酶就不能切割了‘
121.稀有酶是指那些识别序列很长又不常用的限制性内切核酸酶。 DNA分子的末端，那么接近末端的程度也 122.T4 DNA连接酶和E.coli连接酶都能催化
影响切割，如HpaⅡ和Mbo Ⅰ要求识别序列之前至少有一个碱基对存在才能切割。 108.能够产生防御病毒侵染的限制性内切核酸
酶的细菌，其本身的基因组中没有被该核酸酶识别的序列。
109．限制性图谱与限制性片段长度多态性
(RFLP)图谱的最显著的区别在于前者是一个物理图谱而后者是一个连锁图。 110．用限制性内切核酸酶Hpa Ⅲ分别切割载
体 DNA和供体 DNA后，可用E．coli DNA 连接酶进行连接。
111．已知某一内切核酸酶在一环状 DNA上有3
个切点，因此，用此酶切割该环状 DNA，可得到3个片段。
112.迄今所发现的限制性内切核酸酶既能作用于双链 DNA，又能作用于单链 DNA。 113．基因工程中使用的Ⅱ类限制性内切核酸酶
不仅有内切核酸酶的活性，而且有甲基化酶的活性。
114.DNA多态性就是限制性片段长度多态性。 115.用限制性内切核酸酶 Pst Ⅰ切割质粒
pBR322后，再用外切核酸酶Ｅ.coli Ⅲ进行系列缺失，可得到一系列大小不同的缺失突变体。
116.甘油会使许多限制性内切核酸酶的特异性
发生改变，是导致一些酶的星活性的主要原因之一，防止的办法是酶切反应体系中，将甘油的浓度控制在5％以下。 117.具有EcoR Ⅱ末端的外源片段只能以一个方向插入到EcoR Ⅱ末端的载体中。 118.从Esherichia coli K中分离的限制性内切核酸酶命名为 EcoK。
119.同一种限制性内切核酸酶切割靶 DNA，得
平末端和粘性末端的连接。
123.T4 DNA连接酶和E.coli连接酶都能催化双链 DNA和单链 DNA的连接。
124.反转录酶能够以单链RNA或单链 DNA为模
板，在引物的引发下合成一条互补的DNA链。以 RNA为模板合成的 DNA是互补DNA(complementaly DNA, cDNA)。若是以DNA模板合成 DNA，dNTP的掺人速度很低(约5个核苷酸／秒)，比 T7 DNA 聚合酶的合成速度差不多低100倍。
125.以RNA为模板，用反转录酶可同时产生单
链和双链的cDNA，双链 DNA是由自身引物引导合成。但这种自身引物引导的合成效率远低于外加寡核苷酸引物引导的合成。
126.Ba131核酸酶(Ba131 nuclease)是 Ca2+
依
赖性的，在反应混合物中加入 EDTA便可抑制它的活性。
127.λ外切核酸酶不能在双链 DNA的 gap和nick处切割 DNA。
128.当一个 DNA结合蛋白同它识别的核苷酸
序列结合以后，就保护了它们的磷酸二酯 键免遭切割，其结果，电泳胶上就有明显
可见的空缺带(与对照相比)，这就是 DNA 足迹法。
129.T4 DNA连接酶和E.coli连接酶作用时都
需要ATP和NAD+
作为辅助因子。
130.多核苷酸激酶之所以能够用于 DNA片段
的标记，是因为它能够将单个的
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P标记
的单核苷酸加到每一 DNA链的5’端。 131.在反转录过程中，使用 AMV比使用 M-MLV可得到较多的产物。
132.真核生物可能有两种DNA连接酶，连接酶
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Ⅰ和连接酶 Ⅱ都能在 DNA合成和连接中起作用。
133.DNA聚合酶Ⅰ有三种酶活性，其中3’→5’
外切核酸酶的活性在较多的dNTP存在 下，常被5’→3’合成酶的活性所掩盖。 134．用同一种酶切割载体和外源 DNA得到粘
性末端后，为防止它们自身环化，要用 CIP将它们脱磷酸。
135.λ外切核酸酶的作用产物可以作为末端转移酶的作用底物。
136.用外切酶Ⅲ作系列缺失突变时，可以从突出的3’端开始。
137.nick和gap的含义是不同的，前者指 DNA
的单链中有较小的缺失，后者仅是断开 了一个磷酸二酯键。
138.迄今发现的质粒 DNA都是环状的。 139.线性质粒同环状质粒一样都不带有宿主必需的基因。
140.有 a、b、c三个质粒，因为 a和 b能够
共存于一个细胞，a和 c也可共存于同一个细胞，所以 b和 c一定能够共存于同一个细胞。
141.插入元件(IS)也是一种转座元件，它除了
有转座酶基因外，还有附加基因。 142.如果两个不同的质粒可以稳定地共存于同
一个细胞中，这两种质粒则属于同一个不亲和群。
143.一个带有反向重复序列的双链 DNA经变性后，复性时其单链可形成发夹环。 144.能够在不同的宿主细胞中复制的质粒叫穿梭质粒。
145.任何一种质粒都可以用氯霉素扩增的方法，增加它的拷贝数。
146.只有完整的复制子才能进行独立复制，一
个失去了复制起点的复制子不能进行独立复制。
147．CsCl-EB密度梯度离心法纯化SC DNA原
理是根据 EB可以较多地插入到 SC DNA 中，因而沉降速度较快。
148．质粒 Co1El同 pSC101共整合后，得到重
组质粒 pSC134，具有两个复制起点，这两个起点在任何细胞中都是可以使用的。
149．pBR322可以用于粘性末端连接、平末端
连接和同聚物接尾法连接，无论用哪种方法连接，都可以用同一种酶回收外源片段。 150．所谓穿梭质粒载体是能够在两种以上的不
同宿主细胞中复制的质粒，所用的复制起点不同。
151.一般情况下，质粒既可以整合到染色体上，
也可以独立存在。
152. Co1El是唯一用作基因工程的自然质粒载
体，它具有四环素抗性标记，因而很容易选择。
153.某一染色体 DNA经内切酶Sal Ⅰ切割后，
产生了若干个具有粘性末端的 DNA片段，将这些片段分别在 T4 DNA连接酶的作用下自身连接成环，然后导人受体细胞，都可以进行独立地复制。
154．如果细菌的某种表型特征在UV处理下丧
失后不再恢复，这种表型有可能是质粒赋予的。
155．基因克隆中，低拷贝数的质粒载体是没有用的。
156.代型载体(replacement vector)是指同一
种限制性内切核酸酶在λDNA中具有两 个切点。外源 DNA通过取代这两个切点间的片段被克隆。
157．现在最常用的 pUC载体是 pUC18，它的
分子量小，具有多克隆位点和易于选择的分子标记，并且是松弛型复制。另外，这种载体可在辅助质粒的帮助下合成单链 DNA。
158.噬菌粒(phagemid)pUC118／pUC119载体
是集质粒和丝状噬菌体有利特征于一身 的载体，既能合成单链 DNA，又能合成双链 DNA。
159.λ噬菌体 DNA和 M13单链噬菌体 DNA在
成熟前的 DNA复制都是用滚环模型。 160.M13噬菌体每个世代裂解宿主后，可释放
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100个子代噬菌体。
161.以粘粒为载体的重组体虽然在平板上生长
的速度不同，但是转化子中插入片段的扩增量是相同的。
162.氯霉素扩增 DNA时，加氯霉素的时间是重
要的，因为加得太早，菌数不够，加入时间过迟，菌龄过老，容易自溶。 163．所谓引物就是同 DNA互补的一小段RNA分子。
164．脉冲凝胶电泳采用一个很强的电场来分
离非常长的DNA分子，其原理在于迫使 DNA分子根据长度的不同而具有不同的速度，并按大小顺序通过凝胶。 165．Agarose-EB电泳法分离纯化 CCC DNA原
理是根据 EB可以较多地插入到 CCC DNA 中，因而迁移速度较快。
166.如果 PCR的每一次循环都把上一次循环
中合成的 DNA都加了一倍，那么，10个循环就扩增了1000倍，20个循环就扩增了100万倍，30个循环就扩增了10亿倍。 167．PCR既能用于扩增任何天然存在的核苷酸
序列，又能重新设计任何天然核苷酸序列的两个末端。因此，任意两个天然存在的 DNA序列都能快速有效的扩增，并拼接在一起。
168．最有效的制备纯RNA的方法是让其在细胞
中超表达，然后提纯。
169．大量制备已被克隆基因编码蛋白产物的常用方法是体外转录和翻译。
170.通过报告基因与来自于目的基因上游和
下游各种 DNA片段的结合，研究基因的调控序列。
171.温度敏感突变型是非常有用的，在这些突
变型中，可以通过对温度的改变控制这些突变体中异常表型的出现。
172．用人工合成的含有所需碱基变化的寡聚核苷酸，可以将特殊突变引入克隆的基因。 173．蛋白质的氨基酸序列中各种重要信号都
可以通过短氨基酸序列同报告蛋白的融合进行研究。
174．简并引物是根据已知 DNA序列设计的引物群。
175．在 DNA贮存液中加一滴三氯甲烷，可防止真菌的污染。
176．密码的偏爱性是指不同种属的生物对简并密码具有不同的使用频率。
177．插入到质粒 DNA中的 EB可以用正丁醇抽提除去。
178．碱法和煮沸法分离质粒 DNA的原理是不相同的。
179．酚法和碱法分离质粒 DNA都要用溶菌酶破壁，但碱法用的溶菌酶的浓度要高。 180．外源基因(或 DNA片段)插入到某一基因内的位点后，这个基因不再有任何功能。 181．用不同的产生粘性末端的限制性内切核
酸酶分别切割载体和外源 DNA，得到的粘性末端是不亲和的粘性末端。
182.基因组 DNA文库是含有某一生物中全部DNA序列随机克隆的克隆群，而cDNA文库是含有某一生物中所有表达基因随机克隆的克隆群。
183.cDNA克隆较之基因组克隆最重要的优越性就是它们含有一个基因的完整序列。 184．通过差示杂交后制备的 cDNA文库使克隆
那些只在特定分化细胞中表达基因的机率大为提高。
185．在染色体步移中，可通过 DNA测序知道已到达所感兴趣的基因。
186．一旦有了一套已知顺序的基因组克隆，
通过从文库中获得覆盖目的突变基因所在基因组区的所有克隆，就可以进行染色体步移。
187．根据遗传连锁作图把基因定位在基因组中
是定位克隆的第一步，它为分离特定的人的基因提供了一个直接而快速的方法。 188.人工感受态和自然感受态细胞都能吸收线性和环状单链 DNA。
189.人工导入基因和正常染色体基因间的同源重组，可以发生基因置换。
190.为了保证重组 DNA分子在受体细胞中能
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够稳定地独立存在下来,通常用rec—r—m—
表型的细胞株作为受体菌。
191.线性 DNA片段被导人哺乳动物细胞后，在
细胞内酶的作用下，很快相互连接成重复的DNA大片段)并能在随机位点整合到染色体中。
192.不匹配的粘性末端是不能通过粘性末端连接的。
193.用限制性内切核酸酶切割载体、供体 DNA
后，要加入 EDTA—SDS中止液使限制性内切核酸酶失活，这样有利于重组连接。 194.限制性内切核酸酶BglⅡ识别的序列为 A
↓GATCT，BamHⅠ识别的序列为G↓GATCC，用它们分别切割载体 DNA和供体 DNA，不必使酶失活，就可以直接通过粘性末端连接法进行连接。
195.具有E.coR Ⅱ末端的外源片段只能以一
个方向插入到E.coR Ⅱ末端的载体中。 196.不匹配的粘性末端可以通过部分填补后进行连接。
197.低丰度的mRNA不仅拷贝数少，而且种类也少。
198.同聚物接尾法构建重组体，不仅连接效率高，而且也很容易回收插入的片段
199.以λ噬菌体为载体的筛选方法比较简便，凡能形成噬菌斑的就一定是重组体。 200.核酸杂交探针就是带有放射性标记的 DNA分子。
201.Northern杂交中，为了防止RNA形成部分
环状发夹结构，影响迁移率，所以要 用变性缓冲液进行电泳。
202．探针的离体标记实际上是酶法标记。 203．切口移位法(nick translation)只能标记线性双链 DNA不能标记环状双链 DNA。 204．通过原位菌落杂交得到的阳性克隆即是
重组体，但不能判断插入的外源基因是否进行了表达。
205．尼龙膜(nylon membrane)是核酸杂交的
一种固体支持物，具有同 DNA结合能力强、韧性强，可反复洗脱使用，并且杂交
信号本底低等优点，就是成本高。 206．如果 DNA序列的某种变异在群体中是稀
有的，称为突变；若是普遍的，则称为多态险。
207．用寡聚 DNA进行高度严紧的杂交可用于
胎儿遗传病的诊断，可检测到因单个核苷酸变化而造成的基因突变。
208.由于基因家族中成员之间是密切相关的，
因此可以用其中一个成员作为探针进行高度严紧的杂交来检测其他成员。 209．通过用化学标记法取代放射性标记法，
并采用一种抗体来特异性地识别这种化学修饰，使得原位杂交的分辨率大大提高。
210．在杂交之前先用凝胶电泳将粗提取物中
的RNA或 DNA分子进行分离，假定杂交后只有一种或少数几种大小的片段被探针杂交上了，就能肯定这种杂交是特异性的。
211．根据某一感兴趣蛋白质的序列、抗原性
以及配基结合性质制备探针，可从 DNA文库中筛选到相应的基因。
212.如果用其他的方法对某种蛋白质已进行
过鉴定，那么要确定某一克隆是否含有该蛋白编码基因就相当容易了。
213．用DNA探针进行杂交反应非常敏感并具
有选择性，可用来测定某一特定 DNA序列在细胞基因组中的拷贝数。
214．双重药物选择法富集哺乳动物细胞中稀
有重组体的原理是：一种药物用于选择以任意方式整合外源 DNA的细胞，第二种药物杀死带有随机整合 DNA的细胞。 215．就像对培养中的鼠胚性干细胞进行遗传
操作获得突变鼠一样，用 DNA转染培养中的单个植物细胞，能够创造转基因植物。
216．NC(硝酸纤维素膜)和尼龙膜都可作为电转
移 DNA支持物。
217．单克隆抗体是淋巴细胞和瘤细胞杂交后形
成的单个杂交瘤细胞经无性繁殖而产生的
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特异性抗体。
218．用免疫化学法筛选重组体不需要外源基因的表达。
219．用 DNA探针同RNA 分子杂交在测定一
已知基因在某一细胞中是否表达时是很有 用的，但不能用于检测转录起始位点、终止位点或内含子的位置。 220. 核酸杂交的原理是根据 DNA分子间互补。
221. 突出的3’末端或凹缺的3’末端都可以用Klenow大片段酶进行末端标记。
222．用多核苷酸激酶进行5’末端标记前， DNA必须进行脱磷酸，否则无法标记。
223. X-gal显色反应的基本原理是使载体上与受体互补的α肽失活。
224．Norhern印迹和 Southern印迹的基本原
理是一样的，都是用于检测结构基因的表达。
225. 在液相—液相和液相—固相杂交中，它
们的杂交效率都是一样的。
226.理论上自发突变是随机发生，并均匀分布
于基因组中。然而，精细分析表明，DNA中的某些位点较其他位点更易发生突变。这些“热点”突变是由于：( ) (a) DNA的空间结构选择性地使部分 DNA暴露在诱变因子的作用下
(b)存在可被进一步修饰(如脱氨基)的已
修饰碱基(如甲基化)，导致碱基转换并通过复制产生突变
(c)被修饰(如甲基化)碱基的存在，易于发生错配复制并因此产生突变
(d) DNA中富含 A—T区域的存在，使得自发解链及错配碱基的掺入
(e)对沉默突变的选择压力很低，因此热点多为密码子第三位的碱基 227.置换位点突变：( ) (a)并不改变所编码蛋白的序列 (b)比沉默位点突变更为经常 (c)与沉默位点突变的发生率相同 228.一种突变细菌从群落形态学(即表型)不能
与其野生型相区别，这一突变可能是：( ) (a)一个点突变
(b)一个无义突变或错义突变 (c)密码子第三个碱基的替换 (d)(a)和(b) (e)(a)和(c)
229.通过突变分析最终将“基因”确定为遗传
单位后，就必须从分子水平评价基因的功能。这一问题的成功解决是由于发现了：( )
(a)显性等位基因上的突变使其表型类似隐性基因
(b)突变基因不能编码产生存在于野生型个体中的蛋白质
(c)突变基因的蛋白产物与野生型基因的产物有差别
(d)营养缺陷型细菌只有经过致突变剂处理后才能在基本培养基上生长
(e)具突变表型的配子与野生型配子所形成的杂合子常表现为野生型表型
230.假设为了鉴别一个特定的基因，已经成功
的得到了一种可选择的细菌突变株。可是为了更具说服力，必须证明观测到的突变表型就是该基因突变导致的，可采取的方法是：( )
(a)用致突变剂处理细菌，并且分离一个回复野生型表型的突变体
(b)用携带突变基因的质粒转化突变株后不能回复为野生型，即不能得到反式互补 (c)用携带突变基因的质粒转化野生型菌
株后，不能产生突变表型，即不能得到反式互补
(d)用携载突变基因的质粒转化突变菌株后可以产生野生型表型，即可以反式互补
(e)用携载野生型基因的质粒转化突变菌株后可回复野生型表型，即可以反式互补 231．分析两种核酸分子的碱基组成。
（1）A=20% C=30% U=20% G=30%
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（2）A+G/T+C=1.5
这两种核酸分子的特点是什么？
232．原核生物基因表达的调控包括转录，转录后，转译，转译后四个水平的调控。
233．DNA分子的Tm值越小，Cot值就越小，Tm越大，Cot值也越大。
234．直接将cDNA转移到受体细胞内是不能表达的。
235．一个环状双链DNA分子，有8Kb长，用各种限制性内切酶酶切后电泳结果如图示，请判断这一环状DNA分子中各种内切酶的大体切点位置。 MW标记 8Kb 4Kb 2Kb
236. 从E. Coli trpi的菌株中，分离到两种
弱化子区的突变型。
ATTAc
E. coRI — Hind BamHI E+H B+H E+B III — — — — — — — 1）第30个dnt由变为
2）第134—140dnt发生缺失它们的表现型分别是 和 。 弱化子区域内有关的为 。
DNA
序列
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