酵母型菌落：细菌性菌落，但较大，光滑，湿润，柔软，边缘整齐，形成单个菌落，新生隐球菌形成白色或奶油色，粘稠菌落。
类酵母型菌落：念珠菌落，表面观察通细菌菌落，侧面观察有假菌丝伸入培养基，白念菌落形成奶油色菌落，有假菌丝形成。
丝状菌落：多细胞菌落，菌落各异，可呈绒毛状，棉絮状，粉状，并可产生不同色素。 石膏样毛癣菌：菌落粉末状或绒毛状，表面白色，背面褐色。 石膏样小孢子菌：菌落粉末状或绒毛状，表面白色，背面红棕色。
钩端螺旋体镀银染色示教片：
背景为淡黄褐色至棕黑色，可见钩端螺旋体染成棕褐色，钩体稍弯曲，一端或两端呈钩状弯曲，珍珠点状连接成S或C形螺旋体，螺旋不太清楚，表体整齐，粗细均匀。
梅毒螺旋体镀银染色示教片：
与钩端螺旋体呈色相似，有8~14个致密而规则的小螺旋，两端尖直。
回归热螺旋体姬姆萨染色示教片：
比红细胞长2~4倍的螺旋体，螺旋体为紫红色或红色，纤细柔软，有4～8个稀疏而不规则弯曲，呈波状。
牙垢涂片Fontana镀银染色法： （1）染色液配制：
①罗吉固定液：冰醋酸 1ml，甲醛液 2ml，蒸馏水 100ml ②鞣酸媒染液：鞣酸5g，石碳酸 1g，蒸馏水100ml ③Fontana银溶液：硝酸银5g，蒸馏水 100ml
临用前取Fontana银溶液20ml，逐滴加入100g/L氢氧化铵液，至产生棕色沉淀，经摇动后又能重新完全溶解，微现乳白色为适度。
（2）染色方法：
①在载玻片上滴加生理盐水一滴，用牙签取牙垢少许与盐水混匀做涂片。 ②待涂片干燥后，滴加固定液，1min，水冲洗。
③滴加媒染液，加温至有蒸气出现，作用 0.5min，水冲洗。 ④加硝酸银染液，微加温，约0.5min，水洗，待干后镜检。
结果：螺旋体染成棕褐色或黑褐色。 不染色标本直接检查： 制片： 用小镊子取甲屑或皮屑少许或病发一根，置于载玻片中央，滴加100～400g/L KOH溶液1～2滴。稍待片刻，盖上盖玻片，将载玻片放在火焰上方微加热，使组织或角质溶解，但切勿过热以免产生气泡或烤干。冷后，压紧盖玻片使溶解的组织分散并使其透明，驱除气泡并汲去周围溢液，避免沾污盖玻片。
显微镜检查：
先用低倍镜检查有无真菌菌丝或孢子，再以高倍镜检查菌丝、孢子的特征。镜检时用稍弱的光线使视野稍暗为宜。低倍镜下，菌丝呈折光性较强、绿色纤维分枝丝状体；高倍镜下，可见菌丝分隔或不同的孢子形态。
乳酸酚棉蓝染色：
制片与染色：取洁净载玻片一块，滴加一滴乳酸酚棉蓝染液，将被检标本放于染色液中，加上盖玻片（加热或不加热）后镜检。
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显微镜检查：真菌被染成蓝色。
墨汁负染色：
制片与染色：取一滴优质墨汁置于载玻片上与被检材料混合，盖上盖玻片于显微镜下观察。
显微镜检查：新生隐球菌为圆形或卵圆形酵母细胞，有芽生孢子，细胞外有一层胶质样荚膜，一般厚度与菌体相等。菌体和荚膜不着色，透亮，背景为黑色
观察菌丝和孢子： 有隔菌丝——镜检可发现细胞间有明显分隔，多为病原性真菌。 无隔菌丝——镜检看不到细胞间有分隔现象，是非致病性真菌。 球拍状、螺旋状、破梳状、鹿角状、结节状菌丝。
叶状孢子（芽生孢子、关节孢子、厚膜孢子），分生孢子（大分生孢子、小分生孢子），孢子囊孢子。 大分生孢子——见于石膏样小孢子菌或絮状表皮癣菌，是一种多细胞孢子，常为梭形或棍形，多数具有数个横隔，每个横隔为一个细胞。
小分生孢子——见于须毛癣菌或孢子丝菌，是一种单细胞孢子，常直接或由小侧枝连接而生长于菌丝的侧面，呈葡萄状或圆形。
真菌菌落观察（酵母型菌落、类酵母型菌落、丝状菌落）： 酵母型菌落——新型隐球菌，在沙氏培养基上，初代分离生长慢，菌落表面粘稠，乳白色→橘黄色→棕褐色，随着荚膜物质增多，菌落液化，可以流动。
类酵母型菌落——白色念珠菌，在沙氏培养基上，菌落灰白色或奶油色，表面光滑，乳酪样，带有浓厚的酵母气味，菌落无气生菌丝，仅有大量向下生长的营养假菌丝。
丝状菌落——石膏样小孢子菌，在沙氏培养基上，菌落呈白色绒球状或棉絮状。 申克孢子丝菌——二相性真菌，在沙氏培养基上，灰褐色膜状菌落，逐渐隆起，有皱褶。
芽管形成试验（白色念珠菌）：
方法：取无菌小试管一支，加入0.2ml动物或人血清，接种少量真菌，充分震荡混和数分钟后，置37℃孵育，每隔1h用接种环取出含菌血清置于载玻片上，加上盖玻片后镜检，共检查三次。 结果：白假丝酵母菌可由孢子长出短小芽管
病发标本检查：
将病发、皮屑、甲屑等放于载玻片，滴1滴10%NaOH溶液，覆加一盖玻片，置火焰上微微加热（往返数次），以加速角质溶解，使标本透明，放置10min，轻轻加压使成薄片，驱去气泡，吸去周围溢液，镜检。如为毛发标本，切忌加热加压过甚，以保持毛发原型为宜，便于观察真菌与毛发的关系。先在低倍镜下找到检查标本后，再以高倍镜观察。
（1）发外型：镜下可见孢子呈平行的链状排列或镶嵌状排列，构成白色菌鞘。
（2）发内型：菌丝与孢子产生于毛干的内部，如堇色毛癣菌在发内有大量纵轴排列的菌丝和大小不等的空泡存在，偶见孢子。
流感病毒血凝试验： 原理： 流感病毒表面的血凝素（HA）能与人“O”型红细胞、脊椎动物如豚鼠、鸡等的红细胞上的血凝素受体结合，引起红细胞凝集。在流感病毒悬液中加入特异性血清后，由于相应的抗体与HA结合，使其失去凝集作用，再加入人的“O”型血、鸡或豚鼠的红细胞则不再发生血凝现象，即为血凝抑制。此现象可作为病毒存在的指标及鉴定病毒，或测定患者血清中有无相应抗体。需取双份血清作两次试验，若恢复期血清抗体效价比早期高4倍以上，即有诊断意义。
血凝试验： 方法：
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l）取小试管9支，按表4-2各管加入生理盐水，第1管为0.9ml，其他各管均为0.25ml 。
2）取收获的尿囊液0.1ml，加入第1管中作1：10稀释，混匀后吸取0.5ml弃至消毒缸内，再吸取0.25ml（l：10）稀释液加至第2管混匀，从第2管中取出0.25ml置第3管混匀，依次作倍比稀释至第8管，混匀后自第8管中取出0.25ml弃掉。这样各管液体量均为0.25ml，从第1管至第8管的尿囊液稀释度为l：10，1：20??l：1280，第9管为生理盐水对照。
3）每管加入0.5％鸡红细胞悬液0.25ml，轻轻摇均后置室温45min，观察结果，观察时要轻拿、勿摇。
结果判断：
各管出现血细胞凝集程度用4＋、3＋、2＋、＋、一表示，以出现2十的病毒的最高稀释度为血凝效价。 4＋：血细胞全部凝集，凝集的血细胞铺满管底。
3＋：大部分血细胞凝集，在管底铺成薄膜状，但有少数血细胞不凝，在管底中心形成小红点。 2＋：约有半数血细胞凝集，在管底铺成薄膜，面积较小，不凝集的红细胞在管底中心聚成小圆点。
1＋：少数血细胞凝集，不凝集的红细胞在管底聚成小圆点，凝集的血细胞在小圆点周围围成小凝块。 －：血细胞不凝集，沉于管底，形成边缘整齐的致密圆点。
按上述结果举例的流感病毒的血凝效价为1：160，即病毒液稀释到1：160时，每0.25ml中含一个血凝单位，配制4个血凝单位时，病毒液应稀释成1：40。
流感病毒血细胞凝集试验 生理盐水 病毒液 1 2 3 4 5 6 7 8 9 0.9 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.1 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 （弃0.5） (弃0.25) 1:10 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 对照 各管0.25ml 摇匀，静置室温45min 4+ 4+ 4+ 3+ 2+ + — — — 病毒稀释液 0.5%鸡红细胞 结果举例 血凝抑制试验： 原理： 在流行性感冒病毒悬液中加入血清后，若病毒表面的血凝激素被特异性血凝激素抗体封闭，再加入人的“0”型、鸡或豚鼠的红细胞则不发生凝集现象，即为血凝抑制。试验中若用已知病毒的抗血清，可鉴定病毒型及亚型；若用已知病毒，则可测定患者血清中有无相应抗体 有定性试验和定量试验。 实验九 实验考试
实验考试内容及要求：
每位同学一份临床模拟标本（血液/尿液/粪便/脓液）
一、针对所给标本设计一个详细的分离、鉴定细菌的具体方案，包括分离、鉴定
的具体路线，实验所需的物品、器皿、培养基、试剂等。5分
二、用所给标本，涂片、革兰染色、油镜检查，并描述所见结果。5分
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三、针对所给标本进行实际的分离、鉴定，所有操作过程在实验室进行。10分 考试结束试卷和实验结果一同交给监考老师
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