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六、思考题
1.推断下列溶液的溶血反应会如何。
0.17 mol/L氯化钾、0.17 mol／L硝酸钾 0.12mol／L氯化镁、0.12 mol／L氯化钙、0.10 mol／L硫酸钾、0.10mol／L醋酸钾、0.10mol/L 柠檬酸钠、0.32 mol／L，甘露醇、0.32mol/L 蔗糖。
2.溶液的渗透压主要与哪些因素有关? 对简单盐溶液如何粗略计算出其渗透压?
实验四：细胞的凝集反应
一、 实验目的
学习研究细胞凝集反应的方法，了解细胞发生凝集反应的原因。
二 实验原理
凝集素是一类含糖、并能与糖专一结合的蛋白质，被认为与糖的运输、储存物质的积累、细胞间的互作以及细胞分裂的调控有关。凝集素使细胞凝集是因为它与细胞表面的糖分子连接，在细胞间形成“桥”的结果，加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞发生凝集。大多数凝集素存在于储藏器官中，作为一种氮源；对某些植物而言，受到危害时，凝集素作为一种防御蛋白发挥作用。凝集素与糖结合的活性及专一性决定其功能。
三、实验材料与用品
实验材料：马铃薯块茎，韭菜叶片。
试剂：(1)磷酸缓冲液：分别称取NaCl 7.2g、Na2HP04 1.48g、KH2P04 0.43g用蒸馏水溶解，混合后用蒸馏水定容至1000ml，用（NaOH）调pH值至7.2。
(2)生理盐水：0.9％氯化钠无菌水溶液
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(3)硫酸铵
(4)石英砂
仪器与器材：离心机，光学显微镜，研钵（2），药匙（2），纱布，离心管（7ml，2个），带刻度（2ml）滴管，25ml烧杯，玻璃棒，10ml量桶，载玻片，盖玻片，滤纸，吸水纸。
四、实验步骤：
1. 2%鸡血细胞制备：以无菌方法抽取鸡的静脉血液（含0.2％肝素钠）用生理盐水洗3次，每次1500r/min离心5min，最后按沉淀压积的红细胞体积加生理盐水配成2%鸡血细胞液。
2.马铃薯块茎：
(1)提取凝集素：称取马铃薯去皮块茎4g，加少许石英砂和磷酸缓冲液于研钵中研磨成匀浆，
最终加到5ml磷酸缓冲液，浸泡1.5 h，浸出的粗提液中含有可溶性马铃薯凝集素。
(2)测定血凝活性：用滴管吸取马铃薯凝集素粗提液和2%鸡血细胞液各一滴，置载玻片上，
充分混匀，静置10 min后于显微镜下观察细胞凝集现象。用一滴磷酸缓冲液和一滴2%鸡血细胞液混合作为对照观察。
3.韭菜叶片：
(1)取韭菜叶片5g用蒸馏水洗净剪碎，加少许石英砂和生理盐水于研钵中研磨成匀浆，最终
加到5ml生理盐水，砂布过滤，滤液倒入2个离心管，平衡后在5000r/min下离心20 min，弃沉淀,留上清液。
(2)上清液加相应硫酸铵至60%饱和度沉淀（见附录“不同饱和度硫酸胺沉淀蛋白质表”）,
边加入边用玻璃棒搅拌至完全溶解。5000r/min下离心20 min，沉淀用1ml磷酸缓冲液溶解。
(3)用滴管吸取韭菜凝集素提取液和2%鸡血细胞液各一滴, 置载玻片上，充分混匀，静置10
min后于光学显微镜下观察细胞凝集现象。
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五、结果与分析
绘图表示血细胞凝集现象，并说明原因。
六、思考题
1.植物细胞凝集素在鸡红细胞凝集过程中起什么作用？
2.哪些因素影响细胞凝集反应？
附录“不同饱和度硫酸胺沉淀蛋白质表”
实验五：诱导细胞融合——聚乙二醇法
一、实验目的
了解细胞融合的原理，初步掌握用PEG诱导细胞融合的方法。
二、实验原理
细胞融合，即在自然条件下或利用人工法 (生物的、物理的、化学的)，使两个或两个以上 的细胞合并成一个具有双核或多核细胞的过程。 人工诱导细胞融合始于20世纪50年代，并迅速成为一门新兴技术。由于不仅同种细胞可以融 合，种间远缘细胞也能融合，
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甚至于动植细胞也能合二为一，因此细胞融合技术目前较广泛应用 于细胞生物学、遗传学和医学研究等各个领域， 并且取得显著的成绩。
聚乙二醇(PEG)结构为： CH2(OH)-(CH20CH2)n-CH2OH，相对分子质量在2000-6000均可用作细胞融合剂。普遍认为聚乙二醇分子能改变各类细胞的膜结构，使两细胞接触点处质膜的脂类分子发生疏散和重组，由于两细胞接口处双分子层质膜的相互亲和以及彼此的表面张力作用，从而使细胞发生融合：细胞融合率是指在显微镜的一个视野内，已发生融合的细胞其细胞核总数与该视野内所有细胞(包括已融合的细胞)的细胞核总数之比，通常以百分比表示。
该方法的优点是：用法简单，容易获得融合体，融合效果好。
三、实验材料与用品 材料：鸡血红细胞。 试剂：
(1)Alsver液：葡萄糖2.05 g，柠檬酸钠 0.8 g，氯化钠0.42 g，用柠檬酸溶液调节pH值至7.2,最后用双蒸水定容至100 mL 即可。
(2)0.85％生理盐水：0.85g氯化钠溶于 100mL双蒸水中。
(3)GKN液：氯化钠8 g，氯化钾0.4 g， 磷酸氢二钠1.77g，磷酸二氢钠0.69g，葡萄糖2 g，酚红0.01 g，溶于1000mL双蒸水中。
(4)Ringer溶液：氯化钙0.25g，氯化钾 0.42g，氯化钠8.5g溶于1000mL蒸馏水中。
(5)Hanks液：氯化钙0.14g ,氯化钾 0.4g , 磷酸二氢钾0.06g ,氯化镁0.10g , 氯化钠8.0g ,碳酸氢钠0.35g , 七水磷酸氢二钠0.09g ,D-葡萄糖1.0g,酚红0.01g溶于100mL蒸馏水中。
(6)50％PEG混合液：称取少许PEG(Mw 4000)放人刻度离心管内，在沸水浴中加热， 使其溶化，待冷却至50℃时，加入预热至50℃ 的等体积的GKN液，混匀。注意使用前配制。
(7) 0.2%次甲基蓝
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仪器：显微镜，离心机，水浴箱，电炉， 量筒，离心管，注射器，试管，移液管，烧杯， 吸管，载玻片，盖玻片。
四、实验步骤
1.鸡血红细胞悬液的制备：用注射器吸入 1mL Alsver液后从鸡翼下静脉取鸡血2mL，注 入刻度离心管内，按照3：1(V／V)加入6mL Alsver液混匀，放入4℃冰箱内可保存3--4天。
2.取细胞悬液1mL，移人10mL离心管， 加入4mL0.85％生理盐水混匀。1500r／min离心5 min。
3.弃上清液(用吸管吸去)，加0.85％生理 盐水至5mL，混匀后1500r／min离心5min。
4.重复上述条件，再离心洗涤1次。
5.收集最后1次离心沉淀的血细胞，加入 适量的GKN液或Ringer溶液，按压积红细胞体积配成10％的红细胞悬液。
6.取悬液1mL到1个试管中，加入0.5～0.8 mL预热的50％PEG (慢慢沿着离心管壁逐滴加入,边加边轻摇离心管,使其混匀)， 37℃水浴中温浴2min；
7.缓慢加入Hanks液5ml以终止PEG的作用, 轻轻吹打混匀,37℃水浴中静止5min
8.1000r／min离心5min,去上清,指弹使细胞团分散.
9.取细胞悬液1滴滴于载玻片上，再加入0.2%次甲基蓝溶液1滴,染色3分钟盖上盖玻片,显微镜下观察细胞融合现象
10.进行多个视野的测定，统计细胞平均融合率。
五、结果与分析
1、绘制观察到的融合细胞图,计算观察到的细胞融合率。
2、试说明细胞融合的关键.
六、注意事项
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