时间分辨荧光免疫分析技术（TRFIA） 在乙肝两对半定量检测的临床意义
一、极大地提高了检测灵敏度
TRFIA检测HBsAg灵敏度可达到0.2ng/ml，而酶标（ELISA）检测HBsAg灵敏度是2ng/ml，也就是说血清中的HBsAg达到2ng/ml酶标才会呈阳性。 1、缩短急性乙肝HBsAg检测\窗口期\。
2、如病毒发生变异后，表达量较低，常规ELISA检测不出抗原，而TRFIA定量具有极高的灵敏度，可发现并极有可能检测出HBsAg和HBsAb。 3、可发现低浓度的HBsAg携带者。
特别是一些群体，如医护工作者、病人家属等，由于长期密切接触，但又非直接经血传播感染成急性乙肝，而是长期少量感染，并刺激机体产生一定的免疫力，可能呈低浓度感染，特别应当引起人们的足够重视，密切关注并采取措施防止发展成乙肝或慢性携带者。 二、动态观察疗效和病情监
疾病的发生、发展、疗效、预后是一个动态的变化过程，TRFIA定量检测乙肝\两对半\各标志物的浓度变化可对乙肝的病程、治疗、预后起一个全程动态检测的作用，能够为医生对病情疗效作出合理的解释提供依据，指导治疗。
1、定量分析HBsAg和HBsAb的浓度变化，可以预见急性乙肝是否处于恢复期。 如HBsAg浓度降低，HBsAb的浓度逐渐升高，可说明病情正在往恢复期发展。反之，HBsAg浓度处于较高水平或上升趋势，而HBsAb一直处于较低水平，则容易发展为慢性乙肝或携带者。
2、定量分析HBeAg和HBsAb的浓度变化，可以反映病情变化和治疗效果。
明确检测HBeAg向HBsAb转换的时期，即表现为HBeAg浓度下降和HBsAb浓度的升高的过程。
高浓度的HBeAg还可间接提示病毒处于高复制状态，具有较高的传染性。
高浓度的HBsAb 一方面提示病情的好转，而在某些时候（如肝功能指标很差）可能与肝坏死、肝硬化、肝癌有关。
3、HBsAb浓度的高低可以反映病毒感染的状态。
乙肝急性感染常呈现高浓度的HBsAb，恢复期浓度降低。慢性乙肝呈HBsAb持续高浓度。 低浓度的HBsAb一般为恢复期或既往感染。
4、有利于对慢性肝炎活动性和非活动性的判断。非活动性慢性乙肝各项指标相对稳定，活动性往往呈进行性变化。
三、血清HBV-DNA荧光定量PCR测定可以直接反映病毒复制状态，具有很多临床应用价值，但不能完全反映病毒复制静息期肝细胞内HBV病毒状态。HBV-DNA阴性并不完全代表体内HBV已被清除，结合\两对半\各项指标更能客观反映体内HBV病毒状态，正确判断预后和治疗。
四、HBsAb的定量测定能够对抗体是否真正具有\中和\的免疫力作出正确评价，对乙肝的预防起到监督作用。HBsAb的含量在10mIU/ml以上病人在用ELISA检测就可呈HBsAb\阳性\结果，但并不提示机体都一定具有免疫力，而HBsAb的含量在10 ～100mIU/ml之间的样本，定性虽为\阳性\，但此时机体以对HBV的免疫力弱，甚至不能预防HBV感染，仍有感染HBV的危险只有HBsAb的含量达到100mIU/ml以上。时才能确定具有抵抗HBV入侵的作用。HBsAb的含量越高，机体抵抗HBV入侵的能力越强，持续保护时间越长。作定量测定根据HBsAb的含量可判断机体对HBV的免疫状态及乙肝疫苗的免疫效果，HBsAb的含量较低，应该加强注射一针乙肝疫苗，使HBsAb的浓度提高起到保护作用。同时，乙肝疫苗接种后机体产生免疫力因个体差异而不同，有的可产生高浓度的抗体并持续数十年。而有的人产生的抗体浓度不是很高，且持续时间也不长，数年后就逐渐消失，这部分人应及时关注HBsAb浓度变化，必要时也应加强注射一针乙肝疫苗（但也有人认为机体在受到病毒感染时，会产生记忆反应，迅速提高免疫力）。因此定量测定对乙肝疫苗免疫力的评价和高危人群预防免疫具有重要意义，特别是在少年儿童预防乙肝方面。
时间分辨荧光免疫分析——乙肝定量检测的革命性突破高度的特异性——通过时间分辨、波长分辨技术，使检测的干扰本底为零。高度的敏感性——对标记物的解离增强技术，使特异性荧光增强100万倍，理论敏感度在所有定量检测方法中最高，最低检测浓度达10￣18mole。高度的准确性——检测的线性范围在各种定量检测方法中最宽，确保了其无与伦比的准确性。高度的稳定性——原子标记，确保了试剂及免疫反应的高度稳定性，使检测重复性极佳。时间分辨用于乙肝定量检测的临床意义：——极高的灵敏度，避免假阴性、假阳性，缩短诊断的窗口期，彻底免除判断弱阴弱阳的烦脑。——采用两步法，彻底消除HOKE现象（强阳性却出现阴性的结果）。——全面反映病毒复制及机体免疫反应的状态，动态观察疾病发展及治疗效果。——免疫接种问题。只有定量检测才能准确反映免疫接种成功与否。——结果准确、性价比高。乙肝检测的突破
TRFIA、EMIA、ELISA法检测HBV—M结果分析
广州市第一人民医院检验科（510180） 雷秀霞 陈小辉 徐邦牢 陈英姿
【摘要】
目的 比较MEIA、TRFIA、ELISA三种方法在测定HBV-M时结果的符合程度、灵敏度、特异性，了解TRFIA法测定HBV-M的准确性和可行性。
方法 分别用ELISA和TRFIA法测定170份随机血清样本乙肝两对半并计算结果符合率；用三种不同方法对56份强阳性或临界值血清作HBsAg、HBsAb、HBeAg三项指标测定。 结果 TRFIA、ELISA法测定170份随机样本HBV-M结果符合率较高，阴阳结果经配对资料的卡方检验，无显著性差异，P>0.05。但资料同时显示，对HBeAg为临界值的血清，TRFIA有1.92%的漏检率；ELISA有9.62%的漏检率，同时ELISA还易出现假阳性反应。 结论 TRFIA法测定HBV-M特异性、灵敏度及结果符合率较ELISA法高，TRFIA是定量的方法，可为临床疗效的观察及乙肝疫苗的接种提供依据。
关键词 时间分辨荧光免疫分析法 乙肝病毒标志物 微粒子酶免疫分析法 酶联免疫吸附试验
我国是乙型肝炎高感染的国家，据统计，全国人口10%以上为HBsAg携带者，乙型肝炎病毒的总感染率达35.5~61.1%，有报道[1]用目前常用的方法检测出HbsAg阴性的人群中，有11.0%HBV-DNA呈阳性反应，也就是说，常规的检测方法可能有11.0%的漏检率，究其原因主要是由于抗原含量低于现行方法的可检出水平。再者，传统的检测方法只能提供定性结果，最高也只能进行滴度的分析，放在临床使用上有一定的局限性，特别是在疗效观察和疫苗注射后抗体产生情况的观察上存在着明显的不足，故需要一种新的既灵敏快捷准确又不太昂贵的方法来填补这一缺陷，本实验用三种不同的方法检测了三种HBV-M（乙肝病毒标志物），旨在与同行探讨一下三种检测方法在日常工作中的可行性及相关性。现将实验结果报告如下。
1． 材料与方法
1．1 标本来源：检测血清标本均取自本院住院病人和门诊病人，共226例。 1．2 仪器和试剂 微粒子酶免疫分析法(MEIA)使用美国Abbott试剂和美国Abott公司AXSYM全自动酶免发光分析系统；ELISA法使用北京万泰药业公司生产的试剂；时间分辨荧光免疫分析法（Time-Resolved Fluoroimmunoassay 简称TRFIA）使用上海新波生物技术有限公司生产的ANYTEST2000型时间分辨荧光免疫检测系统及配套试剂。洗板机为北京天石医疗用品制作所ZMX-96III型自动酶标洗板机；酶标仪为奥地利CliniBio128C自动酶标仪。
1．3 检测方法：170份随机标本同时用TRFIA及ELISA法作乙肝两对半测定。56份强阳性或临界血清分别用TRFIA、ELISA、EMIA法检测HBsAg、HBsAb、HBeAg，严格按试剂、
仪器操作说明判断结果，专人操作。
2 结果
2．1 以美国Abbott试剂为标准，用ELISA、TRFIA两种不同方法测定56例强阳性或临界血清结果的相对灵敏度、相对特异性和结果符合率，结果见表1。
表1 以MEIA为标准ELISA、TRFIA法检测HBV-M结果的比较 检测项目 HBsAg TRFIA ELISA HBsAb TRFIA ELISA HBeAg TRFIA 94.44% 100% 98.08%(51/52) 0.5 2.1 .1从表1可见，ELISA、TRFIA法测定HBsAg以MEIA法为标准，其灵敏度和结果符合率都很高，而特异性TRFIA法则明显高于ELISA法（依次为100%，83.83%），说明ELISA法测HBsAg较易出现假阳性、假阴性反应。
2.1.2 TRFIA法测HBsAb灵敏度为100%，结果符合率为92%，高于ELISA法（95.35%和84%）。由于本项目实验选取的标本大多数为ELISA法弱阳性标本，阴性标本太少，故未作特异性计算。
2.1.3 TRFIA法测HBeAg灵敏度、特异性、结果符合率（依次为94.44%、100%、98.08%）均高于ELISA法（依次为76.47%、91.43%、88.46%）。ELISA、TRFIA法测临界值HBeAg均有不同程度的漏检，ELISA的漏检率为9.62%(5/52), TRFIA的漏检率为1.92%(1/52),ELISA法还出现5.77%(3/52)的假阳性结果。
2.1.4 三种方法阴阳结果经配对资料的卡方检验，均无显著性差异，P>0.05。 2.2 170份随机标本TRFIA与ELISA法测定结果符合率的比较见表2。 表2 TRFIA与ELISA法测定HBV-M结果的比较 检测项目 HBsAg HBsAb HBeAg HbeAb HBcAb 结果符合率 99.41%(169/170) 94.12%(160/170) 98.8%(168/170) 93.53%(159/170) 91.76%(156/170) X2 0 0.1 0.5 1.455 0.643 100% 76.47% __ 91.43% 92%(44/50) 84.62%(44/52) 2.7 0.57 97.82% 95.35% 100% __ 98.21%(55/56) 84%(42/50) 0 1.13 方法 ELISA 相对灵敏度 95.23% 相对特异性 83.33% 结果符合率 90.74%(49/54) X2 0.42 就随机样本而言，两方法的结果符合率均在90%以上，尤其HBsAg、HBeAg结果符合率达99.41%和98.8%，各检测项目阴阳性结果经配对资料卡方检验均无显著性差异，P＞0.05。