*备注：其它移植基质配比参照上述方法。 五、实验结果与分析
1．如何提高试管苗移栽成活率？
2．移栽后3周统计移栽的成活率，分析死亡的原因。
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实验五 多倍体植株的诱导
一、实验目的
1．了解人工诱导多倍体的原理，初步掌握用秋水仙素诱发植物多倍体植株的方法。
2．了解植物多倍体植株的鉴定方法。 二、实验原理
植物多倍体：每个细胞中的染色体数具有3整套或更多套数的植物。随着染色体组倍数的增加，有可能使一些作物的经济性状发生有利的变化。因此，植物多倍体的研究和利用是育种工作中值得重视的途径之一。
人工诱导多倍体的方法很多，分为物理的（温度剧变、机械损伤、各种射线处理等）和化学方法的（各种植物碱、麻醉剂、植物生长激素等）诱导方法。其中，秋水仙素是诱导多倍体的最有效的方法之一。秋水仙素是从百合科秋水仙属的一个种--秋水仙（Colchicum autumnale. L.）的器官和种子内提炼出来的一种植物碱。它的化学分子式为C22H25O6N。秋水仙素溶液的主要作用是抑制细胞分裂时纺锤体的形成，使染色体向两极的移动被阻止，而停留在分裂中期，但染色体的复制不受影响，这样细胞不能继续分裂，从而产生染色体数目加倍的核。若染色体加倍的细胞继续分裂，就形成多倍性的组织。由多倍性组织分化产生的性细胞，可通过有性繁殖方法把多倍体繁殖下去。如果将种子用秋水仙素浸渍，也可诱导多倍体植株产生。
鉴定多倍体可分直接鉴定和间接鉴定。直接鉴定是将经过秋水仙素溶液处理的根尖、茎尖进行染色体计数，多倍体植株的染色体是加倍的。间接鉴定是根据多倍体植株外部形态变化的主要特征是巨大性这一点提出的。从外部形态上加倍后生长的植株比二倍体高大，叶片肥厚。花粉粒和气孔的增大常作为染色体数目加倍的辅助性指标。 三、实验器具与药品
器材：显微镜、培养箱、水浴锅(60 ℃水浴)、载玻片、盖玻片、镊子、刀片、滴管，吸水纸。
材料：洋葱、水稻、蚕豆、西瓜、玉米、萝卜、青菜、芹菜、芫荽等种子。
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每实验组选择一种。
药品：秋水仙素，1mol／L HCl溶液 、改良苯酚品红溶液、95%酒精、冰醋酸。
四、实验内容与操作步骤
（一）秋水仙素溶液配制。取秋水仙素1 g（先用少量95%乙醇助溶），溶于250～500 ml蒸馏水中，配成浓度为0.2～0.4%的溶液，冰箱中保存。
（二）种子的处理。先将种子用0.1～0.2 %升汞消毒10分钟，清水洗净，置于培养皿或沙盘中发芽。用0.05%秋水仙素溶液分别浸种处理24、48、72小时，洗净秋水仙素，播种，观察形成的多倍体植株。要求统计不同处理时间后种子的萌发率、根数、根长、根粗和苗高、茎宽；种植后统计成苗率和多倍体诱导率。
（三）幼苗的处理。有些植物的种子耐药性差，可选择处理幼苗的方法。由于秋水仙素只对分裂细胞发生作用，可处理茎尖、侧芽或顶端生长点。如西瓜苗：当西瓜幼苗子叶展平时，每日早晚用0.4%浓度的药液滴浸生长点各一次，每次一滴，连续四天。以后长成的植株就是多倍体植株，得到种子后可进行染色体数目的鉴定。
（四）根尖染色体鉴定。对多倍体植株，开花后注意采集种子；按常规使其萌发，当根长1 cm时，取出洗净吸干，用0.2%秋水仙素溶液浸根处理24～36小时，根尖明显膨大时用固定液固定、制片、观察。
（五）观察气孔的大小。取多倍体植物叶片，用尖头镊子夹住切口部分，撕下一薄层下表皮，放在载片的水滴里，铺平，盖上盖片，制成表皮装片，然后镜检比较四倍体与二倍体气孔和保卫细胞的大小，用测微尺测量并记录。 （六）观察比较花粉粒的大小。从四倍体、二倍体植株上分别采集花粉，将采集到的花粉分别浸入45%冰醋酸中，用吸管分别各取一滴花粉粒悬浮液到载玻片上。滴上碘化钾溶液，盖上盖片，制成花粉粒装片。然后镜检四倍体及二倍体花粉粒的大小，用测微尺测量并记录。
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五、实验结果与分析
3-4周后观察植株生长情况，做好实验记录，统计多倍体植株诱导率并做分析。
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