4.3 吸液
—自适宜的容器中吸取待吸液体(对多道移液器而言我们建议使用Tip-Tub) —与恰当的吸嘴牢固连接(参照颜色标记) —1-10ml型号:使用配有滤芯的移液器 —按下控制钮至第一档
—执移液器将吸嘴浸入液面下约3mm。Research连续可调500-5000ul移液器约为5mm —使控制钮缓慢滑回原位
—Research连续可调500-5000ul和1-10ml移液器移出液面前略等待3秒 —缓慢提出移液器
—确保吸嘴外壁无液体 注意:
应用Research连续可调500-5000ul和1-10ml移液器时 如吸嘴移出液面过快将可能有液体溢出吸嘴, 造成移液量过低。
4.4 排液
— 将吸嘴以一定角度抵住试管或微孔板孔的内壁 — 缓慢将控制钮按至第一档并等待至无液体流下 — 将控制钮按至第二档使吸嘴完全排空 — 按住控制钮将吸嘴沿内壁向上拉 — 慢放控制钮
按压液器侧面的弹射键射出吸嘴
切勿在吸嘴中有液体时平置移液器,以防液体流入移液器!
4.5 特别注意
为达高精准度,我们建议使用新移液器吸嘴时反复吸、排2-3次。 将吸嘴离开液面,抵在容器内壁将吸嘴完全排空(吹出)。 解释:为什么移液器吸嘴需预先湿润?
对液体性质进行补偿:液体(血清、去污剂)会在吸嘴内壁形成一层薄膜,因此首次排出的液体量将过少。
当移血清或高黏度液体时,吸、排液时均应多等待数秒。
5 测试/调整
移液器的枪身号位于控制钮上。
5.1 测试
Research单道移液器:
体积<1ul时:建议采用分光光度计测试。若需要,我们可以提供有关“测试小量程的精确度的分光光度计测试”手册。
体积≥1ul时:对移液器的测试可通过在指定灵敏度的分析天平上称量双蒸水重量进行。 双蒸水、称量容器、移液器和移液器吸嘴须达同一温度! 计算液体体积时,用称量的双蒸水重量除以其密度(20°C时为0.9982)。 体积为1-10ul:
测试时采用干燥吸嘴自一盛满水的已称容器中吸出一定体积水的方法。 体积>10ul时:
用一预先湿润的吸嘴将双蒸水移入某一容器并称重。 Research多道移液器:
多道移液器通常采用一预先湿润的吸嘴将双蒸水移入某一容器并称重的方法进行测试。
5.2 调整
5.2.1 何时应进行调整?
Research 系列移液器在出厂前均经测试,测试条件如第2部分所述。 当对移液器准确性有疑问时,应注意以下几点:
— 移液器有无漏液?(此为移液量过少的原因之一)
— 样品温度?(在敞口的试管中,处于室温的水会有蒸发) — 移液器温度? — 空气温度?
— 是否已将ml换为ul? — 样品密度是否有别于水? — 移液速度是否过快?
在Eppendorf 的SOP(标准运行程序)里有这些问题的答案,若需要我公司可提供。
若这些检查不成功,则移液器调整已经被改变(例如一些部件已被替换)。
5.2.2 错误时的后续调整
从技术工艺角度而言这属于零点偏移。移液器设置值的偏移在整个量程中保持恒定不变。例如,对10-100ul移液器而言,如果100ul处的后续调整为1ul(=1%),则10ul处移液器仍应
调整1ul(=10%!)
a、移液器、吸嘴与水必须具有同等温度(20-25°C±0.5°C) b、调整移液器时,将移液器设定为指定移液体积
c、接吸嘴,移液并重复称量该液量10次(多道移液器应对每一道分别进行),计算平均值并按以下公式转换为ul:体积=重量/液体密度(在特定温度下),得到移液器实际应显示吸入的液体体积(在20°C时水的密度为0.9982)。
d、为调整液量显示,将扳手D端水平插入移液器把手的调整开孔内(图2-4)。(此操作时 应垂直握执移液器)旋转至垂直位。 e、Research连续可调及多道移液器
旋转调节钮时(不论方向为+或-),移液器活塞的位置会改变(尽管体积调节显示 未变)。旋转一圈对应以下体积:
Research连续可调移液器 Research多道移液器 0.1-2.5ul 0.5-10ul 约0.1ul 约0.5ul 0.5-10ul 10-100ul 约0.5ul 约5ul 2-20ul 30-300ul 约1ul 约10ul 10-100ul 约5ul 20-200ul 约10ul 100-1000ul 约50ul 500-5000ul 约250ul 1- 10ml 约510ul
Research固定量程移液器
若需减少体积,将调节钮顺时针旋转。若需增加体积,将调节钮逆时针旋转。
10ul 200ul 约0.8ul 约38ul 20ul 250ul 约0.8ul 约38ul
25ul 500ul 约4ul 约38ul 50ul 1000ul 约4ul 约38ul 100ul 约4ul
f、取下扳手,前后移动调节钮直至部件结合紧密
g、重复步骤c。读数应位于给出的技术参数的许可范围内。 若目标值与测量结果不符,重复步骤d和e。
由于这些调节会影响整个量程,必须检查技术数据所规定的移液器量程。 然后用现有的校准密封圈封上调节口。
5.2.3 对密度不同于水的液体进行移液的调整
对密度不同于水的液体可调整其在某一特定体积时吸液量等同于显示液量。
此时其他量程将无法再进行调整,意即该连续可调移液器变为固定量程移液器! 按5.2.2部分步骤a至g所述进行。
这样设置过的移液器移取的液体量和使用的液体以及测试体积密切相关。因此,我们建议给调整的移液器贴上用于“溶液y”的“固定体积”的标签。
具有高蒸汽压的液体(如有机溶剂)出现的错误无法用此方法进行调整。
6、维护/消毒 6.1 维护
根据使用的频率,所有的移液器应定期用肥皂水清洗或用60%的异丙醇消毒。再用双蒸水清洗并晾干。
密封圈是免维护的。在清洗或更换时应用包装中提供的硅树脂润滑油对活塞进行润滑。
对多道移液器,其下端的O形圈应在清洗后进行润滑,并用无麻布擦拭。损坏的O形圈必须更换。
拆开移液器后可将液体进入移液器所造成的污染物清除。
6.2 消毒
移液器的下半段可高温高压消毒(121°C,1bar,20分钟)。 将消毒部件在室温下晾干。在移液器完全冷却后再重新组装。 6.2.1 单道移液器
单道移液器的弹射套筒(1-12图)与移液器下半段(1-10图)可高温高压消毒。
操作时按住弹射键钮拔下弹射套筒,然后旋下移液器下半段(对1000ul移液器而言这可能需要在扳手的帮助下完成)。
可调量程 1-10ml
从吸头连接部件中拉出滤芯,高压灭菌过程中滤芯会有轻度膨胀,重新安装时需轻轻挤压,这样不影响移液功能,滤芯只能高压灭菌一次,向左旋把整个下半部从手柄旋松,不要同时旋转脱吸头套筒。脱吸头套筒在旋转时会在托架中自动脱落,从而在下半部中移出。 单道,可调量程 500-5000μl
在移液器下半部能被旋开以前,必须先移走活塞。
6.2.2 多道移液器
多道移液器的整个下半部分可高温高压消毒。 操作时按住弹射键钮,逆时针旋下移液器下半段。 所有Research移液器均可用紫外线照射。 任何可能的移液器褪色均不会影响其功能。
7. 疑难解答 错误 吸头内壁挂液 移液器漏夜或移液体积不准确 原因 -塑料内壁的不均匀浸润 -使用吸头的浸润性不好 -吸头太松 -使用了不配套的吸头 -所移液体的蒸气压大 500-5000μl/1-10ml移液器: -移液速度太快 -吸头从液体中移出速度过快 移液器漏夜: -活塞污染 -活塞损坏 -密封圈损坏 -移液器下部松动 多道移液器: -O型圈受损 -活塞污染 -密封圈污染 -溶液进入移液器内部 解决方案 -更换新吸头 -使用eppendorf原产吸头 -装紧吸头 -使用eppendorf原产吸头 -推荐使用活塞置换式移液器 -慢慢将控制钮滑回 -慢慢从液体中提起吸头 -清洁和润滑活塞 -更换活塞和密封圈(见B部分,维护) -更换所有的密封圈(见B部分,维护) 对500-5000μl和1-10ml型号,更换活塞( 见B部分,维护) -用手拧紧下半部 -更换损坏的O型圈(见B部分,维护) -清洁和润滑活塞 - 从移液器下半部移开活塞(见B部分,维护),用温水淋洗下半部,然后用双蒸水淋洗晾干。如有必要更换密封圈。 -从移液器下部卸下活塞,通风, 清洁和润滑活塞 控制按钮被卡,不能平滑移动
Eppendorf Reference?
移液器使用指南