六、实验结果
1、第I部分实验：
表I、目镜测微尺校正结果
物镜 物镜倍数 目镜测微尺格数 镜台测微尺格数 目镜测微尺每格代表长度（μm） 9.72 2.42 低倍镜 高倍镜 ×10 ×40 36 33 35 8 油镜 ×100 50 6 1.20 ?m）?公式：目镜测微尺每格长度（两重合线间镜台测微尺格数?10
两重合线间目镜测微尺格数表II-酿酒酵母的大小（所占目镜测微尺原始格数，油镜下）
菌个体项目 长（μm） 宽（μm） 1 6.00 3.60 2 4.80 3.60 3 6.00 3.60 平均值 5.60 3.60 标注：油镜下目镜测微尺的一小格为1.20μm 2、第II部分实验：
表III、血球计数板计数结果
中格 个数 1 13 2 15 3 12 4 9 5 11 A 60 B 5 公式：1ml菌液中的总菌数=A/5×25×104×B 所以：1ml菌液中酵母菌个数=1.5*10^7个
七、实验结果分析
1、校正目镜测微尺：
实验操作中，转动目镜，使目镜测微尺的刻度与镜台测微尺的刻度相平行，利用推进器移动镜台测微尺，使两尺在某一区域内两线完全重合，然后分别数出两重合线之间镜台测微尺和目镜测微尺所占的格数（可以将0刻度线对齐来看）。 对于10倍物镜，实验中观察到镜台测微尺的标线和目镜测微尺的标线差不多粗，比较便于找到重合线；对于40倍物镜和油镜，实验中观察到镜台测微尺的标线特别粗，尤其是在油镜下，此时要按照和较粗的标线中心重合标准来找。 对于不同的人来进行校正，可能结果不同，因为看到的重合线不同，但是一定要认真多看几遍。 2、测量菌体的长和宽：
测量菌体的长和宽，注意要选择视野中看到的形态大小最多的菌，然后测量多个菌的长和宽，然后取平均值，这样更精确。操作中，要转动目镜使标线和菌体边相切来测其长和宽，因为载物台及载玻片不可转动。 3、血细胞计数板
本次实验中，本小组的酵母菌培养液中酵母菌浓度比较大，在第一次计数观察中，看到一个小格中的菌体量很多，大致估计了一下后，直接用水稀释菌液5倍。操作为：先用滴管吸去1ml菌液置于一个干净的试管中，然后向这只试管中再加入4ml水，振荡混匀后即得到了稀释5倍的菌液。然后在进行血细胞计数板计数实验操作。
血细胞计数板计的是菌体总数量，包含死细胞和活细胞。如果想只计活细胞数量，则要进行平板涂布，培养后计菌落数，即为活菌数量。 4、分析影响显微计数实验的误差来源：
误差来源可能为样品没有摇匀。计数室内有气泡．读数因人而异。样品小室有液体流动，或器材上留有菌液，细胞识别错误等。同时也有可能是由于滴加的液体样品较少，没有充满样品市，在计数时计数室的 样品数不均匀，造成计数偏差。
5、对上述误差来源提出改进措施：
可采用的措施包括样品一定要摇均匀，如果有气泡就一定要重新做。而且，如果滴加菌液时不小心滴在了盖玻片上面，也要重做。读数时速度要快。所用器
材均应清洁干燥，应等样品在小室内液体稳定后再进行读数，并对细胞进行正确的识别。酵母菌的芽细胞均不计数。
八、实验注意事项
1、本实验中测菌体大小，要先进行单染色。
2、校正目镜测微尺，每次操作基本相同，只是在40倍镜和油镜下，镜台测微尺的分隔线较粗，应以对准较粗的线的中心为原则来寻找镜台测微尺和目镜测微尺的重合两线间的格数。
3、小心不要打碎目镜测微尺、镜台测微尺和血细胞计数板。 4、放置镜台测微尺注意凸面朝上；放置目镜测微尺也要注意正反面。 5、细菌在不同的生长时期细胞大小有时会有较大变化，所取的菌最好处于对数生长期。
6、在测量时，避免将极端大小的菌体纳入数据样本。在测量枯草芽孢杆菌时，由于菌之间有连接，要选取单个的菌体进行测量。
7、清洗血细胞计数板时，勿用刷子等硬物，也不应用酒精灯火焰烘烤计数板。 8、在计数时，每小格内有8个菌体（酵母菌为8个，细菌为15个）为宜，如果发现菌液太浓或太稀，需重新进行稀释。
9、根据观察视野中每小格中菌体数量来判断要稀释的倍数。
10、目镜测微尺很轻、很薄，在取放时应特别注意防止使其跌落而损坏。 11、观察时光线不宜过强，否则难以找到镜台测微尺的刻度；换高倍镜和油镜校正时，务必十分细心，防止接物镜压坏镜台测微尺和损坏镜头。
12、活细胞是透明的，因此在进行显微计数时应适当减低视野亮度，以增大反差。 13、进行显微计数时应先在低倍镜下寻找大方格的位置，找到计数室后将其移至视野中央，再换高倍镜观察和计数。 14、取样时先要摇匀菌液。 15、加样时计数室不可有气泡。
16、一般每个计数室选5个中格（4个角和中央）计数。 17、位于格线上的菌体一般数上不数下，数右不数左。
18、滴加菌液时，千万不要将菌液滴在盖玻片上面，否则影响计数结果。
19、从盖玻片和血细胞计数板向接触的边缘并偏一角处滴加菌液，看到菌液在对角线处出现，则说明小室已被菌液充满。
20、若视野中有出芽的酵母菌，芽细胞要么全计要么全部计，一般全不计，不要因为不同芽孢大小不同而有的计有的不计。
21、血球计数板使用完毕，用水冲洗干净，切勿用硬物洗刷，以免损坏网格刻度；洗净后自行晾干或吹风机吹干。 22、本实验只使用一个小室进行计数。
23、操作中，要转动目镜使标线和菌体边相切来测其长和宽，因为载物台及载玻片不可转动。
24、实验中观察时，注意转动细准焦螺旋，便于看清楚。 25、计数实验中，不可以选取相近的两个格。
26、血细胞计数板计数实验中，不要用吸水纸吸菌液，否则会对实验结果产生影响。
27、测量菌体大小的实验中，杆菌和椭圆形的菌测量长和宽，球菌测量直径。 28、实验结束后，整理实验器材，清洗并归位。
九、实验思考题
1、在某架显微镜下使用某一放大倍数的物镜，测得目镜测微尺的每个实际长度，当换用另一架显微镜用同样放大倍数的物镜时，该尺度是否还有效？为什么？ 答：无效，显微镜与显微镜之间目镜的放大倍数，或物镜的放大倍数间有一定误差。虽都标有10*或40*，但可能由于制造过程的误差，会出现不同的放大倍数，其次由于人眼观察造成误差，显微镜下两线平行并重合，会因不同人的观察时间的不同引起读数不一致，因此在第一次测得每格实际长度后，换一架显微镜即使为同样倍数的物镜，该尺度无效需要重新测量。
2、为什么更换不同放大倍数的目镜或物镜时，必须用镜台测微尺重新对目镜测微尺进行校正？
答：因为在不同放大倍数的目镜或物镜下，目镜测微尺每格代表的长度会发生变化。
3、根据你的实验体会，说明计数板的误差主要来自哪些方面？
答：计数板上残留着上一次计数的酵母菌；清洗计数板后没有晾干就再次使用；酵母菌液在稀释、分装过程中可能产生误差；溶液不均匀造成的误差；过多溶液渗入计数器，并且细胞沉积；统计组数有限造成的随机误差；计数的误差，如忽略体积较小的酵母菌、计算了很小的出芽、边缘细胞计数重复或漏记；滴加太多使得盖玻片飘起来，体积不准确，错误判断酵母芽体大小。 4、显微测微尺上的刻度大小和放大倍数会影响到测量结果吗?
答：刻度大小会影响，因为刻度大小和测量精度直接相关。如果一个酵母连一格都占不到，测量结果肯定不会准确；放大倍数也有影响，虽然理论上说，测定的结果应该是基本上相同的，因为真实值是不变的。但由于人眼的精度限制，在低倍物镜下观察到的菌体可能比较小，甚至都不到目镜测微尺一小格，这时测量的偏差会比较大。所以在实验中选用放大倍数比较大的物镜，在能清晰地观测菌体的情况下进行测量。
5、血细胞计数板计数实验中，为什么不能选取相邻近的两个格进行计数？ 答：因为在计数观察中，存在菌体压在两个格的分界线上的情况。对于这种情况，一般处理原则是上下两边和左右两边分别只计一边，如果是相邻的两个格，则不好处理压在边界线上的菌体。
6、血细胞计数板计数实验成功的关键是什么？
答：活细胞是透明的，因此在进行显微计数时应适当减低视野亮度，以增大反差；进行显微计数时应先在低倍镜下寻找大方格的位置，找到计数室后将其移至视野中央，再换高倍镜观察和计数。
十、实验小结
在本次实验中，我学会了很多东西。我认识了目镜测微尺、镜台测微尺以及血细胞计数板的结构并掌握了它们的用法及注意事项。并且，在实验中运用这些用具测量了酿酒酵母菌的大小并对酿酒酵母菌进行计数。实验顺利。
第I部分实验是测量菌体的大小，先校正目镜测微尺，再测定酵母菌的大小，而且必须使用同一台显微镜而且是同一物镜，因为换用物镜或显微镜都要再进行校正。第II部分实验是对菌液进行计数，实验较易产生误差，来源大致有：计数板上残留着上一次计数的酵母菌；清洗计数板后没有晾干就再次使用；酵母菌
液在稀释、分装过程中可能产生误差；溶液不均匀造成的误差；过多溶液渗入计数器，并且细胞沉积；统计组数有限造成的随机误差；计数的误差，如忽略体积较小的酵母菌、计算了很小的出芽、边缘细胞计数重复或漏记；滴加太多使得盖玻片飘起来，体积不准确，错误判断酵母芽体大小。实验中，要注意减少或避免这些误差。
在本次实验的操作中，有一些要注意的几点。测量大小时，要把目的细胞中心放在视野正中，这样调节目镜测微尺测量长短轴会很方便，并使细胞的一边与一条刻度尺相切，以减少读数误差。同时，调节观察显微计数时，要把聚光器调低，光线调暗，这样比较容易在一个焦平面上看到计数室和酵母细胞。计数过程中，可以调节细准焦螺旋，防止遗漏不同空间位置的细胞。吸取溶液前摇匀，可以用吸管吹吸几次再取。滴加菌液时不要太多，恰好渗入即可。
本次实验，我们小组认真按照老师的要求进行了测量和计数，结果不错。在接下来的实验中要再接再厉，认真做好每一次实验，掌握好每节课的实验知识、操作技术等，为以后的实验室工作打下良好的基础。
十一、参考文献
沈萍 陈向东.微生物实验[M].4版.高等教育出版社
十二、附录
酵母合成培养基配方
项目 酵母膏 葡萄糖 蛋白胨 水 pH 量 0.5g 2.0g 1.0g 100ml 自然